重庆市卫生局科研项目(2009-2-359)
- 作品数：14 被引量：86H指数：7
- 相关作者：杨琴黄家贵徐兰沈长波刘舒更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院宜宾市第二人民医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 白藜芦醇预处理对缺糖缺氧再灌注大鼠原代皮质神经元的保护作用被引量：10
- 2014年
- 目的探讨白藜芦醇预处理对缺糖缺氧再灌注所致大鼠原代皮质神经元损伤的保护作用及机制。方法 40μmol/L白藜芦醇预处理大鼠原代皮质神经元24 h,皮质神经元缺糖缺氧150 min,恢复正常培养24 h,构建缺糖缺氧再灌注损伤。实验分为正常组,模型组,白藜芦醇组。倒置显微镜下观察细胞形态。免疫荧光染色鉴定神经元。MTT法检测细胞活力。化学比色法测定培养上清液LDH活性和细胞内SOD活性。TUNEL检测细胞凋亡。免疫印迹法和免疫荧光法检测Bcl-2、Caspase-3、Nrf-2、NQO-1蛋白表达。结果细胞培养6 d,免疫荧光染色显示90%的细胞是神经元特异性烯醇化酶阳性。与模型组相比,白藜芦醇预处理能明显降低培养上清液乳酸脱氢酶活性,增强细胞内SOD活性和神经元细胞活力,减少细胞凋亡,上调Bcl-2、Nrf-2和NQO-1蛋白表达,下调Caspase-3蛋白表达;促进Nrf-2蛋白从细胞浆转移到细胞核。结论白藜芦醇对大鼠原代皮质神经元缺糖缺氧再灌注损伤有良好的保护作用,其机制可能是通过抗凋亡和抗氧化途径实现。
- 张黎黎黄家贵沈长波刘舒徐兰杨琴
- 关键词：白藜芦醇预处理再灌注损伤
- 局灶缺血性脑卒中大鼠侧脑室下带Shh信号通路成分的动态表达被引量：3
- 2011年
- 通过研究Sonic hedgehog(Shh)信号通路成分在局灶缺血性脑卒中大鼠侧脑室下带(subventricular zone,SVZ)的动态表达,初步探讨该通路在局灶性缺血性脑卒中后神经再生的调控作用.将84只健康成年雄性SD大鼠随机分为正常组(n=12)、假手术组(n=12)、缺血6、12、24 h和3、7 d,共7组(n=12).采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occlussion,MCAO)模型.分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、免疫印迹法检测局灶脑缺血大鼠侧脑室下带Shh、Gli1 mRNA和蛋白变化.与正常组比较,Shh、Gli1mRNA和蛋白在假手术组表达变化不明显(P>0.05),模型组6 h表达增高(P<0.01),24 h达峰值(P<0.01),3 d时接近正常水平(P>0.05),7 d表达又升高(P<0.01).缺血性脑卒中可以上调Shh信号通路成分在SVZ区的表达,提示Shh信号通路可能参与卒中后神经再生机制的调控.
- 范层层杨琴陈娜吴兆敏黄家贵
- 关键词：局灶性脑缺血SHH信号通路神经再生
- 初级纤毛与Hedgehog信号通路相关性研究被引量：7
- 2011年
- 早在20世纪中期以前，初级纤毛被认为是没有任何功能的原始运动纤毛的退化器官。但是近年发现初级纤毛参与了细胞内信号传导等一系列细胞过程，从而调控动物的发育和各种器官的正常生理功能。Hedgehog信号通路对胚胎发育、器官形成具有重要作用。而Hedgehog信号的传导需要初级纤毛的参与，两者中任何一个异常将导致许多人类疾病。因此，本文对这一领域近年来的研究进展综述如下。
- 黄家贵任俊伟杨琴
- 关键词：HEDGEHOG信号通路纤毛细胞内信号传导正常生理功能器官形成细胞过程
- 白藜芦醇对脑缺血/再灌注氧化应激损伤保护机制的研究进展被引量：30
- 2011年
- 白藜芦醇是一种广泛存在于植物中的多酚类化合物,具有广泛的生物学活性。该文主要从白藜芦醇的性质以及在脑缺血/再灌注氧化应激损伤中的保护作用及其机制作一综述。
- 任俊伟杨琴
- 关键词：白黎芦醇氧化应激抗凋亡
- 白藜芦醇在缺氧缺糖再灌注损伤不同时间窗对大鼠皮质神经元氧化应激的影响被引量：8
- 2013年
- 目的研究白藜芦醇在缺氧缺糖再灌注损伤不同时间窗对大鼠皮质神经元氧化应激的影响。方法大鼠皮质神经元缺氧缺糖处理150min,随即恢复正常培养24h。实验分为6组,即正常组、模型组、白藜芦醇预处理组(在缺氧缺糖前加入白藜芦醇干预24h)、造模时处理组(从缺氧缺糖开始加入白藜芦醇干预直至再灌注损伤后24h)、造模后处理组(从缺氧缺糖后加入白藜芦醇干预直至再灌注损伤后24h)和全程处理组(从缺氧缺糖前24h开始加入白藜芦醇干预直至再灌注损伤后24h)。倒置显微镜下观察细胞形态,用化学比色法测定神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性以及一氧化氮(NO)的含量,免疫荧光检测观察核因子E2相关因子2(Nrf2)的核移位情况,免疫印迹法检测神经元Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)和苯醌氧化还原酶(NQO-1)蛋白表达。结果培养至第6天,神经元立体感及折光性强。与模型组比较,在白藜芦醇全程处理组中,各浓度(10、20、40、60、80μmol/L)白藜芦醇均可升高神经元SOD活性(P<0.05),降低NO含量(P<0.05),其中以40μmol/L白藜芦醇作用最佳;在缺氧缺糖再灌注损伤的不同时间窗内给予白藜芦醇干预,均能减轻缺氧缺糖再灌注导致的细胞损伤,促进Nrf2蛋白从细胞质转移到细胞核,上调Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白的表达,其中全程处理组作用最佳,其次为预处理组。结论白藜芦醇对缺氧缺糖再灌注损伤的神经元有剂量依赖性的抗氧化应激作用,而且全程处理组作用最佳,预处理组次之。其机制可能是通过激活Nrf2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路进而上调抗氧化蛋白的表达而实现。
- 沈长波黄家贵张黎黎刘舒徐兰杨琴
- 关键词：白藜芦醇氧化性应激缺氧缺糖再灌注损伤神经元
- 白藜芦醇对脑缺血再灌注后细胞凋亡及Caspase-3表达的影响被引量：11
- 2011年
- 目的研究白藜芦醇(Res)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响。方法 48只SD雄性大鼠随机分成4组,假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、Res低剂量组(15 mg/kg,I/R﹢R1组)和Res高剂量组(30 mg/kg,I/R﹢R2组)。缺血2 h再灌注24 h,TTC法测量脑梗死体积,原位末端标记(TUNEI)法检测脑细胞凋亡水平,免疫组化法及Western blot检测Caspase-3蛋白表达,结果与I/R组相比,Res能明显抑制缺血区脑组织Caspase-3蛋白的表达(P<0.01),减少凋亡细胞数(P<0.01),缩小脑梗死体积(P<0.01)。结论 Res对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡有抑制作用,其机制可能与Caspase-3表达下降有关。
- 任俊伟杨琴陈娜范层层
- 关键词：白藜芦醇脑缺血原位末端标记法细胞凋亡CASPASE-3
- 白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞的神经元样细胞分化伴Shh信号激活被引量：7
- 2013年
- 目的研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)分化为神经元样细胞中的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs。MSCs分为3组,白藜芦醇诱导组:用含白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCs分化;对照组:用无血清DMEM/F12诱导MSCs分化;正常组:不做诱导处理。倒置显微镜下观察细胞形态,免疫荧光法、免疫印迹法检测NSE、MAP-2、GFAP、Smo和Gli1蛋白的表达和移位。结果白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩,伸出长突起,类似神经元。免疫荧光显示正常组及对照组MSCs轻度表达神经元NSE蛋白,白藜芦醇诱导组MSCs NSE、MAP-2阳性,但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。免疫荧光显示,MSCs具有初级纤毛,并表达Smo和Gli1。白藜芦醇诱导组Smo从细胞质进入初级纤毛,Gli1从细胞质进入细胞核,同时,Smo、Gli1蛋白的表达增加(P<0.01)。对照组则无明显变化。结论白藜芦醇能诱导MSCs分化为神经元样细胞;此过程中Shh信号通路被激活,推测Shh信号在MSCs分化过程中可能发挥着重要作用。
- 黄家贵沈长波刘舒徐兰杨琴
- 关键词：白藜芦醇骨髓基质细胞神经元样细胞细胞分化
- 白藜芦醇在缺糖缺氧/再灌注损伤不同时间窗对大鼠皮质神经元的保护作用被引量：6
- 2013年
- 目的研究白藜芦醇在缺糖缺氧/再灌注损伤不同时间窗内对大鼠皮质神经元的保护作用及机制。方法大鼠皮质神经元缺糖缺氧处理150 min,随即恢复正常培养24 h。实验分为正常组,模型组,白藜芦醇预处理组、造模时处理组、造模后处理组和全程处理组。倒置显微镜下观察细胞形态。化学比色法测定LDH活性和GSH含量。MTT法检测细胞活力。TUNEL检测细胞凋亡。免疫印迹法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果在白藜芦醇全程处理组中,各浓度白藜芦醇均可降低培养上清液LDH活性,升高细胞内GSH含量(P<0.05),其中以40μmol·L-1白藜芦醇作用最佳。在缺糖缺氧再灌注损伤的不同时间内给予白藜芦醇,均较模型组增强神经元活力,减少神经元凋亡,上调Bcl-2蛋白、下调Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),其中全程处理组作用最佳,其次为预处理组。结论白藜芦醇对缺糖缺氧/再灌注损伤的神经元有剂量依赖性保护作用,而且全程处理组作用最佳,预处理组次之。其保护作用机制可能至少部分是通过调节凋亡相关蛋白而实现。
- 黄家贵张黎黎沈长波刘舒徐兰杨琴
- 关键词：白藜芦醇缺糖缺氧再灌注损伤时间窗
- 白藜芦醇减轻脑缺血再灌注损伤及其机制被引量：12
- 2010年
- 目的研究白藜芦醇(Res)对脑缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血2 h再灌注。将76只大鼠分成假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、Res低剂量组(15 mg/kg,I/R+R1组)和Res高剂量组(30 mg/kg,I/R+R2组),每组19只。再灌注24 h,采用TTC法测量脑梗死体积,化学比色法测定血清及脑组织中MDA含量,RT-PCR及Western blot检测Nrf2、HO-1基因和蛋白表达,HE染色观察脑组织的病理改变。结果与I/R组比较,Res能明显缩小脑梗死体积[I/R组(42.67±2.51)%vsI/R+R1组(30.53±1.45)%、I/R+R2组(20.27±2.11)%,P<0.01],降低血清中MDA的含量[I/R组(9.29±0.42)nmol/mlvsI/R+R1组(4.03±0.08)nmol/ml、I/R+R2组(2.68±0.27)nmol/ml,P<0.01],及脑组织中MAD含量[I/R组(1.40±0.02)nmol/mgvsIR+R1组(1.19±0.07)nmol/mg、IR+R2组(0.85±0.03)nmol/mg,P<0.01]。显著上调Nrf2、HO-1基因和蛋白的表达(P<0.05),改善脑组织的病理变化。结论 Res对局灶性脑缺血再灌注损伤有良好的保护作用,其机制可能是通过激活Nrf2/ARE信号通路进而增强抗氧化蛋白HO-1表达实现的。
- 任俊伟杨琴范层层陈娜
- 关键词：白藜芦醇脑缺血再灌注氧化应激NRF2HO-1
- 初级纤毛介导的Shh信号对大鼠骨髓基质细胞神经元样细胞分化的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨初级纤毛介导的Sonic hedgehog(Shh)信号对大鼠骨髓基质细胞(MSCs)神经元样细胞分化的影响。方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠MSCs。实验分为白藜芦醇正常培养组、白藜芦醇诱导组、Smoothened(Smo)激动剂SAG组、Smo抑制剂环巴明组,分别给予相应的药物处理。倒置显微镜下观察各组细胞形态;免疫荧光法检测各组细胞初级纤毛及Shh信号通路相关蛋白[Ac-Tu、Patched(Ptc)、Smo、Gli1]的表达;RT-PCR检测各组细胞Smo、Gli1mRNA的表达;蛋白质印迹法检测各组细胞Smo和Gli1蛋白的表达。结果正常培养的大鼠MSCs不表达初级纤毛。经过预诱导或饥饿处理24h后,MSCs表达初级纤毛及Ptc、Smo和Gli1蛋白,其中Smo和Gli1蛋白位于胞质,Ptc蛋白位于初级纤毛。正常培养时,白藜芦醇不能促使Smo移位及MSCs向神经元样细胞分化。当MSCs表达初级纤毛时,白藜芦醇及SAG可使Smo从胞质进入初级纤毛,同时伴随MSCs向神经元样细胞分化及Smo、Gli1mRNA和蛋白表达水平的增加(P<0.05);加入抑制剂环巴明后,Smo仍主要表达于胞质,Smo、Gli1mRNA和蛋白的表达水平降低(P<0.05),MSCs向神经元样细胞的分化受抑制。结论 MSCs表达初级纤毛并存在Shh信号,初级纤毛介导的Shh信号参与调控大鼠MSCs的神经元样细胞分化。
- 黄家贵徐兰沈长波刘舒杨琴
- 关键词：骨髓基质细胞神经元样细胞细胞分化
