江苏省自然科学基金(BK2007019)
- 作品数：4 被引量：81H指数：4
- 相关作者：吴敬陈坚李兆丰堵国成任增亮更多>>
- 相关机构：江南大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金食品科学与技术国家重点实验室科研基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 表面活性剂对大肠杆菌胞外生产α-环糊精葡萄糖基转移酶的影响被引量：12
- 2009年
- 研究了不同浓度表面活性剂Tween-80,Triton X-100,SDS对大肠杆菌生产α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT酶)的影响。结果表明:发酵初始添加Tween-80和Triton X-100的最适浓度分别为2%,0.5%,最终胞外酶活分别达2.03U/ml和4.92U/ml,相对于未添加表面活性剂时提高4.6倍和12.67倍,且改变添加时间不能提高酶的产量;发酵36h添加0.02%SDS对α-CGT酶产量促进最大,最终胞外酶活达5.31U/ml,较对照组提高12.75倍。表面活性剂对α-CGT酶生产的促进作用可能是由大肠杆菌细胞内外膜渗透性增加所致,使细胞周质空间中α-CGT酶能更加快速地渗透到胞外。
- 丁闰蓉李兆丰李金根陆辰霞吴敬陈坚
- 关键词：PAENIBACILLUS环糊精葡萄糖基转移酶表面活性剂
- 大肠杆菌高效表达重组蛋白策略被引量：52
- 2007年
- 大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早和目前应用最广的经典表达系统。利用该系统表达重组蛋白具有许多优越性,但其表达效率受诸多因素的影响。综述了国内外利用大肠杆菌表达系统高效表达外源蛋白的策略,主要包括选择合适的启动子、改变信号肽结构、提高 mRNA稳定性、提高翻译效率、表达稀有密码子、降低包涵体形成及蛋白降解,利用融合蛋白与分子伴侣、调控发酵条件实现高密度培养等。
- 任增亮堵国成陈坚吴敬
- 关键词：大肠杆菌基因工程重组蛋白克隆
- 来源于软化芽孢杆菌的环糊精葡萄糖基转移酶在毕赤酵母和枯草杆菌中的表达被引量：14
- 2009年
- 通过PCR扩增软化芽孢杆菌α-CGT酶基因,将基因片段分别克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K和大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pMA5中,分别转化毕赤酵母KM71和枯草杆菌WB600。结果表明,重组毕赤酵母发酵上清液中α-CGT酶活性仅0.2U/mL,重组枯草杆菌产酶达到1.9U/mL。对重组枯草杆菌发酵条件进行了优化,当以TB为出发培养基,初始pH6.5,温度为37oC时,摇瓶培养24h后α-CGT酶环化活性达到4.5U/mL(水解活性为3200IU/mL),是野生菌株软化芽孢杆菌表达量的9.8倍。
- 张佳瑜吴丹李兆丰陈晟陈坚吴敬
- 关键词：毕赤酵母枯草杆菌
- 利用重组大肠杆菌生产α-环糊精葡萄糖基转移酶被引量：8
- 2009年
- 将来源于软化类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)的α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT)基因插入含pelB信号肽的质粒pET-20b(+)中,构建了表达载体pET-20b(+)/cgt,并将其转化表达宿主E.coliBL21(DE3)。对重组菌E.coliBL21/pET-cgt进行摇瓶发酵条件的优化,确定了其胞外表达α-CGT酶的最适条件:葡萄糖8 g/L,乳糖0.5 g/L,蛋白胨12 g/L,酵母膏24 g/L,K2HPO472 mmol/L,KH2PO417 mmol/L,CaC l22.5 mmol/L;初始pH为7.0,诱导温度为25℃。在该条件下培养90 h后最终α-CGT酶的胞外比活达到22.1 U/mL,与来源菌P.macerans所产天然酶比活相比提高了42倍,实现了α-CGT酶的高效生产。将基因工程菌在上述条件下于3 L发酵罐中发酵,90 h后胞外酶比活达到22.6 U/mL,证实了工业化放大的可能性。
- 成成李兆丰李彬刘花陈坚吴敬
- 关键词：Α-环糊精葡萄糖基转移酶大肠杆菌克隆
