国家自然科学基金(30572081)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 小干扰RNA抑制neuro-2a细胞内源β位淀粉样前体蛋白裂解酶1基因的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:分析小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)抑制neuro-2a细胞内源β位淀粉样前体蛋白裂解酶1基因(Beta-site APP cleaving enzyme protein,BACE1)的表达情况。方法:实验于2004-12/2006-06在中山大学中山医学院和上海交通大学农业与生物学院完成。①用脂质体将EGFP基因表达载体pEGFP-C1 Vector和体外转录合成的针对EGFP基因的小干扰RNA(siEGFP)分别或同时转染neuro-2a细胞,在倒置荧光显微镜下计算EGFP在neuro-2a细胞中的表达率。②将体外转录合成的siBACE1-1,siBACE1-2,siBACE1-3转染neuro-2a细胞,干扰24,48,72h后分别用Real time RT-PCR定量分析siBACE1对内源BACE1基因表达的抑制率和干扰的时效性。结果:①外源EGFP基因转染neuro-2a细胞后,43%neuro-2a细胞高表达EGFP蛋白。通过转染siEGFP则可有效抑制EGFP基因表达。②3个干扰位点的siBACE1对BACE1基因表达有不同的抑制效率,siBACE1-3使BACE1m RNA表达水平下降60%,siBACE1-1为13%,siBACE1-2对BACE1 mRNA无明显的抑制作用。③siBACE1抑制内源BACE1基因的表达与干扰时间相关,siBACE1干扰24h、48h后BACE1 mRNA的表达与正常组无明显差异(P>0.05),但干扰72h后,siBACE1-3和siBACE1-1均使BACE1 mRNA表达量下降。结论:体外转录合成的siBACE1能有效抑制neuro-2a细胞内源BACE1基因表达,其抑制率与BACE1基因的干扰位点和干扰时间相关。
- 张小勤李峰赵艳彭映基潘玉春崔芳岩孟和
- 关键词：BACE1
- RNAi下调β分泌酶表达治疗阿尔茨海默病的前景展望
- 2006年
- β淀粉样蛋白沉积是多种因素导致阿尔茨海默病发病的共同通路。本文介绍了近年来在β淀粉样蛋白及其相关的β分泌酶在阿尔茨海默病发病机制作用研究中所取得的进展,并对利用RNA干扰技术下调β分泌酶表达治疗阿尔茨海默病的进展及前景作一综述,以期为治疗阿尔茨海默病的药物研发提供思路。
- 张小勤李峰
- 关键词：RNA干扰阿尔茨海默病Β分泌酶
- siRNA抑制外源绿色荧光蛋白在neuro-2a细胞株中的表达
- 2007年
- 目的:用RNAi技术抑制哺乳动物神经元中外源报告基因的表达,并探讨该过程中RNAi的时间及剂量效应,为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供参考。方法:采用神经细胞来源的细胞系neuro-2a小鼠神经瘤细胞为模型,将外源绿色荧光蛋白(GFP)基因转染到neuro-2a细胞内,利用体外转录法合成siRNA,分为3个剂量组对其进行干扰。结果:Neuro-2a细胞可以被有效地转染,而且siRNA在neuro-2a细胞内可以有效发挥干扰作用。这种干扰作用呈现出一定的剂量效应。结论:RNAi技术可以成功用于neuro-2a细胞抑制基因的表达,这种对GFP表达规律及RNAi剂量效应的研究为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供了一定的理论参考和依据。
- 张小勤李峰赵艳彭映基潘玉春孟和崔芳岩
- 关键词：RNA干扰绿色荧光蛋白神经元
