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中东呼吸综合征冠状病毒刺突蛋白受体结合区蛋白的原核表达纯化及鉴定: 2016年; 目的对中东呼吸综合征冠状病毒（MERS—CoV）刺突蛋白受体结合区（RBD）蛋白进行原核表达、纯化与鉴定及抗原性初步研究。方法人工合成密码子优化的MERS—CoVRBD编码基因，克隆至pET30a（＋）载体，构建重组表达质粒，转化至BL21（DE3）。利用IPTG诱导，探索优化表达条件，并用镍离子亲和层析纯化，SDS—PAGE和Westernblot进行鉴定，并采用间接ELISA对原核表达的RBD进行抗原活性和特异性初步分析。结果重组RBD蛋白主要以包涵体形式表达，以37℃0．5mmol／LIFFG诱导4h表达量最高；变性复性后纯化获得了较纯的重组RBD蛋白，相对分子质量大小约为29×10^3，与预期一致；Westernblot表明其能与感染MERS—CoV的小鼠血清发生特异性反应；间接ELISA显示原核表达RBD蛋白在检测正常和MERS—CoV感染患者血清方面表现出较好的抗原活性和特异性。结论本研究首次利用原核表达系统成功表达并纯化获得重组MERS—CoVRBD蛋白，为MERS—CoV的免疫学检测及疫苗学研究提供了基础。; 卢帅蓝佳明陈迎珠周剑芳秦堃楼永良谭文杰; 关键词：冠状病毒原核表达纯化

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温州医科大学检验医学院、生命科学学院医学病毒学研究所