中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室 作品数:49 被引量:160 H指数:6 相关作者: 赵建勇 宋帅 薛霜 李菁 丛国政 更多>> 相关机构: 甘肃农业大学动物医学院 宁夏大学农学院 长江大学动物科学学院 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 国家重点基础研究发展计划 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 更多>>
口疮病毒ORFV125蛋白抑制宿主细胞凋亡的研究 2018年 分析显示,口疮病毒(ORFV)125蛋白的3D结构及其结构域与Bcl-2家族蛋白高度相似。为了探索ORFV125蛋白是否具有Bcl-2蛋白的抑制细胞凋亡作用,本研究通过构建ORFV125基因单个结构域突变体质粒BH1、BH2、BH3、BH4和缺失BH1、BH2、BH3、BH4结构域的突变体质粒,分别将不同质粒分别转染到293T细胞后培养24 h和72 h时通过流式细胞仪检测对细胞凋亡的作用。结果,在转染质粒的细胞培养到第24小时的细胞早期凋亡率低于5%,细胞晚期凋亡率低于6%;在转染质粒的细胞培养到第72小时的细胞早期凋亡率高于20%,细胞晚期凋亡率低于4%;而在同一时间点比较,各个的突变体之间的凋亡效果没有显著性差异。以上结果表明,ORFV125蛋白及其突变体具有抑制凋亡的作用,但随着凋亡时间的持续凋亡效果更加明显,这为进一步开展ORFV125蛋白的研究提供了实验基础。 彭建伟 田宏 田宏 蔡葵蒸 蔡葵蒸关键词:绵羊 山羊 突变体 细胞凋亡 SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1及其C端的表达、纯化和反应原性分析 被引量:3 2010年 目的:表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端,进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法:以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板,设计特异性引物,扩增VPl基因及其C端编码区,然后将该其分别克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导,以金属离子螯合层析法对表达的VPl、VP1C端融合蛋白进行纯化,经Westernblot对其反应原性进行分析。用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价。结果:实现了SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端的高效表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS—PAGE显示纯化的目的蛋白分别在相对分子质量35000和19000处有单一目的条带,具有较高的纯度。Western blot结果显示,纯化的VP1及其C端均可与牛SAT2型FMDV阳性血清反应,而与阴性对照血清无交叉反应。结论:用纯化的VPl及VP1C融合蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1:12800以上,具有较高的特异性。 高闪电 常惠芸 独军政 邵军军 丛国正 林彤 韩雪清 谢庆阁关键词:原核表达 A型口蹄疫病毒型特异性抗原的可溶性原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:1 2010年 目的可溶性表达A型口蹄疫病毒型特异性结构蛋白VP1,制备型特异性的兔抗A型FMDV VP1多克隆抗体。方法以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-AVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有OmpT信号肽编码序列的VP1基因编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建可溶性原核表达载体pET-30a-OmpT-AVP1。将该重组质粒转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,以金属离子螯合层析法对可溶性表达的VP1融合蛋白进行纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA、Western blot和间接免疫荧光法分别对多克隆抗体进行鉴定。结果 SDS-PAGE电泳分析显示pET-30a-OmpT-AVP1重组菌经诱导后表达一Mr约为33 000的VP1融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带。Western blot分析结果显示,VP1蛋白可与豚鼠抗A型口蹄疫病毒阳性血清反应。用纯化VP1蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12 800以上,具有较高的型特异性,并且可与同型FMDV细胞培养物中的病毒抗原发生反应。结论制备了具有高亲和性和特异性的兔抗A型FMDV结构蛋白VP1多克隆抗体,为A型FMDV易感动物的抗体筛查及病原鉴定奠定了基础。 高闪电 常惠芸 独军政 丛国正 邵军军 林彤关键词:A型口蹄疫病毒 原核表达 可溶性 口蹄疫病毒免疫逃避机制研究进展 被引量:1 2011年 口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种剧烈的接触传染性疾病。病毒可以进化出不同的方法逃避机体免疫系统的清除,处于一种潜在感染状态,这种现象叫做免疫逃避。免疫逃避可以阻断机体的先天性免疫应答以及获得性免疫应答,这主要是通过诱导免疫细胞凋亡、抑制免疫效应分子功能、抑制抗原呈递实现的。全面深入地研究口蹄疫发病及免疫机制将有助于高保护力疫苗的研制,同时为口蹄疫的生物疗法提供可能。 马延滨 高闪电 丛国正 常惠芸关键词:FMDV 免疫抑制 细胞凋亡 免疫逃避 口蹄疫病毒抗原位点研究进展 被引量:9 2005年 抗原位点是在空间结构上相互独立的蛋白结构域,并决定了蛋白的抗原特性。口蹄疫病毒有A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型7个血清型,口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂,不同的血清型有着不同的抗原位点,并且存在广泛的抗原变异。对口蹄疫病毒的抗原位点进行分析一直是口蹄疫病毒研究领域中的热点,该研究将有助于了解病毒的致病机理和推动新型疫苗的研制。文章对病毒的基本特性、抗原位点的研究方法和研究概况做一综述。 吴海波 邵军军 常惠芸关键词:口蹄疫病毒 抗原位点 Expression,Purification and Activity Detection of VP1 of A-type FMDV 被引量:4 2010年 [Objective] The research aimed to induce the expression of FMDV structural protein VP1 in E.coli and purify the protein,then detect the activity.[Method] The fragment coding VP1 was amplified by PCR and doubly digested with BamH Ⅰ and XhoⅠ,then cloned into expression vector pGEX-4T-1 and pPROExHTb respectively to get recombinant plasmid pGEX-4T-1-VP1 and pPROExHTb-VP1.The recombinant plasmid pGEX-4T-1-VP1 and pPROExHTb-VP1 was transformed into E.coli BL21(DE3)and induced by IPTG,fusion protein was identifie... 李菁 林彤 高闪电 丛国正 独军政 邵军军 常惠芸口蹄疫病毒细胞受体研究进展 被引量:2 2006年 吴海波 邵军军 许立场 常惠芸关键词:口蹄疫病毒 受体研究 DISEASE 组织嗜性 疫病预防 口蹄疫病毒氨基酸改造对其病毒样颗粒稳定性的影响 被引量:4 2021年 病毒样颗粒(Viruslikeparticles,VLPs)的稳定性是目前影响口蹄疫VLPs疫苗质量的主要因素。为进一步提升口蹄疫VLPs疫苗的质量,基于口蹄疫病毒三维空间结构,通过动力学分析软件设计并筛选出3个氨基酸改造位点。经点突变试剂盒成功制备出上述3种突变型重组质粒,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21菌株后经体外诱导表达,Ni离子层析柱纯化后,SDS-PAGE结果证明3种氨基酸突变不影响目标蛋白的表达。体外组装获得的3种突变型VLPs稳定性研究结果发现,内部疏水性侧链氨基酸的引入使VLPs的形态变得更加均一(N4017W),且其稳定性比其他两种VLPs明显提高。结果表明,衣壳内部疏水性作用力有助于VLPs的形成且有助于维持衣壳的稳定性,为提高VLPs疫苗质量提供了新的研究思路,有助于推进VLPs疫苗的发展。 李璐莹 董虎 卢渊录 王苗苗 孙世琪 郭慧琛关键词:病毒样颗粒 突变体 稳定性 同源建模 口蹄疫病毒 AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因和牛α-干扰素基因的融合表达 被引量:1 2005年 将AsiaⅠ型口蹄疫病毒YNBS/58株VP1基因和去信号肽的牛α-干扰素基因共同亚克隆于原核表达载体 pET-28a中,转化 BL21 后经 IPTG诱导,实现了重组融合蛋白 VP1-BoIFN -α在大肠埃希氏菌 BL21 中的高效表达,表达产物经 SDS-PAGE 和 Western blotting 分析,重组的VP1-BoIFN-α蛋白分子质量约为 46 ku,与预期大小相符。薄层扫描分析显示,重组蛋白 VP1-BoIFN-α的表达量占菌体总蛋白的30%,且以包涵体的形式存在。包涵体提取物用 8 mol/L尿素溶解后,在变性条件下利用Ni-NTA柱对VP1-BoIFN-α融合蛋白进行了纯化。 独军政 常惠芸 宋立荣 李冬 丛国正 林彤 邵军军 刘在新 谢庆阁关键词:IFN VP1基因 薄层扫描 口蹄疫病毒 和牛 硫酸乙酰肝素受体介导的病毒感染作用 被引量:7 2008年 赵建勇 独军政 高闪电 丛国正 林彤 邵军军 伏小平 常惠芸关键词:硫酸乙酰肝素 病毒受体 受体介导 SULFATE 糖蛋白受体 特异性结合