中国博士后科学基金(20060390073)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：王海峰杨峥嵘黄来强何飞李蓉更多>>
- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心清华大学第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金深圳市南山区科技计划项目深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 新型RNAi载体抑制HPV16E6基因在人宫颈癌细胞Caski中的表达
- 2011年
- 目的:利用自行构建的一种基于Semliki森林病毒的新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready,验证将其用于短期高效沉默HPV16E6基因的效果。方法:以HPV16E6为靶标基因,设计并构建基于pSFV-RNAi Ready的重组质粒,分直接电击转染和病毒颗粒共培养两种方式转入人宫颈癌细胞株Caski,RT-PCR、Western blot检测HPV16E6表达水平。结果:重组质粒对HPV16E6沉默效果优于常规RNAi质料载体,接近化学合成小RNA,抑制率可高达90%以上,10天后效果仍然存在;结论:新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready可较好地应用于特异高丰度靶基因的表达抑制,有望用于未来的科学研究或治疗应用。
- 杨峥嵘何飞李蓉王海峰
- 关键词：RNA干扰病毒载体宫颈癌
- 基于Semliki森林病毒复制子的新型RNAi质粒载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:以semliki森林病毒复制子为基础,构建一类可迅速高效表达shRNA的新型RNAi载体。方法:以Semliki森林病毒衍生的复制子载体pSFV1为骨架,用CMV IE启动子替换SP6启动子并在3′-UTR下游插入SV40 polyA转录终止子,在原26S亚基因组启动子后插入带有相应改良多克隆位点的shRNA表达元件,同时加入抗新霉素选择复合体,并去掉3′-UTR的重复序列。所获载体用于沉默EGFP基因,通过体外细胞转染、病毒颗粒制备、荧光显微镜观察、RT-PCR分析等初步验证、评估其效果。结果:构建了基于Semliki森林病毒复制子的新型RNAi质粒载体pSFV-RNAi Ready。经体外实验初步证实,该载体直接转染细胞,或与辅助载体共转染,制备成具有感染能力的重组病毒颗粒后使用,均可高水平表达shRNA,沉默目的基因。其中使用病毒颗粒抑抑效率可高达90%以上。结论:该载体的成功构建,可望显著拓宽SFV载体的应用范围,丰富RNAi实施手段,并用于相关科学研究及基因药物技术开发。
- 杨峥嵘何飞王海峰黄来强
- 关键词：RNA干扰复制子病毒载体
