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不同胎龄小鼠脑组织中神经干细胞所占比例的研究被引量：3: 2017年; 目的详细了解并比较不同胎龄小鼠全脑和大脑皮层组织中神经干细胞(neural stem cells,NSCs)所占比例,为后期优化分离培养NSCs提供直接量化数据。方法分离不同胎龄小鼠全脑(胎龄12.5、14、16和18d)和大脑皮层(胎龄14、16和18 d)组织,消化成单细胞悬液,贴壁培养3~4 h,细胞免疫荧光标记NSCs特异性标记物Nestin,统计分析各组中NSCs所占比例。另外,通过实时荧光定量PCR技术检测Nestin mRNA在不同胎龄(12.5、14、16和18 d)小鼠大脑皮层中的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,分离培养的不同胎龄小鼠全脑和大脑皮层组织中均有Nestin阳性细胞。在分离培养的小鼠全脑组织中胎龄12.5 d组NSCs所占比例最高,为53.42%±1.57%;胎龄18 d组NSCs所占比例最低,为25.96%±1.31%,而胎龄14 d组和16 d组位于二者之间。在分离培养的不同胎龄小鼠大脑皮层组织中,胎龄14 d组NSCs所占比例最高,为33.65%±0.29%;胎龄18d组比例最低,为25.29%±0.28%,胎龄16 d组位于二者之间(26.82%±0.30%)。实时荧光定量PCR结果显示,当把胎龄12.5 d组的小鼠大脑皮层组织中Nestin mRNA表达水平设定为1,胎龄14 d组的小鼠大脑皮层组织中Nestin mRNA的相对表达量为0.83±0.04,胎龄16 d组为0.77±0.05,胎龄18 d组为0.44±0.05。因此,随着小鼠胎龄增加,小鼠大脑皮层中的Nestin mRNA的表达水平逐渐下降。结论在小鼠大脑发育过程中,随着胎龄增加,分离培养的小鼠全脑和大脑皮层组织中神经干细胞比例逐渐降低。; 张凤兰杨璐军朱红梅张南炀沙学芳朱柯颖肖志成; 关键词：小鼠不同胎龄神经干细胞全脑大脑皮层

人参皂苷Rg3对体外培养小鼠神经干细胞增殖的影响被引量：2: 2018年; 目的研究人参皂苷Rg3对体外培养小鼠神经干细胞(NSCs)增殖的影响.方法分离培养胎鼠NSCs,使用神经球悬浮培养法传代,特异性抗体Nestin和Sox2鉴定NSCs.采用Brd U标记法和CCK-8法检测不同浓度Rg3(20 n M、50 n M、250 n M和500 n M)对NSCs增殖的影响.结果传代2次后的神经球几乎全为Nestin/Sox2免疫荧光双阳性细胞,表明其为纯度较高的NSCs.Brd U标记法表明与对照组、20 n M组、250 n M组和500 n M组相比,50 n MRg3组Brd U阳性细胞相对比率最高,差异有统计学意义(P<0.01),但其他各组之间差异无统计学意义(P>0.05).CCK-8法检测,结果显示50 n M Rg3在450 nm处吸光值最高,且与对照组(P<0.01)、20 n M组(P<0.05)和500 n M组相比,差异有统计学意义(P<0.01),但其他各组之间无统计学差异(P>0.05).结论人参皂苷Rg3能促进体外培养小鼠NSCs的增殖,且其最佳浓度是50 n M.; 张凤兰赵瑜袁婧杨璐军鲁琳; 关键词：神经干细胞人参皂苷RG3 增殖 BRDU CCK-8

不同分化时间对体外培养大脑皮层神经干细胞分化的影响被引量：1: 2017年; 目的研究不同分化时间对体外单层贴壁培养的大脑皮层神经干细胞（NSCs）分化成星形胶质细胞和神经元的影响。方法（1）体外分离、培养胎鼠大脑皮层原代NSCs，采用细胞免疫荧光染色检测P2代神经球和吹散成单细胞的NSCs中巢蛋白、Sox2的表达；（21取P2代神经球吹散成单细胞，接种于圆玻片上培养过夜，次日更换诱导分化培养基，分别继续培养ld、3d、5d，采用细胞免疫荧光染色检测细胞神经胶质纤维酸性蛋白（GFAPl、Tuj1的表达，分析神经元突起的平均数量、平均最长长度和平均分枝水平；（31取接种于12孔细胞培养板上的NSCs分化样品，采用实时荧光定量PCR检测NSCs不同分化时间点巢蛋白、GFAP、TujlmRNA的表达。结果（11细胞免疫荧光染色检测显示神经球、单层贴壁培养细胞几乎均为巢蛋白和Sox2双阳性细胞，说明培养的细胞几乎全部是NSCs。（21分化3d组、分化5d组NSCs中GFAP’细胞比例高于分化ld组，分化5d组NSCs中Tuil’细胞比例高于分化1d组、分化3d组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；分化3d组、分化5d组所分化神经元突起的平均数量、平均分枝水平均高于分化1d组，差异有统计学意义（氏0．051；分化1d组、分化3d组、分化5d组所分化神经元突起的平均最长长度依次增加，差异有统计学意义（P〈0．05）；（3）与分化1d组、分化3d组比较，分化5d组NSCs中巢蛋白mRNA的表达降低，GFAP、TujlmRNA的表达增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论随着分化时间的增加，体外单层贴壁培养的NSCs分化出的星形胶质细胞和神经元的数量增多，细胞形态变复杂，神经元突起也越来越成熟，巢蛋白mRNA的表达降低，GFAP和Tuj1 mRNA的表达上升。; 张凤兰杨璐军法志强肖志成; 关键词：神经干细胞细胞分化星形胶质细胞神经元

人参皂苷Rg3对体外培养小鼠神经干细胞分化的影响被引量：6: 2018年; 背景:神经干细胞来源非常有限,而且在自然分化过程中绝大多数分化为神经胶质细胞,分化为神经元的比例相对较少,因此采取有效措施诱导其向合适的子细胞方向分化是非常重要的科研课题。以往研究证明人参皂苷类成分,如Rb1和Rg1,对神经干细胞的定向分化有一定影响,但Rg3是否对神经干细胞的分化起作用鲜有报道。目的:研究人参皂苷Rg3对小鼠神经干细胞分化为神经元和星形胶质细胞的影响。方法:分离孕14 d的C57BL/6小鼠的胎鼠大脑皮质神经干细胞并传代培养,用神经干细胞特异性免疫抗体Nestin和Sox2检测神经干细胞纯度。用分化培养基联合人参皂苷Rg3(空白对照、50 nmol/L和250 nmol/L)诱导神经干细胞分化3 d,然后用神经元特异性免疫抗体Tuj1和星形胶质细胞特异性免疫抗体GFAP检测神经干细胞分化为神经元和星形胶质细胞的情况,计算Tuj1^+/DAPI和GFAP^+/DAPI的比例;通过实时荧光定量PCR技术检测各组细胞Tuj1和GFAP mRNA的表达水平。结果与结论:(1)经细胞免疫荧光实验检测传代培养的小鼠胎鼠细胞几乎全为Nestin和Sox2双阳性细胞,表明成功分离培养出纯度较高的神经干细胞,可以用于后期实验;(2)诱导分化3 d后,与空白对照组和250 nmol/L人参皂苷Rg3组相比,50 nmol/L人参皂苷Rg3组对神经干细胞分化为神经元具有明显促进作用(P<0.01),而空白对照组和250 nmol/L人参皂苷Rg3组之间差异无显著性意义(P>0.05);(3)诱导分化3 d后,与空白对照组相比,50 nmol/L人参皂苷Rg3组和250 nmol/L人参皂苷Rg3组对神经干细胞分化为星形胶质细胞具有促进作用(P<0.05),而50 nmol/L人参皂苷Rg3组和250 nmol/L人参皂苷Rg3组之间差异不明显(P>0.05);(4)real time PCR结果总体与细胞免疫荧光结果相似;(5)结果表明,人参皂苷Rg3在50 nmol/L浓度时能明显促进神经干细胞向神经元和星形胶质细胞方向分化;但在250 nmol/L浓度时主要促进; 张凤兰杨璐军胡炜彦周姣月马生霞肖志成; 关键词：人参皂苷RG3 神经干细胞分化神经元星形胶质细胞干细胞

MiRNAs在成体神经发生中的作用被引量：1: 2021年; 成年哺乳动物大脑仍然能够产生新生神经元的发现点燃了一个新的研究领域——神经发生。目前认为研究成年后的神经发生对进一步了解大脑功能和衰老,脑肿瘤、神经系统退行性疾病的发病机制和治疗,中枢神经系统的损伤修复等均具有重要的意义。成体神经发生是一个复杂的多步骤过程,每个阶段都受细胞内在基因表达程序和细胞外微环境因素的精细调控。越来越多的证据表明miRNAs代表了一类转录后基因表达调控因子,是控制成体神经发生的基因调控网络的重要组成部分。; 朱红梅张凤兰(综述)戴海龙; 关键词：MIRNA 啮齿类动物基因调控

淀粉样前体蛋白在神经发生中的作用与阿尔茨海默病关系的研究进展被引量：1: 2017年; 阿尔茨海默病,俗称老年痴呆,由德国外科医生Alzheimer首次发现,是一种进行性发展、致死性神经系统退行性疾病。该病是目前最常见的一种失智症(俗称痴呆症,Dementia),但这种失智不同于正常老化。迄今为止AD具体的发病机制仍未明确、也没有精准的早期筛查和诊断手段及有效控制病情的治疗方法。近年来大量研究证实成年哺乳动物的中枢神经系统终身存在着神经发生。这为脑损伤和神经系统变性疾病的治疗带来了希望。文章将对成年中枢神经系统神经发生的过程及参与AD病程的关键分子APP在神经发生方面的最新发现进行综述,以期为本领域或相关研究提供借鉴或参考。; 朱红梅张凤兰肖志成陈芳; 关键词：淀粉样前体蛋白神经发生阿尔茨海默病

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昆明医科大学分子临床医学研究院云南省干细胞和再生医学重点实验室

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