国家自然科学基金(81170200)
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- pBiG-CAR真核表达载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的构建及鉴定pBiG-CAR真核表达载体。方法提取C57BL/6胎鼠总RNA,逆转录合成cDNA,经PCR扩增获得CAR基因,与双酶切的pBlue质粒连接,经转化、蓝白筛选及测序鉴定pBlue-CAR载体构建成功。扩增pBlue-CAR的CAR基因,经双酶切后与pBiG质粒连接,构建pBiG-CAR真核表达载体。结果经琼脂糖凝胶电泳,获得目的基因CAR条带,pBlue-CAR目标条带及pBiG-CAR目标条带。基因测序证实所检测重组质粒序列与pBiG-CAR序列完全一致。结论克隆C57BL/6鼠CAR基因、pBlue-CAR重组质粒的构建获得成功,并初步证实pBiG-CAR真核表达载体的构建获得成功,为进一步构建可控心肌特异性CAR过表达转基因鼠提供基础。
- 姜苗苗申景岭孙唐娜王凤梅王帆白景玉卢少玲张烁
- 关键词：C57BL
