河南省科技攻关计划(092102210212)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：河南工程学院中国科学院研究生院河南农业大学更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 兔血清对氧磷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化
- 2011年
- 利用RT-PCR扩增新西兰大白兔肝脏PON1编码区全长序列,克隆入表达载体pET32a中,构建了重组表达载体pET32a-PON1,转化大肠杆菌获得表达菌株。SDS-PAGE表明该重组表达蛋白具有部分可溶性,酶活测定结果显示该可溶性蛋白具有降解芳香酯酶和内酯酶的活性。该研究实现了兔血清对氧磷酶在大肠杆菌中的功能性表达,并获得了纯化的蛋白,为下一步对氧磷酶PON1的功能研究奠定基础。
- 谷立坤张建云
- 关键词：逆转录PCR原核表达对氧磷酶可溶性蛋白
- 解淀粉芽杆菌中性植酸酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2010年
- 采用PCR法从解淀粉芽孢杆菌BA11中克隆到一个中性植酸酶phyc基因,将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上并电转化至宿主细胞GS115后进行诱导表达。SDS-PAGE试验表明,该重组中性植酸酶在毕赤酵母宿主细胞中实现了高效分泌性表达。植酸酶活性测定结果显示阳性克隆子在诱导72h酶活性达到最高值,活性为2330U/L。
- 张建云谷立坤崔树军武秀琴
- 关键词：中性植酸酶毕赤酵母解淀粉芽孢杆菌异源表达
- 基于易错PCR技术的α-淀粉酶基因的定向进化研究被引量：3
- 2010年
- 采用基因体外定向进化策略中易错PCR技术,用碱基类似物5-溴脱氧尿苷三磷酸(5-BrdUTP)部分取代脱氧胸苷三磷酸(dTTP),对野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因进行了体外诱变。通过鉴别培养基进行筛选,得到5个具有高酶活的诱变基因,利用生物学软件DNAstar和出发基因序列进行比较,分析了突变位点和酶功能变化的相应关系。结果显示:基因诱变后酶活的改变主要是由淀粉酶基因空间结构的改变而引起的,而不是由启动子的变化引起的。
- 张建云谷立坤陈红歌
- 关键词：定向进化碱基类似物诱变Α-淀粉酶基因
- 解淀粉芽孢杆菌中性植酸酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2010年
- 采用PCR法从解淀粉芽孢杆菌BA11中克隆到一个中性植酸酶phyc基因,将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上并电转化至宿主细胞GS115后进行诱导表达。SDS-PAGE试验表明:该重组中性植酸酶在毕赤酵母宿主细胞中实现了高效分泌性表达。植酸酶活性测定结果显示阳性克隆子在诱导72h酶活性达到最高值,活性为2330U/L。
- 张建云崔树军谷立坤武秀琴
- 关键词：中性植酸酶毕赤酵母解淀粉芽孢杆菌异源表达
