山西医科大学汾阳学院基础医学部解剖教研室
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- HCV Core基因真核表达载体构建及其对HeLa细胞自噬的影响
- 2019年
- 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(Core)真核表达载体,并研究其对人宫颈癌HeLa细胞自噬功能的影响。方法以HCV复制子质粒pJFH1为模板,PCR法扩增HCVCore基因片段,经纯化回收后与PLVX-IRESZsGreen1载体用同源重组法相连,构建PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,并经测序验证其序列的正确性。转染宫颈癌HeLa细胞,并设PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组、PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组以及未转染质粒空白对照组,通过免疫印迹法验证HCVCore蛋白在HeLa细胞中的表达,并用免疫荧光(IF)和免疫印迹检测自噬生物标记物微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平。结果获得PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,测序结果表明构建的重组质粒序列完全正确,HCVCore重组蛋白可在HeLa细胞中有效表达;免疫荧光和免疫印迹结果表明,HCVCore过表达细胞LC3焦点和LC3Ⅱ蛋白表达水平明显增多,PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组的细胞LC3Ⅱ水平(1.069±0.049)高于PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组(0.776±0.047),差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,HCVCore蛋白过表达可诱导HeLa细胞自噬。
- 王敏敏魏建宏任来峰
- 关键词：肝炎病毒属病毒核心蛋白质类重组质粒
- 雌激素对去卵巢大鼠焦虑行为及杏仁核c-fos表达的影响被引量：4
- 2017年
- 目的观察雌二醇对去卵巢大鼠焦虑样行为及杏仁核c-fos表达的影响,探讨雌二醇改善去卵巢大鼠焦虑样行为的可能机制。方法 30只SD雌性大鼠随机分为假手术组、卵巢切除组和去卵巢雌二醇组。雌二醇治疗8周后通过高架迷宫实验观察雌二醇对去卵巢大鼠焦虑样行为的影响;随后采用免疫组织化学结合图像半定量方法对杏仁核c-fos的表达进行测量和分析。结果与假手术组大鼠比较,高架迷宫实验中卵巢切除组大鼠开放臂次数及时间、开放臂次数比例及时间比例均显著下降(P<0.01),杏仁核c-fos数量及面积均显著增加(P<0.05);而去卵巢雌二醇组去卵巢大鼠的焦虑行为可显著改善,杏仁核c-fos表达减弱(P<0.05)。结论卵巢摘除会导致大鼠焦虑样行为,长期雌二醇治疗可改善去卵巢大鼠的焦虑行为,可能与雌二醇降低去卵巢大鼠杏仁核c-fos的表达有关。
- 苏晓云贺继平郑华
- 关键词：杏仁核C-FOS去卵巢
- 骨髓造血干祖细胞改善慢性约束应激诱导的小鼠脾细胞数减少
- 2020年
- 目的观察CD34+骨髓造血干祖细胞(CD34+HSPC)对慢性约束应激小鼠脾细胞数的影响。方法将10只8周龄雄性BALB/c小鼠分为2组(n=5):①慢性应激组:小鼠放入约束应激管中约束12 h/d(早9:00-晚9:00),解除约束12 h/d(晚9:00-早9:00),连续处理3 d以建立慢性约束应激的小鼠模型;②对照组:正常饲养不施加任何处理。慢性应激第3天结束时即取每组小鼠脾并计数脾细胞。HSPC体内干预实验中,20只雄性BALB/c小鼠分为4组(n=5):HSPC干预+慢性应激组,溶剂对照+慢性应激组,HSPC干预组和溶剂对照组。HSPC干预+慢性应激组和溶剂对照+慢性应激组慢性应激第3天结束时即取每组小鼠脾并计数脾细胞,流式细胞术检测其中活细胞、凋亡细胞及坏死细胞比例。绿色荧光标记HSPC做体内示踪试验,检测迁移至脾的HSPC。HSPC体外干预实验中,细胞培养分为4组:HSPC干预+地塞米松组,脾细胞+地塞米松组,HSPC干预组和脾细胞单独培养组,培养18 h,流式细胞术检测其中活细胞、凋亡细胞及坏死细胞的比例。结果脾细胞计数结果表明,与对照组相比,慢性应激组小鼠的脾细胞总数显著减少(P<0.05)。HSPC体内干预实验中,与溶剂对照+慢性应激组相比,HSPC干预+慢性应激组小鼠脾细胞计数增加(P<0.05)。流式细胞术结果表明,与溶剂对照组相比,溶剂对照+慢性应激组小鼠脾细胞凋亡及坏死比例增加(P<0.05);与溶剂对照+慢性应激组相比,HSPC干预+慢性应激组小鼠脾细胞凋亡比例减少,活细胞比例增加(P<0.05)。体内示踪试验结果显示,慢性应激过程中HSPC可迁移至脾中。体外实验结果表明,与脾细胞单独培养组相比,脾细胞+地塞米松组脾细胞凋亡及坏死比例增加(P<0.05);与脾细胞+地塞米松组相比,HSPC干预+地塞米松组脾细胞坏死比例减少,活细胞比例增加(P<0.05)。结论CD34+HSPC可改善慢性约束应激诱导的小鼠脾细胞数的减少。
- 付慧常芬王浩玉白芃康杰
- 关键词：造血干祖细胞脾细胞细胞坏死小鼠
