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国家科技重大专项(2014ZX09304311-001)

作品数：25 被引量：92H指数：7
相关作者：王兰高凯于传飞张峰王文波更多>>
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发文基金：国家科技重大专项中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金更多>>
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文献类型

  • 16篇期刊文章
  • 2篇会议论文

领域

  • 17篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 12篇抗体
  • 9篇单克隆
  • 9篇单克隆抗体
  • 9篇克隆
  • 7篇单抗
  • 4篇质控方法
  • 3篇电荷
  • 3篇人源
  • 3篇人源化
  • 3篇色谱
  • 3篇生物学
  • 3篇活性
  • 2篇血管
  • 2篇血管内皮
  • 2篇血管内皮生长...
  • 2篇治疗性
  • 2篇生物学活性
  • 2篇受体
  • 2篇微粒
  • 2篇细胞

机构

  • 18篇中国食品药品...

作者

  • 18篇王兰
  • 18篇高凯
  • 17篇于传飞
  • 17篇张峰
  • 16篇刘春雨
  • 16篇王文波
  • 15篇李萌
  • 9篇陈伟
  • 5篇郭莎
  • 4篇郭玮
  • 4篇朱磊
  • 4篇武刚
  • 3篇王军志
  • 2篇王馨
  • 1篇杨雅岚
  • 1篇曹俊霞

传媒

  • 6篇中国药学杂志
  • 4篇药物分析杂志
  • 2篇中华微生物学...
  • 1篇中国肿瘤生物...
  • 1篇中国生物制品...
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇微生物学免疫...
  • 1篇2015年中...

年份

  • 2篇2017
  • 6篇2016
  • 4篇2015
  • 6篇2014
共 25 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
光阻法检测治疗性抗体不溶性微粒的取样方式探讨被引量：2
2017年
目的:考察不同取样方式对光阻法检测小装量治疗性抗体不溶性微粒的影响。方法:采用光阻法对体积小于25 m L的19个靶点65个批次治疗性抗体中≥2μm、≥10μm和≥25μm的不溶性微粒进行检测,将抗体分为3组,取样方式分别为单支样品不同取样体积(0.5、1、3 m L)检测与合并样品(取样体积5 m L)检测,合并样品不同取样体积(0.5、1、3、5 m L)检测,以及合并样品后稀释(稀释20、10、5倍)检测与合并样品原倍检测。结果:对于≥2μm、≥10μm、≥25μm的不溶性微粒,不管是采用单支样品不同取样体积还是采用合并样品后不同取样体积,与合并样品后每次取样5 m L的不溶性微粒检测结果相比,均没有统计学意义上的差异;且≥2μm不溶性微粒的取样体积变异小于≥10μm、≥25μm的不溶性微粒。合并样品后稀释检测的结果则与合并样品检测的结果具有统计学差异,且稀释后的结果要高于未稀释的结果,稀释倍数越大,与未稀释结果的差异也越大。结论:采用光阻法对体积小于25 m L的小装量治疗性抗体进行不溶性微粒检测时,为节省样品并减少外源微粒污染,不管单支取样还是合并取样,均可首先考虑选择小于5 m L的单次取样体积进行检测,而对合并后稀释检测的方式应慎重选择。
郭莎曹俊霞倪永波于传飞刘春雨李萌张峰王文波陈伟高凯王兰
关键词：药品检验取样方法光阻法治疗性抗体不溶性微粒
治疗性单克隆抗体电荷异质性分析方法比较被引量：4
2017年
目的:对4种常用的单抗电荷异质性分析方法进行比对研究。方法:以重组抗TNFα全人源单克隆抗体为例,分别利用离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)、毛细管等电聚焦电泳(CIEF)和成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)4种方法对该抗体的电荷异质性进行分析;利用CIEF和iCIEF 2种方法对抗体主峰等电点(pI)进行分析。结果:4种方法能够对重组抗TNFα全人源单克隆抗体的电荷异构体进行有效的分离和定量,其中IEC和CZE 2种方法检测的电荷异构体峰面积百分比(酸性峰、主峰和碱性峰)较为一致,4种方法检测的碱性峰比例较一致,CIEF和iCIEF检测的主峰与酸性峰比例较其他方法偏高。CIEF和iCIEF检测抗体主峰等电点具有一定差异,其中,聚焦时间长短和pI Marker的选择是影响单抗pI值检测的主要因素。结论:通过抗体电荷异质性分析方法的比较研究可见,在单抗电荷异构体比例和主峰pI测定上4种方法具有一定的差异。对单抗的质控应结合产品特性和表征研究,合理选择电荷异质性分析方法。
王文波武刚于传飞张峰刘春雨李萌陈伟郭莎高凯王兰
关键词：单克隆抗体等电点毛细管电泳离子交换色谱
重组单抗药物质控中物理检查的有关问题探讨被引量：6
2015年
重组单抗药物的物理检查是其质量控制的必要环节,对于评价制品的功能非常重要,对单抗药物安全、有效、质量可控具有重要意义。本文通过阐述物理检查项目中澄清度、浊度、不溶性微粒、澄明度、可见异物和颜色等关键概念及其部分概念表述变化的历史沿革、相似概念的理解和辨析,探讨了中国药典、欧洲药典在上述试验方法的差异,进一步解决了注册检验中物理检查遇到的常见问题,为国内外单抗制品注册检验的相关工作提供参考。
李萌于传飞王兰刘春雨张峰王文波陈伟郭玮高凯王军志
关键词：单抗澄清度浊度不溶性微粒
N端测序作为单克隆抗体常规放行分析方法的探讨被引量：1
2014年
旨在探讨N端测序作为单克隆抗体常规放行分析方法的适用性。应用Edman降解法、质量肽图法对两个针对不同靶点的单抗进行N端测序,用肽图法寻找二者的特征性鉴别肽段,用离子色谱、毛细管区带电泳和成像毛细管等点聚焦电泳进行异质性分析。Edman降解法显示两个单抗轻链和重链的15个氨基酸分别完全一致,质量肽图法显示二者轻重链的T1肽段分别完全一致,而肽图法和3种异质性分析方法则可对两个抗体进行有效鉴别。由于人源化或人源单抗序列框架数量较为有限,两个单抗的N末端序列完全相同,运用Edman降解法进行N端测序是否能作为单抗的常规放行分析方法值得进一步商榷,同时上述多种方法可运用于单抗的鉴别分析,并可对其异质性进行控制,较N端测序分析更具有客观性。
郭玮于传飞李萌王兰张峰刘春雨王文波高凯
关键词：单克隆抗体
离子交换色谱对抗VEGFR2单抗的电荷异质性分析被引量：9
2014年
目的采用离子交换高效液相色谱(CEX-HPLC)分析抗VEGFR2(抗血管内皮生长因子受体2)单抗制品的电荷异质性。方法应用CEX-HPLC技术,对VEGFR2单抗进行电荷异质性分析,并结合羧肽酶B(CpB)和N-糖酰胺酶F(EndoF2)酶切,初步研究其电荷异质性的成因。结果用CEX-HPLC分析CpB酶切前后单抗,证明其碱性变异体主要由C末端赖氨酸不均一性引起;分析EndoF2酶切前后处理的单抗,证明其酸性变异体部分由N-糖末端上的唾液酸修饰所引起。通过2种酶的顺序酶切可相对准确地分析含C-末端赖氨酸以及含唾液酸单抗的比例。结论采用CEX-HPLC可较好地分析单抗的电荷异质性;并结合合适的酶切处理,可判断单抗主要电荷异质性的来源,为保证单抗制品生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。
于传飞王文波刘春雨王兰张峰李萌高凯
关键词：不均一性
重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质控方法的建立被引量：7
2016年
目的重组抗埃博拉病毒抗体是由3种抗埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)的单抗组成的复方抗体,本实验分别对3种重组单抗的质控方法进行研究。方法利用ELISA方法测定重组抗埃博拉病毒单抗的结合活性;利用LC-MS肽图法对其进行鉴别;CE-SDS和SE-HPLC测定纯度;i CIEF法测定等电点及电荷异质性;切糖后对N-糖进行2AB标记,用正向色谱结合质谱对其糖型和含岩藻糖修饰糖型比例分析;利用高效液相色谱法测定其聚山梨酯20含量。结果 3种重组抗埃博拉病毒单抗结合活性的EC50为(12.53±1.62)、(11.10±0.62)、(6.09±0.35)ng·m L^(-1);LC-MS肽图法测定一级序列覆盖率均大于95%;非还原CE-SDS主峰纯度分别为(94.41±0.05)%、(95.58±0.17)%、(96.11±0.05)%;还原CE-SDS重链和轻链纯度之和分别为(98.19±0.06)%、(97.97±0.03)%、(98.57±0.03)%;SE-HPLC主峰分别为(99.59±0.01)%、(99.56±0.01)%、(99.74±0.01)%;i CIEF分析主峰等电点为(8.70±0.01)、(8.26±0.01)、(8.85±0.01);3种单抗聚山梨酯20含量分别为(0.34±0.00)、(0.35±0.00)、(0.35±0.01)mg·m L^(-1);LC-MS对N糖谱分析相对灵敏,3种单抗含岩藻糖糖型比例均小于0.5%。结论本实验的质控方法研究运用了现代化质控理念,建立的质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为突发状况下埃博拉疫情防控提供了用药储备的技术支持,也为其他组合抗体的质量控制积累了经验。
王文波王兰于传飞张峰刘春雨李萌陈伟高凯
基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用
目的利用转基因细胞法建立抗HER2单抗的抗体依赖的细胞介导细胞毒效应（Antibody-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity,ADCC）的生物学活性检测方法。方法利用Jurkat/NF...
刘春雨王馨于传飞徐刚领张峰王文波王兰高凯
关键词：ADCC生物学活性
文献传递
抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的异质性分析被引量：2
2016年
目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADCs)抗CD30-vc-MMAE异质性分析的质控方法。方法本实验应用了分子排阻色谱(SEC-HPLC)、毛细管电泳(CE-SDS)以及实时成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)等分析方法,对抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的大小异质性和电荷异质性进行了分析。结果SEC-HPLC分析的纯度为(95.69±0.01)%;还原CE-SDS分析的纯度为(98.38±0.25)%,非还原CE-SDS可分离开6个主要峰,纯度之和为(97.82±0.44)%;和裸抗药物类似,iCIEF可有效的将酸区,碱区和主峰抗体进行较好地分离,主峰区的峰面积百分比为(43.52±2.03)%。结论初步建立了一种基于半胱氨酸偶联方式的ADC药物抗CD30-vcMMAE异质性分析的质控方法 ,为此类生物制品的质量控制提供参考。
李萌朱磊武刚崔永霏于传飞刘春雨张峰王文波陈伟高凯王兰
曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物对不同乳腺癌细胞系的生物学效应研究被引量：2
2016年
目的研究曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物(T-DM1)对BT-474和HCC1954两种乳腺癌细胞系的不同生物学效应。方法运用流式细胞术检测两种细胞系中人表皮生长因子受体2(HER2)表达水平;运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物与人表皮生长因子受体2抗原的结合能力;运用细胞增殖抑制/杀伤法,检测曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物对两种细胞系的剂量反应曲线。结果人表皮生长因子受体2在两种细胞系中表达水平均较高;曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物与人表皮生长因子受体2抗原的结合能力相似;曲妥珠对BT474具有增殖抑制作用,但是对HCC1954无作用,曲妥珠单抗美坦新衍生物则对BT474和HCC1953均具有杀伤作用。结论在细胞学模型中,曲妥珠单抗美坦新衍生物可以对人表皮生长因子受体2高表达但是曲妥珠耐药的细胞系具有生物学效应。
王兰于传飞杨雅岚武刚郭莎刘春雨张峰王文波李萌陈伟高凯
关键词：耐药
人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体质控方法的建立被引量：7
2016年
目的建立人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体的质控方法。方法采用还原/非还原型毛细管凝胶电泳(CE-SDS)测定人源化抗VEGF单抗的纯度;在0.5和25.0 mg·m L^(-1)浓度条件下,采用分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测定制品中单体和聚合物含量;毛细管等电聚焦电泳(c IEF)测定其等电点;阳离子交换高效色谱(CEXHPLC)测定电荷异构体含量;反相高效色谱(RP-HPLC)和LC-MS检测Lys-C酶切后制品肽图;人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,Hu VEC)增殖抑制试验测定其生物学活性;其余项目按照2015年版《中国药典》要求进行。结果人源化抗VEGF单抗原液和成品的还原型CE-SDS的纯度分别(97.77±0.25)%和(97.43±0.57)%,非还原型CE-SDS纯度分别为(98.97±0.15)%和(98.73±0.06)%;0.5 mg·m L^(-1)浓度下,原液和成品的单体含量分别为(98.07±0.55)%和(98.20±0.52)%;25.0 mg·m L^(-1)浓度下,原液和成品的聚合物含量分别为(2.00±0.53)%和(1.93±0.55)%;CEX-HPLC检测原液和成品的酸性区含量分别为(18.33±0.64)%和(18.60±0.44)%,主峰含量分别为(69.03±0.80)%和(69.20±0.44)%,碱性区含量分别为(12.70±1.37)%和(12.20±0.87)%;c IEF和LC-MS测定原液和成品的等电点和肽图均与参比品一致;HUVEC增殖抑制法测定原液和成品的生物学活性分别为参比品的(107±6)%和(100±10)%。其他各项指标均符合《中国药典》要求及其他相关要求。结论初步建立了人源化抗VEGF单克隆抗体的质控方法,可用于该制品的常规质量控制。
张峰于传飞王文波李萌朱磊陈伟刘春雨郭莎高凯王兰
关键词：人血管内皮生长因子人源化抗体
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