湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室
- 作品数：58 被引量：158H指数：7
- 相关作者：王海龙唐滢严礼魏薇贺小红更多>>
- 相关机构：湖南城市学院化学与环境工程系山东大学生命科学学院华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 新型蛋白酶抑制剂基因hwtx-11在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究被引量：2
- 2007年
- 将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx-11克隆至载体pGEX4T-1上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.重组菌株在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的GST-HWTX-11融合蛋白的相对分子量约为33 kD.对重组菌株诱导表达后的产物进行生物活性测定,GST-HWTX-11融合蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exiguaHubner)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)在3d时的LC50分别为86.6μg/mL、119.4μg/mL;其与Cry1Ac对甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫毒力也有明显的协同作用.
- 夏立秋曾智贺小红付祖姣单世平丁学知孙运军李文萍王海龙罗玉双
- 关键词：WESTERNBLOT生物活性测定
- 多杀菌素研究进展
- @@本实验室从436份土壤中分离出的两株放线菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa).经对多杀菌素成分分析和杀虫生物活性测定，呈现了较高的杀虫毒力，其中一株已成为国家发明专利菌种(CCTCC M...
- 夏立秋唐滢杨尉寇笑笑张友明黄科学余子全胡胜标罗玉双黄瑶易勇全梅芳
- 关键词：多杀菌素刺糖多孢菌原生质体
- 应用计算机对比分析苏云金杆菌Cry1A类晶体蛋白被引量：1
- 2007年
- 蛋白质的结构数据量目前还远落后于其序列数据量。本文利用蛋白质数据库和CLUSTAL W、SWISS-MODEL、ExPASy工具等对已知序列的9种Cry1A的一级结构及基本性质、二级结构、三级结构进行预测分析对比,发现其序列和结构的均高度相似,从而找出序列上的主要突变区域和三维结构的差异部位,有助于进一步认识Cry1A蛋白的作用模式和功能异同、分析其进化关系,并为重新设计Cry1A蛋白提供参考。
- 王发祥黄璠夏立秋赵新民丁学知
- 关键词：CRY数据库
- 刺糖多孢菌多杀菌素工程菌研究
- 刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)多杀菌素(spinosyns)具有高效,广谱和安全的杀虫特点,给多年来发展缓慢的生物农药的研究带来了崭新的希望。但多杀菌素发酵周期长,产量低成为有待研究解决...
- 夏立秋张友明黄科学丁学知黄璠胡胜标王海龙罗玉双易勇张成全梅芳李文萍
- 关键词：多杀菌素工程菌刺糖多孢菌
- 毕赤酵母发酵生产颗粒性乙肝表面抗原的条件优化(英文)被引量：2
- 2008年
- 乙型肝炎病毒的流行对人们的生命健康造成了极大的威胁，而有效准确的诊断和预防性疫苗是阻止其流行的主要手段，乙肝表面抗原是诊断试剂和疫苗的主要成分。本试验在构建稳定表达HBsAg的毕赤酵母菌株后，对其发酵条件进行了研究。采用摇瓶分批培养方法，探讨了不同培养基、溶解氧、诱导物甲醇的浓度以及pH值等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响。在10L发酵罐上采用分批补料培养的方法研究了进行扩大培养生产重组HBsAg。结果表明，FBS无机盐合成培养基是理想的工业发酵培养基，溶解氧对菌体的生长与表达有显著的影响，甲醇诱导最佳终浓度为1％（V／V），发酵的最适pH值为5．4～6．0。发酵罐放大培养后，ELISA和SDS—PAGE分析表明重组HBsAg获得了高效表达，最终菌体生物量达到310 OD600，表达量达到27mg／L。电子显微镜观察表达重组乙肝抗原可以自组装为22nm类病毒颗粒，为HBV的新一代早期血清学诊断和疫苗的大规模生产提供了一定的参考。
- 刘如石林亲录孙意邱义兰徐甜丁海郭向荣
- 关键词：发酵参数毕赤酵母重组乙肝表面抗原
- 抗肿瘤靶向工程菌的高密度发酵及菌粉研制被引量：1
- 2018年
- 为获得侵袭性抗肿瘤靶向工程菌株Ec NA高菌体浓度的培养基配方,在单因素试验的基础上,通过PlackettBurman试验筛选出对菌体浓度影响最显著的因素为酵母抽提物、K_2HPO_4用量,对显著影响因素进行中心组合试验响应面分析。结果表明最佳培养基成分为:可溶性淀粉2 g/L、酵母抽提物50.3 g/L、K_2HPO_4 14.26 g/L、KH_2PO_43 g/L、MgSO_4 0.3 g/L、微量元素母液2 mL/L、接种量3%。发酵后溶液中菌体OD600 nm达到7.602,菌体生物量达到2.96×109 CFU/mL,比优化前提高了78.3%。以冻干保护剂在冷冻干燥过程中对工程菌株的保护效果为研究对象,通过正交试验得到制成菌粉的最佳保护剂配方为脱脂乳14.25 g/100 mL、蔗糖3 g/100 mL、抗坏血酸钠3 g/100 mL,优化后菌体冻干粉存活率可达86.32%,利于制成延长贮存期的口服菌粉胶囊。
- 王灿莫湘涛张峰吴柳娟李躺夏立秋
- 关键词：高密度发酵响应面分析法冻干保护剂
- 三种淡水鱼类在中国南北两个地区的肠道菌群差异比较被引量：6
- 2020年
- 山东省德州市禹城市和湖南省长沙市望城区分别属于我国北方和南方地区,环境和气候差异明显。本试验以禹城市和望城区两地的草鱼(Ctenopharyngodon idella)、鲫鱼(Carassius auratus)和鲤鱼(Cyprinus carpio)为研究对象,对肠道中的菌群进行16s rRNA V4高变区扩增,基于IonS5 TM XL测序平台进行测序,并对相关数据进行分析。结果表明,在门水平上鲫鱼、鲤鱼、草鱼的肠道优势菌主要为变形菌门(Proteobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteria)、硬壁菌门(Firmicutes),拟杆菌门(Bacteroidetes),各组中这四种菌门所占比之和均在80%以上;基于Bray-Curtis距离值的秩次进行组间差异显著性检验,山东草鱼组和湖南草鱼组比较中组间差异大于组内差异(R=0.307,P<0.05),且线性判别分析显示湖南草鱼组的特征性菌群为弧菌属,而山东草鱼组的为梭菌纲,推测特征性菌群差异与环境的影响有关;有害菌种的统计分析表明,湖南鲫鱼组和鲤鱼组的嗜水气单胞菌属相对丰度明显高于对应的山东鲫鱼组和鲤鱼组,山东草鱼组和鲤鱼组的弧菌属相对丰度高于对应的湖南草鱼组和鲤鱼组,可能受外界环境的影响,不同地区抵御外来有害细菌的能力也不一样。本研究对两地的淡水鱼类肠道微生物群落结构进行了比较和分析,为进一步的鱼类发育研究奠定基础。
- 徐佳莹李演谢芝玲陈汉娜潘登刘峰陈燕梁淑淑丁学知夏立秋张友明涂强
- 关键词：鲫鱼鲤鱼草鱼肠道微生物
- 苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20-kb DNAs上染色体基因的鉴定被引量：1
- 2007年
- 已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中20-kb DNAs上分别扩增出带有自身调控序列的cry1Ac和cry2Aa基因,并将其分别电转至Bt无晶体菌株Cry-B中获得重组菌株Cry-B(pHC42)和Cry-B(pHC39).SDS-PAGE和透射电镜分析表明这两种重组菌株能够分别产生由130-kDa的Cry1Ac原毒素形成的菱形晶体以及由65-kDa的Cry2Aa原毒素形成的方形晶体.毒力生测的结果显示,这两种菌株的表达产物对棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫具有预期的杀虫效果.重组菌株分别形成的两种晶体经不同的缓冲液溶解后能释放出与20-kb DNAs紧密结合的原毒素,同时在20-kb DNAs上均可检测到源于Bt染色体的spo0A和nprA基因片段.
- 孙运军袁志明夏立秋魏薇付祖姣黄璠丁学知胡胜标
- 关键词：苏云金芽孢杆菌伴孢晶体染色体
- 叶柄粘球菌CA3的分离鉴定及其抗肿瘤活性初步研究被引量：2
- 2018年
- 为寻找新的粘细菌次级代谢产物,分别采用滤纸片和大肠杆菌两种诱导法诱导粘细菌子实体的形成,挑取子实体多次转接以纯化菌株,从中筛选获得1株粘细菌CA3.通过菌体形态观察、生理生化试验和16S rDNA同源性分析的方法对其进行鉴定归类,确认其为叶柄粘球菌(Myxococcus stipitatus)新菌CA3.对粘球菌CA3发酵上清液进行细胞毒性试验,结果表明其对肿瘤细胞B16和SMMC-7721有很强的抑制效果,为后续的抗肿瘤活性组分结构解析和抗肿瘤机制的研究提供了重要基础.
- 廖继燕吴雨婧周偲龚亮夏立秋
- 关键词：粘细菌RDNA抗肿瘤活性
- 定点突变技术研究苏云金杆菌Cry1类晶体蛋白结构与功能的进展被引量：1
- 2007年
- 近年来利用定点突变技术研究苏云金杆菌(Bacillus thuringiesis,Bt)杀虫晶体蛋白(Insecticidal crystal proteins,ICP)作用机制已取得良好进展.杀虫晶体蛋白不同结构域上氨基酸残基的突变将影响其稳定性,与受体的结合,不可逆的昆虫中肠膜插入及离子通道活性的强弱等.突变研究表明,结构域Ⅰ参与不可逆结合及插入昆虫中肠膜过程;结构域Ⅱ参与受体结合,包括初始结合与不可逆结合;结构域Ⅲ在杀虫特异性和维持三维结构的稳定性方面起重要作用,同时,可能参与离子通道的形成,受体结合和插入昆虫中肠膜过程.利用各种定点突变技术对各位点进行突变可以研究单一位点的功能,到目前为止,已有很多关于这方面的研究,并且筛选到了毒力提高的工程菌株.
- 张春艳胡胜标单世平夏立秋
- 关键词：苏云金杆菌杀虫晶体蛋白定点突变
