天津科技大学化工与材料学院生物化工系
- 作品数：9 被引量：19H指数：3
- 相关机构：福州大学生物科学与工程学院福州大学生物科学与工程学院福建省海洋酶工程重点实验室更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划天津市高等学校科技发展基金计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- Pichia pastoris细胞的酶法水解
- 2017年
- 以工业酶制剂生产中的废弃毕赤酵母细胞为对象,研究并建立了酶法制备酵母浸出物的新工艺。新工艺为:10%(w/v)废弃毕赤酵母菌体中加入β-甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶和果胶酶,于50℃作用12 h;再加入中性蛋白酶,于50℃作用7 h;再加入DNA酶和RNA酶,于37℃作用4 h。离心收集上清液,真空冷冻(或喷雾)干燥获得酵母浸出物。运用这一技术,酵母细胞组分的溶出率达到66.2%,固形物收得率为65.7%。使用该研究制得的酵母浸出物培养重要工业微生物菌种,其支撑细胞生长繁殖的效果显著优于市售酵母粉。
- 张永杰牛丹丹吴海洋黄磊董自星刘晓光叶秀云路福平
- 关键词：酵母浸出物酶法制备毕赤酵母
- 重组聚半乳糖醛酸酶PGB的生化特征及其酶解产物活性分析
- 2017年
- 解析重组聚半乳糖醛酸酶PGB的酶学性质,研究PGB制备的果胶水解物的基本成分和生物学活性。通过摇瓶发酵制备聚半乳糖醛酸酶酶液,研究其基本酶学性质。再在最优作用条件下对果胶进行水解,并考察水解产物的组成、抗菌活性和抗氧化活性。在摇瓶发酵水平,黑曲霉聚半乳糖醛酸酶PGB的酶活达到10790 U/m L;该酶的最适作用温度和p H分别为55℃和5.0;在40℃或p H4.0~6.0条件下具有较好稳定性。Mg^(2+)和Cu^(2+)对其活性有促进作用,K^+、Ca^(2+)、Zn^(2+)、Mn^(2+)、Co^(2+)、Fe^(3+)和Fe^(2+)等对其活性均有不同程度的抑制作用;它对低酯果胶的K_m和V_(max)分别是0.756 mg/m L和9.225 mg/(m L·min)。高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)的分析表明,PGB对果胶的酶解产物是半乳糖醛酸单体和聚合度2~4为主的寡聚半乳糖醛酸,它对金黄色葡萄球菌的生长有显著抑制作用,其最小抑菌浓度和抗氧化活性分别为0.64 mg/m L和6.125 U/m L。
- 谌新然黄永生田康明田康明董自星刘晓光路福平路福平
- 关键词：生化特征果胶
- 地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶嗜碱突变体的特征分析被引量：3
- 2017年
- 地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶是工业上重要的蛋白酶类,进一步提高其在碱性条件下的活力可改善其在洗涤剂工业方面的应用价值。该研究通过筛选获得一种在碱性条件下酶活水平显著提高的地衣芽胞杆菌B186来源的蛋白酶,并在枯草芽胞杆菌WB600中对其编码基因进行了成功克隆与表达,获得了重组菌WB600(pHYE209)。然后通过离子交换色谱和凝胶层析法,从重组菌的发酵液中纯化获得了重组碱性蛋白酶AprE209。对酶学性质的研究表明,重组酶Apr E209的最适作用pH为11.0,最适作用温度为50℃,在30~37℃下和pH12.0时仍具有很高的活力。进一步通过生物信息学的手段对其耐碱机制进行了初步解析。该嗜碱突变体具有进一步用于洗涤剂的潜在研究价值。
- 黄磊董自星金鹏王正祥路福平
- 关键词：蛋白酶洗涤剂行业酶学特征
- 耐热异淀粉酶的高效表达及其在麦芽糖浆制备中的作用被引量：3
- 2016年
- 淀粉酶法制备高麦芽糖浆工艺中，淀粉液化酶、脱支酶以及β-淀粉酶不可或缺，其中脱支酶是决定淀粉转化为麦芽糖的转化率高低的关键因素。在工业上常用的两种脱支酶中，异淀粉酶比普鲁兰酶能更好地协助β-淀粉酶水解淀粉生成麦芽糖。首先通过PCR扩增获得异淀粉酶的编码基因iso并克隆入表达载体pHY—WZX，在枯草芽胞杆菌1A717中获得重组质粒pHY—ISO，将构建好的重组质粒电转化入地衣芽孢杆菌D402中，其摇瓶发酵酶活力达330U／mL，实现了异淀粉酶的异源高效表达。基本酶学特征分析表明：该重组酶适宜反应条件为50～55℃，pH6．5～9．0；K＋、Ca2＋、Mg2＋对酶活有促进作用，其他离子或化合物强烈抑制酶活。HPLC分析表明，该重组异淀粉酶与普鲁兰酶相比，更有助于极高麦芽糖浆的制备。最后通过在线软件对该酶进行同源结构模拟和分析，进一步确定其为异淀粉酶，为后续对其进行分子改造奠定了基础。
- 方安然牛丹丹乔舰吴海洋董自星路福平
- 关键词：异淀粉酶
- 黑曲霉果糖基水解酶的重组表达及酶学特征分析被引量：5
- 2017年
- 目的:果糖基转移酶在新型果糖基衍生品的制备过程中具有重要作用,获得酶活高、性能优良的果糖基水解酶是关键。方法:利用MEGA 4.0以及Clustal X2等软件对黑曲霉的基因组进行分析,遴选了5个果糖基水解酶基因,接着将它们在毕赤酵母中进行了克隆表达,并研究了重组酶的酶学性质。结果:在摇瓶水平上,重组酶Fru1和Fru5的酶活分别为1360和1560 U/m L,远高于目前已报道的果糖基水解酶的酶活。重组酶Fru1的最适反应温度和p H分别为45℃和5.5,EDTA对它有微弱的促进作用,Fe^(2+)、Na+、Co^(2+)、Cu^(2+)和Ca^(2+)会轻微地抑制酶活,该酶对蔗糖既有水解作用,又有转苷活性,还可以水解菊粉中的二糖到五糖;重组酶Fru5的最适反应温度和p H分别为50℃和5.0,Li^+、Na^+和EDTA对其酶活有促进作用,但Fe^(2+)则强烈抑制酶的活性,它还可以水解蔗糖以及菊粉中几乎所有的大分子糖。结论:本研究为果糖基水解酶的工业化生产及其在新型果糖基衍生品制备过程中的应用提供了可能途径。
- 董自星肖华王静培张志萌王君路福平
- 关键词：黑曲霉酶学性质
- 米曲霉β-半乳糖苷酶系的克隆表达与酶学特性分析被引量：3
- 2016年
- 摘要：本研究通过对米曲霉的3个β-半乳糖苷酶基因O158、AO及O76进行了克隆与表达，成功构建了相应的重组菌GS115（pPIC－0158）、GS115（pPIC—AO）和GS115（pPIC－076），并获得相应的重组酶。进一步分析发现，重组酶O158、AO和O76的最适作用pH分别为4．0、5．5和7．0；最适作用温度均为50℃；在pH5．0～7．5之间或30—40℃均较为稳定。Mn^2＋对重组酶O158、AO和O76有明显的激活作用，而Fe^2＋、Cu^2＋和Zn^2-则强烈抑制它们的酶活。O158、AO和O76只对乳糖具有水解与转苷活性，而且AO对乳糖的亲和力和催化效率均高于O158和O76。此外，在所试米曲霉菌种中不存在参照基因组中的β-半乳糖苷酶基因O42。本文系统地对米曲霉的3个β-半乳糖苷酶进行了异源表达及酶学性质的研究，为其大规模生产及工业化应用奠定了基础。
- 董自星贾超王君路福平王正祥
- 关键词：米曲霉Β-半乳糖苷酶分子克隆酶学性质
- 代谢工程大肠杆菌高效利用甘油合成丁二酸被引量：2
- 2018年
- 为了构建高产丁二酸的重组大肠杆菌,以删除了乙酸激酶和磷酸乙酰转移酶基因(ackA-pta)、乳酸脱氢酶基因(ldhA)和丙酮酸甲酸裂解酶基因(pflB)的大肠杆菌CICIM B0013-025为出发菌株,将其磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(ppc)基因的启动子替换为温度诱导的λ噬菌体启动子P_L-P_R,获得温度调控型的丁二酸合成菌株B0013-026。继而通过发酵条件优化,建立了两阶段发酵法:菌株的生长温度和诱导温度分别为37和42℃,以甘油为碳源并添加入5 g/L蛋白胨,发酵产酸阶段在微供氧(100 r/min)条件下进行。在5 L发酵罐中采用最优条件进行发酵,丁二酸的产量、生产强度和甘油转化率分别为62.5 g/L、1.04 g/(L·h)和64.2%,而且发酵液中仅有少量的α-酮戊二酸(3.0 g/L)和乙酸(1.8 g/L)等副产物积累,实现了以甘油为唯一碳源高效合成丁二酸,为其工业化生产提供了重要参考。
- 李卓亚王杰田康明董自星金鹏刘晓光王正祥
- 关键词：丁二酸大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶
- 大豆胰蛋白酶抑制剂的异源表达与生化特性解析被引量：1
- 2018年
- 本文对一疑似大豆胰蛋白酶抑制剂(STI;sti)的开放阅读框在毕赤酵母中进行了克隆表达与生化特性分析。结果表明,在摇瓶水平上,重组菌GS115(p PIC-STI)分泌表达了30 mg/L STI;重组STI在(40～80)℃或pH 2.0～11.0孵育1 h后,仍能保持85%以上的抑制活性;K^+、Zn^(2+)和Mg^(2+)对其胰酶抑制活性有明显的激活作用,而Cu^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Fe^(2+)和Fe^(3+)则有明显的抑制作用;重组STI对胰蛋白酶具有较强的、专一性的和非竞争性的抑制作用,是一种典型的多肽类胰酶抑制剂。良好的酶学性质使STI在食品、医药等行业具有潜在的应用价值。
- 张燕青王鑫宋鹏董自星田康明金鹏刘晓光王正祥
- 关键词：大豆胰蛋白酶抑制剂异源表达生化特性
- 黑曲霉单宁酶TahA的克隆表达和酶学特性解析被引量：2
- 2018年
- 单宁酶在茶饮料和医药等行业的应用受到了许多因素的限制,包括酶学性质研究的缺乏和较高的生产成本等。为此,该研究通过基因工程技术将黑曲霉CICIM F0510的单宁酶基因tah A在毕赤酵母中进行了克隆表达,构建获得了重组酶GS115 (pPIC-tahA)。摇瓶水平上,重组菌的单宁酶酶活为1. 04 U/mL。酶学性质的解析表明,重组酶TahA的最适作用温度和pH值分别为30℃和4. 5;分别在20～50℃和pH值3. 5～5. 0孵育1 h和2 h后,TahA的相对酶活仍能保持在60%以上; Cu^(2+)、Mn^(2+)和K^+对重组酶的活性有明显的促进作用,而Co^(2+)、Fe^(3+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)、Sn^(2+)、EDTA和SDS对其酶活有不同程度的抑制作用;以没食子酸甲酯为底物时,重组酶的Vmax和Km值分别为0. 436μmol/(mL·min)和5. 143 mmol/L。此外,该重组酶还可以水解茶叶提取物中的酯型儿茶素。这些良好的生化特征为重组单宁酶TahA在茶饮料行业中的应用奠定了坚实的基础。
- 李梦迪张志萌董自星田康明金鹏刘晓光王正祥
- 关键词：单宁酶分子克隆酶学特征茶饮料
