公共文化服务平台

深圳大学生命科学学院过敏反应与免疫学研究所: 作品数：147 被引量：458H指数：10; 相关作者：杨小猛高波张红云黄海珍詹政科更多>>; 相关机构：南昌大学医学院华南理工大学轻工与食品学院南昌大学基础医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学农业科学更多>>

合作机构

蜜蜂主要变应原酸性磷酸酯酶基因的克隆及原核表达载体的构建: 2010年; 目的克隆蜜蜂Apis cerana cerana主要变应原酸性磷酸酯酶(Api m3)基因,构建其原核表达载体。方法根据已知序列设计带有酶切位点的特异性引物,以提取的蜜蜂总RNA为模板RT-PCR扩增目的基因,并进行序列分析。将基因片段亚克隆到PET-28a表达载体上。结果获得蜜蜂Api m3基因,构建了其原核表达载体。基因分析显示该基因全长1 167 bp,编码388个氨基酸,推测分子质量单位为45.279 9 ku,等电点为5.53。序列分析显示与Gen-Bank中已知基因的同源性为97%。结论成功克隆蜜蜂Api m3基因并构建原核表达载体,对进一步进行变应原表达和免疫学活性鉴定有积极意义。; 张强叶卫翔刘志刚陈思罗新萍黄钟; 关键词：蜜蜂基因克隆原核表达载体

尘螨疫苗治疗对哮喘小鼠固有免疫的增强作用及机制研究: 马一禾杨小猛刘志刚

口服牛Ⅱ型胶原蛋白诱发类风湿关节炎大鼠模型的建立及评价被引量：2: 2017年; 按照动物建模方案分别给不同组大鼠灌胃一定剂量的阿司匹林,再给大鼠灌胃牛II型胶原蛋白诱导其产生类风湿关节炎;建模期间进行踝关节直径的测量及关节炎指数评分;然后ELISA实验检测大鼠血清中特异性抗体(IgE、IgG)和炎症因子(IL-6、TNF-α和IFN-γ);再进一步观察大鼠踝关节组织病理改变.结果表明:经过不同剂量阿司匹林(5、10 mg·kg-1)处理的大鼠,用牛II型胶原蛋白灌胃后,大鼠踝关节呈现不同程度的肿胀及关节炎症状;10 mg·kg-1处理的大鼠炎症更明显,其血清中特异性抗体(IgE、IgG)和炎性细胞因子IL-6、TNF-a也显著增加,而细胞因子IFN-r显著降低,同时踝关节组织也发生明显炎症病变.这表明10 mg·kg-1处理的大鼠要比5 mg·kg-1处理大鼠更易用于口服食物抗原牛II型胶原蛋白类风湿关节炎的建成.; 关丽毋丹丹胡东生刘冬舟刘志刚; 关键词：类风湿关节炎口服 II型胶原蛋白动物模型

花生主要过敏原Ara h1单克隆抗体的制备与应用被引量：7: 2017年; 目的制备与鉴定抗花生主要过敏原Ara h1单克隆抗体,建立双单抗ELISA法,检测食品中花生过敏原。方法以花生主要过敏原Ara h1为抗原免疫Balb/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1。半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株后诱生小鼠腹水,采用蛋白A亲和层析法获得纯化抗体。利用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型。间接ELISA法和Western blot鉴定抗体效价和特异性以及与其他过敏源的交叉反应性。建立双单抗夹心ELISA法检测食品中的花生过敏原。结果共获得抗Ara h1细胞株4株,分别命名为2G9、5G4、5B5、2C7,效价均高于1∶106。经抗体亚型鉴定,4株抗体均为Ig G1型。Western blot的结果表明4株抗体均能识别Ara h1,其中2G9与5G4结合能力较强。在特异性检测实验中,2G9和5G4与其他种类过敏原无交叉反应。通过建立双单克隆抗体夹心ELISA法,发现花生Ara h1蛋白的检出低限为:5 ng/ml,标准曲线在~80 ng/ml范围内线性良好。利用此法检测了10种食品,结果显示在5种含有花生成分的食品中均检测到了花生过敏原。结论获得高效价抗体4株,建立了高效、高特异性的食品中花生过敏原的检测方法,为食品中花生过敏原的检测提供了依据。; 陈献雄邬玉兰吉琼梅杨平常刘志刚; 关键词：单克隆抗体过敏原检测

缢蛏泛变应原原肌球蛋白的克隆表达、纯化及其免疫学特性研究被引量：1: 2007年; 原肌球蛋白（tropomyosin）作为泛变应原广泛存在于无脊椎动物体内，本研究从缢蛏中克隆出一个原肌球蛋白基因。缢蛏（Sinonvacula constricta）购于深圳市水产品市场。9个缢蛏过敏病人的阳性血清来自深圳市人民医院和儿童医院（经Unit CAP 检测，2级以上）。缢蛏原肌球蛋白 cDNA片段转入表达载体（pET-28a），引物序列P5：5＇-GGACATATG-GAGGCCATCAGTTGGC-3；p3：5＇-CCGGAAT-TCTTAGCCAGTCAGTTKCGC-3＇。重组原肌球蛋白基因表达按常规方法进行。目标蛋白洗脱组分透析并保存。纯化缢蛏重组原肌球蛋白进行SDS-PAGE，电转到纤维素膜上，再经常规免疫学方法鉴定。重组原肌球蛋白分离后进行酶切，混合肽进行MALDI-TOF-MS质谱鉴定。; 李荔李启沅刘志刚; 关键词：原肌球蛋白克隆表达免疫学特性缢蛏 MALDI-TOF-MS 纯化

王棕花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：4: 2007年; 目的克隆并表达王棕花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白（profilin）。方法利用RT-PCR结合RACE技术克隆王棕花粉中泛变应原profilin的全长基因，并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物，采用RT-PCR获得整个王棕花粉profilin的开放阅读框，将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达，通过Ni2^＋亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，采用Western blot检测其IgE结合活性。结果克隆获得了王棕花粉profilin的全长基因，由675个碱基组成，开放阅读框为396个碱基（包括终止密码子），编码131个氨基酸。经分析，这个序列编码的蛋白为小分子质量酸性蛋白，等电点为4．86，相对分子质量（Mr）约为14．2×10^3。此序列已被GenBank收录，登录号为EF173599。重组王棕花粉profilin在大肠杆菌中高效表达，进一步经Ni^2＋亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功克隆和表达了王棕花粉profilin，为王棕过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础。; 姚敏孟光刘志刚邬玉兰张红云; 关键词：基因表达纯化

平榛主要过敏原Corh1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2011年; 目的制备和鉴定鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组Cor h 1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该McAbs的特性和交叉性。结果获得4株可稳定分泌鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的McAbs,其Ig亚型均为IgG1,均具有良好的效价;ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组Cor h 1蛋白,其中3株单抗能够识别天然平榛提取物。结论成功制备了4株鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体,为建立平榛主要变应原Cor h 1检测及纯化方法奠定了基础。; 赵郭存张强邹菊黄钟刘志刚; 关键词：主要变应原单克隆抗体杂交瘤细胞交叉性

斑节对虾过敏原的分离、鉴定与纯化被引量：5: 2009年; 目的对斑节对虾的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法通过SDS-PAGE电泳分离斑节对虾的蛋白质组份,采用免疫印迹(Western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对斑节对虾主要过敏原进行初步纯化。结果斑节对虾粗提液SDS-PAGE显示其主要蛋白条带主要有7条,Western-blotting显示对斑节对虾过敏患者的阳性混合血清能与7个蛋白条带起反应,相对分子质量分别为71000、43000、34000、23000、21000、20000和19000,离子交换层析可初步纯化出相对分子质量为34000和21000的过敏原蛋白。结论本实验对斑节对虾过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出斑节对虾的主要过敏原。; 吴序栎张慧刘志刚; 关键词：斑节对虾 SDS-PAGE 免疫印迹离子交换层析

小龙虾钙结合蛋白的免疫学特性鉴定与单克隆抗体的制备被引量：4: 2017年; 目的克隆、表达、纯化具有免疫原性的重组小龙虾钙结合蛋白(SCP),并制备高效价抗SCP单克隆抗体。方法用亲和层析法获取小龙虾重组SCP,通过Western Blotting和ELISA法进行免疫学活性鉴定;以重组SCP为免疫原,免疫BALB/c小鼠,再取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合;利用ELISA法筛选出能分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,然后利用该杂交瘤细胞株刺激小鼠,取腹水,用蛋白A亲和层析方法纯化获得抗体;通过Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过Western Blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的交叉性和特异性。结果经SDS-PAGE鉴定获得了纯度较高的重组SCP,免疫学鉴定结果显示,重组的SCP蛋白具有较好的IgE结合活性,阳性率为40%。通过杂交瘤细胞融合技术,共获得了抗SCP细胞株2株,分别命名为1A12和3H12,效价均高于20万。经抗体亚型鉴定,2株抗体均为IgG1型。Western Blot的结果表明2株抗体能识别重组SCP。在特异性检测实验中,1A12抗体与其他种类食物过敏原无交叉反应,而3H12与鱼粗蛋白过敏原有交叉反应性。结论 SCP是小龙虾的重要过敏原,本实验获得了纯度较高的重组SCP,并制备了2株高效价抗SCP单克隆抗体,为小龙虾SCP、甲壳类食物过敏原的检测及标准化过敏原物质的制备奠定了基础。; 陈献雄邬玉兰吉琼梅杨平常刘志刚; 关键词：小龙虾钙结合蛋白免疫学特性单克隆抗体

虾夷扇贝过敏原tropomyosin的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：5: 2010年; 从虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)肌肉中提取总RNA,RT-PCR克隆虾夷扇贝中变应原原肌球蛋白的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增扇贝tropomyosin的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia.coli BL21(DE3),诱导表达后,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western-blot检测其免疫学活性。经序列测定,该基因含有长度为855bp的开放阅读框,编码284个氨基酸,其在GenBank数据库中的登录号为EU839640。SDS-PAGE检测该重组变应原在大肠杆菌中高效表达36kD的目的蛋白,且重组变应原具有良好的IgE结合活性。研究获得了具有变应原活性的重组虾夷扇贝tropomyosin,为扇贝过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。; 刘志刚邬玉兰吴淑勤石存斌夏皓玉陈丽斐; 关键词：虾夷扇贝原肌球蛋白表达纯化

深圳大学生命科学学院过敏反应与免疫学研究所

合作机构

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

深圳大学生命科学学院过敏反应与免疫学研究所

合作机构

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈