国家自然科学基金(30860265)
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
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- HPV16E7E6抗原表位嵌合体DNA抗肿瘤疫苗的研究被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨HPV16 E7、E6抗原表位与HSP70 N端重组DNA疫苗抗肿瘤活性。方法:以重叠PCR将HPV16 E7基因N端60个氨基酸的编码序列与E6基因的10个(48～57)氨基酸的编码序列及HSP70 N端序列进行融合。以pcDNA3.0为载体,构建真核表达载体pcD-E76HSP。重组质粒免疫C57BL/6小鼠后,通过淋巴细胞增殖实验和细胞毒性杀伤实验研究该疫苗激发的细胞免疫反应及反应强度;观察该疫苗对C57BL/6小鼠TC-1肿瘤细胞移植瘤的治疗效果。结果:重组DNA疫苗免疫C57BL/6小鼠后,小鼠脾淋巴细胞体外增殖明显,并可诱导产生针对TC-1肿瘤细胞的特异性CTL反应;体内抑瘤试验显示该疫苗对HPV16病毒转化的TC-1细胞小鼠移植瘤的生长有抑制作用。结论:该疫苗能激发特异性细胞免疫反应,显著抑制HPV16转化的TC-1肿瘤细胞生长。
- 李轶杰陈开旭庄淑珍马正海张富春
- 关键词：人乳头状瘤病毒16型抗原表位热休克蛋白70DNA疫苗
- spaA嵌合体核酸疫苗增强抗体水平的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨提高丹毒丝菌表面抗原A(spaA)N端核酸疫苗免疫应答的策略。方法:通过基因重组构建含人α胰岛素抑制剂(AAT)的信号肽、大鼠寡聚软骨基质蛋白(COMP)片段、丹毒丝菌spaA基因N末端及3分子的C3d序列的真核细胞表达质粒pcDNA3-AAT-COMP-spaAN-C3d3(pcD-ACSC)和pcDNA3-spa(pcD-S)。肌注免疫LCR小鼠后,RT-PCR检测小鼠体内丹毒丝菌spaAN基因的瞬时表达,ELISA检测小鼠血清spaA抗体水平的变化,以丹毒丝菌XJ1249评价免疫小鼠的保护效果。结果:免疫第4周时pcD-ACSC核酸疫苗激发了较高水平的SpaAN抗体而pcD-S核酸疫苗激发的抗体水平与对照相比差异不显著;同时pcD-ACSC核酸疫苗具有70%保护效果,pcD-S核酸疫苗则不具保护效果。结论:通过融合高表达分泌蛋白信号肽、增加抗原溶解度的序列和分子佐剂C3d3能显著提高spaAN的抗体水平,为丹毒丝菌spaA核酸疫苗的应用奠定基础。
- 陈开旭李轶杰张富春曹文尧李江伟
- 关键词：核酸疫苗
- 乳酸乳球菌同时发送外源性蛋白质/DNA到哺乳动物细胞
- 2012年
- 目的:建立乳酸乳球菌同时发送外源蛋白/DNA到哺乳动物细胞的系统。方法:分别将红色荧光蛋白基因、绿色荧光蛋白真核表达框整合于乳酸菌穿梭载体pMG36e中相关部位。重组质粒电转乳酸乳球菌后,经甘氨酸消弱乳酸乳球菌细胞膜后与哺乳动物细胞293T细胞共培养。结果:红色和绿色荧光蛋白均能在293T细胞表达。结论:借助乳酸乳球菌成功实现同时发送蛋白质/DNA到哺乳动物细胞。
- 李轶杰刘欢欢张富春
- 关键词：乳酸乳球菌
- 不同途径的乳球菌介导重组IL-12基因抗小鼠黑素瘤的效果被引量：6
- 2013年
- 利用自身免疫系统或其组分治疗肿瘤是一种新的治疗手段。白细胞介素-12（intedeukin-12，IL-12）是-种具有多种生物学活性的免疫调节因子，它可以促进NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic lymphocyte，CTL）的活性，
- 李轶杰刘欢欢李新苹张富春
- 关键词：乳酸乳球菌IL-12瘤内注射
- 乳酸乳球菌质粒提取方法的改进与优化被引量：2
- 2011年
- 【目的】建立一种简便、快速、安全的乳酸乳球菌质粒提取方法。【方法】质粒提取采用文献报道的乳酸菌质粒提取与常用的大肠杆菌质粒提取相结合的方法,并对提取过程中溶菌酶浓度、溶菌酶处理方式和时间进行优化。【结果】采用改良后的方法提取乳酸菌质粒效果显著。最佳溶菌酶浓度是10 mg/mL,最佳溶菌酶处理方式和时间是37℃振荡培养30 min。【结论】该方法避免了毒性物质溴化乙锭的使用,同时减少了通常提取乳酸菌质粒的复杂步骤,是一种高效、快速、安全的提取乳酸菌质粒的方法。
- 任志娟李轶杰马正海
- 关键词：乳酸菌质粒溶菌酶
- 聚乙二醇修饰的壳聚糖包裹DNA的转染效果研究被引量：1
- 2010年
- 目的:为探讨聚乙二醇(PEG,MW4000)修饰的壳聚糖用于包裹质粒DNA(Chi-DNA)是否能有效提高口服发送的外源基因在消化道中的表达量。方法:用PEG修饰的壳聚糖包裹不同剂量(10μg,50μg,100μg)的质粒(pCMVβ),形成壳聚糖纳米复合物,通过口服发送后经X-gal染色法检测pCMVβ在小鼠消化道内的表达效果。结果:胃酸消化实验及DNaseⅠ消化实验均表明经PEG修饰的壳聚糖纳米粒能有效地保护DNA,使其免受胃酸及DnaseⅠ的降解。同时在小鼠消化道内的表达量较修饰前明显增加,随着所发送DNA剂量的增加,表达量也相应增加,且包裹10μg质粒的DNA纳米复合物的表达量相当于100μg未修饰复合物的表达水平。结论:经PEG修饰的Chi-DNA纳米复合物有较高的基因转染效果,有望作为基因治疗中高效非病毒口服发送系统的材料。
- 蔡文萍李轶杰
- 关键词：壳聚糖口服
- 不同修饰对壳聚糖转基因效果的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨不同修饰的壳聚糖包裹的质粒(Chi-DNA)纳米复合物在口服发送中外源基因在消化道中的表达差异。方法:分别使用明胶、海藻酸钠、PEG及乙酰化修饰包裹含LacZ的质粒pCMVβ的壳聚糖纳米颗粒,通过口服发送后经X-gal染色检测目的基因在小鼠体内的表达。结果:修饰后的Chi-DNA纳米复合物都能抵抗胃酸的降解0.5h以上,其中PEG及乙酰化修饰的Chi-DNA纳米复合物在胃酸处理1h时仍有部分残留。X-gal染色显示,修饰后的Chi-DNA纳米复合物都有β半乳糖苷酶的表达,其中PEG、海藻酸钠修饰的Chi-DNA纳米复合物在鼠胃和小肠中表达量最高。结论:PEG、海藻酸钠修饰的Chi-DNA纳米复合物有望成为高效的基因治疗用非病毒口服发送系统。
- 李轶杰蔡文萍张富春
- 关键词：壳聚糖修饰纳米复合物基因转染
- 重组凝乳酶原基因的原核表达及其抗血清的制备被引量：3
- 2012年
- 目的:原核细胞表达密码子优化的凝乳酶原并制备抗血清。方法:以大肠杆菌密码子的偏爱性整合牛、羊和骆驼的凝乳酶原(pCHY)序列后分别克隆至大肠杆菌原核表达载体pET-30a和真核高效抗体制备核酸疫苗载体pcDNA3-AAT-COMP-C3d3(pcD-ACC)上。原核表达质粒pET30a-pCHY转入大肠杆菌后经IPTG的诱导得到高表达的凝乳酶原,作为检测抗原。真核表达质粒pcDNA3-AAT-COMP-pCHY-C3d3(pACCC)用水动力转染法验证其在mRNA水平的表达后,采用DNA prime-protein boost的策略免疫新西兰大白兔后制备抗体并检测其特异性和效价。结果:SDS-PAGE和Western blot检测表明,成功表达出与预期相对分子质量大小相符的重组凝乳酶原;ELISA检测表明获得高效价的凝乳酶原抗血清。结论:通过密码子优化及核酸疫苗载体pcD-ACC联合DNAprime-protein boost的免疫策略可制备高表达量的重组凝乳酶原,得到接近于蛋白免疫水平的高滴度抗体。
- 李新苹刘欢欢普燕张富春李轶杰
- 关键词：凝乳酶原密码子优化抗体滴度
- 重组凝乳酶原在大肠杆菌中的表达及活性研究被引量：4
- 2011年
- 为了提高干酪生产中起重要凝乳作用的凝乳酶的原核表达效率,分析了Genbank中牛、羊和骆驼凝乳酶原(prochymosin,pCHY)的保守序列及大肠杆菌密码子的偏爱性,合成了凝乳酶原序列,并将其克隆至大肠杆菌原核表达载体上。经IPTG的诱导得到高效表达的凝乳酶原;Western blotting检测证明了其具有免疫原性;经pH值2到6活化后成功自剪切,得到大小约36 ku的有凝乳活性的凝乳酶。研究获得较高表达水平具有凝乳活性的重组凝乳酶。
- 李新苹刘欢欢普燕张富春李轶杰
- 关键词：凝乳酶原密码子优化
