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国家自然科学基金(39600110): 作品数：10 被引量：20H指数：3; 相关作者：张西臣李建华尹继刚杨举宫鹏涛更多>>; 相关机构：吉林大学解放军军需大学辉县市农业局更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因在大肠杆菌中的表达被引量：3: 2005年; 构建含微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因的原核表达载体并表达,表达产物为进一步研究该蛋白的功能及特性提供材料。从微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因重组pMD-18T质粒中经H indⅢ和BamHⅠ双酶切回收目的片段,定向亚克隆入高效原核表达载体pET-28b(+)中,构建重组表达质粒,并转化入DE3菌中。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达蛋白。经PCR、酶切鉴定表明,构建了开放阅读框完整的微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因的原核表达质粒pET-L-dsRNA,经IPTG诱导后菌体裂解液上清SDS-PAGE分析显示与预期大小相符的约62000 M r特异蛋白条带。成功的在原核表达系统中表达了微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因蛋白,可用于进一步研究该蛋白的功能和特性。; 李建华张西臣尹继刚杨举; 关键词：微小隐孢子虫原核表达

隐孢子虫(Cryptosporidium)病毒的鉴定及其特性被引量：4: 2001年; 根据已发表的隐孢子虫病毒的序列 ,设计合成 2对引物 ,对小球隐孢子虫 ( Cryptosporidium parvum)、鼠隐孢子虫 ( C.muris)、贝氏隐孢子虫 ( C.baileyi)、火鸡隐孢子虫 ( C.meleagridis)进行 RT-PCR扩增 ,结果发现仅小球隐孢子虫 ( C.parvum)含有大小约为 1 .7× 1 0 3nt和 1 .3× 1 0 3nt2个片段的 ds RNA病毒。将其PCR产物连接到 p MD1 8-T载体上进行克隆测序 ,经与 Gen Bank比较 ,含这 2个片段的 ds RNA病毒与已发表的该虫病毒的同源性分别为 96%和 98%。电泳鉴定发现 ,该病毒对低浓度 RNA酶不敏感 ,且不能被 DNA酶降解。依赖 RNA的 RNA聚合酶活性测定结果表明 ,该病毒具有该聚合酶的活性。电镜观察未发现存在病毒样粒子。; 陈建宝张西臣田宗成李建华尹继刚杨举于卫东; 关键词：隐孢子虫病毒 RT-PCR

痒可平驱除比格犬体内外寄生虫的试验: 2000年; 应用痒可平注射液对比格犬进行驱虫试验 ,以 0 .0 7ml/ kg体重的剂量皮下注射 ,驱虫 1 0 d后 ,蛔虫的转阴率为 94 .7% ,虫卵减少率为 1 0 0 % ,疥螨病症状基本消失 ,但对犬绦虫、犬贾第虫及球虫没有疗效。; 何宏轩张西臣傅彤喻建军; 关键词：比格犬寄生虫

人源蓝氏贾第虫病毒GLV1518-2322基因的表达及表达产物抗血清的制备被引量：1: 2004年; 根据中国人源蓝氏贾第虫病毒 (GLV)全基因组测序结果 ,将其全基因组cDNA上编码贾第虫病毒部分衣壳蛋白的GLV1 5 1 8 2 3 2 2基因克隆到原核表达载体pET 2 8c ( +)上 ,构建了原核表达重组质粒pET 2 8c( +) GLV1 5 1 8 2 3 2 2。SDS PAGE分析表明 ,经IPTG诱导 ,3 2kDa蛋白基因在大肠杆菌BL2 1 (DE3 )pLysS中得到高效表达。以纯化的表达产物为抗原 ,免疫BalB c小鼠 ,同时用病毒粒子免疫BalB c小鼠 ,制备了中国人源蓝氏贾第虫病毒GLV1 5 1 8 2 3 2 2蛋白特异性抗血清 ,ELISA方法测得的纯化蛋白最适抗原包被浓度为1 40 0和病毒粒子抗血清最佳工作浓度为 1 2 0 0。; 田宗成张西臣李建华尹继刚杨举; 关键词：蓝氏贾第虫蓝氏贾第虫基因组

隐孢子虫病毒的鉴定及特性研究: ＜正＞本研究根据已发表的隐孢子虫病毒的序列,设计合成两对引物,通过对不同种类隐孢子虫进行RT-pCR扩增,结果发现仅小球隐孢子虫（C.parvum）含有大小约为1.7nt和1.3ntdsRNA病毒,后将其pCR产物连接到...; 陈建宝张西臣田宗成李建华尹继刚杨举李德昌; 文献传递

阴道毛滴虫病毒RDRP基因的克隆与分析被引量：1: 2008年; 目的对阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因的克隆,以便探讨其功能。方法提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TVV-T1序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物,将其克隆到pMD-18T载体后测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析。结果目的基因片段长度为2271bp,与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的同源性最高为85.2%。结论国内首次成功克隆出阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因序列。; 赵月平张西臣李建华尹继刚宫鹏涛; 关键词：RDRP 克隆

阴道毛滴虫dsRNA病毒的鉴定被引量：1: 2009年; 临床收集阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)进行体外纯培养,通过总核酸电泳筛选携病毒株。分别用DNA酶和RNA酶处理携病毒株总核酸后电泳。电镜观察阴道毛滴虫及其病毒粒子。根据已发表的阴道毛滴虫病毒基因序列设计合成1对引物,进行RT-PCR,将其产物连接到pMD18-T载体,进行克隆并测序,通过BLAST在GenBank进行同源性搜索,并用DNAStar分子生物学软件进行分析。用放射自显影测定阴道毛滴虫病毒的RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)活性。结果显示,阴道毛滴虫病毒呈球形、二十面体、直径33 nm。病毒基因组约5.5 kb,病毒核酸不能被DNA酶(100 mg/L)降解,但可被RNA酶(1.0 mg/L)降解,病毒基因组有RDRP活性。经RT-PCR扩增后得到1条1 454 bp的片段,与预计大小基本相符,其序列与阴道毛滴虫病毒T1基因的同源性为82.9%。结果表明,在我国阴道毛滴虫长春分离株发现阴道毛滴虫病毒,该病毒属于dsRNA病毒。; 赵月平张西臣陈丽凤李建华尹继刚刘全张国才宫鹏涛; 关键词：阴道毛滴虫

阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因cap_(2037)的克隆与表达: 2007年; 目的对阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因的克隆与原核表达。方法提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TvV-T1序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物,将其克隆到pMD-18T载体后测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析,再将其克隆至表达载体pET28a。并以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果目的基因片段长度为2037bp,与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的同源性最高为82.9%,构建原核表达载体pET-Cap2037;IPTG诱导后,SDS-PAGE显示表达产物的大小约75kDa。结论成功克隆出阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因序列,与TVV-T1株序列有82.9%的同源性,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明,75kDa蛋白基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达。; 赵月平张西臣陈丽凤李建华尹继刚宫鹏涛; 关键词：衣壳蛋白克隆原核表达

隐孢子虫病免疫学研究现状被引量：9: 2002年; 对隐孢子虫病病原的抗原成分、细胞免疫和体液免疫、免疫诊断及免疫防治进行了综述。; 何宏轩张西臣张明政赵俊琪; 关键词：隐孢子虫病免疫诊断免疫预防抗原成分细胞免疫人畜共患寄生虫病

阴道毛滴虫病毒介导的EGFP在阴道毛滴虫细胞内的表达被引量：2: 2010年; 目的研究阴道毛滴虫病毒(Trichomonas vaginalis virus,TVV)介导外源基因进入阴道毛滴虫体内表达的能力,探索TVV作为双链RNA病毒转染载体的可能性。方法根据TVV基因组的序列特征,用绿色荧光蛋白(EG-FP)编码基因替换TVV的全部或部分基因编码区,构建TVV与增强型EGFP编码基因的嵌合体pTVV-EGFP,其体外转录体经电穿孔方法转染携病毒阴道毛滴虫株,RT-PCR及SDS-PAGE方法检测EGFP的表达情况。结果电穿孔转染后培养的虫体在荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,且续传15代后仍然存在;RT-PCR检测到EGFP的mRNA,SDS-PAGE检测到转染后虫体及培养上清中有分子质量单位为27 ku的蛋白,与已知EGFP的分子质量相符。结论TVV能成功介导外源性EGFP编码基因在阴道毛滴虫体内表达。; 郭瑞娟李淑红张西臣李建华宫鹏涛杨举张国才; 关键词：阴道毛滴虫增强型绿色荧光蛋白电穿孔

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