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唾液链球菌尿素酶结构亚基的克隆和表达被引量：1: 2011年; 目的:克隆和表达唾液链球菌尿素酶结构亚基UreA、UreB、UreC。方法:用已构建的含唾液链球菌57.I尿素酶基因簇的重组质粒为模板,分别克隆、双酶切、连接、转化,构建含结构基因的表达质粒,IPTG诱导表达,亲和层析纯化蛋白。结果:成功构建表达质粒,经诱导、亲和层析,获得高纯度、高浓度的UreA、UreB、UreC 3种目的蛋白。结论:成功诱导纯化唾液链球菌尿素酶的结构亚基,为今后各亚基的酶活分析和抗体制备等研究奠定基础。; 栾晓玲王艳冯希平; 关键词：克隆尿素酶

含尿素酶基因的重组变链菌JH1140变链素对变链菌UA159的抑制作用被引量：2: 2010年; 目的:检测重组变形链球菌JH1140的变链素抑制其他变形链球菌(变形链球菌UA159)的效果。方法:以变形链球菌UA159为指示菌,选取野生型变形链球菌JH1140和重组变形链球菌JH1140(各20例)与变形链球菌UA159共同培养,观察记录抑菌环直径。采用SAS9.1软件包进行方差分析,比较2种细菌的抑菌环直径,分析抑菌能力。以不同浓度变形链球菌UA159为指示菌,取野生型变形链球菌JH1140和重组变形链球菌JH1140(各20例)与变形链球菌UA159共同培养,观察记录抑菌环直径。采用SAS9.1软件包进行方差分析,比较不同浓度指示菌条件下,重组变形链球菌JH1140的抑菌环直径。结果:相同指示菌浓度下,野生型变形链球菌与重组变形链球菌的抑菌环直径之间未见显著差别,P>0.05。不同浓度指示菌条件下,重组变形链球菌JH1140的抑菌环直径未见显著差别,P>0.05。结论:重组重组变形链球菌JH1140与野生型变形链球菌JH1140相比,抑菌能力未见改变。重组细菌在表达新基因的同时,其变链素分泌未受影响。; 芮昕冯希平; 关键词：变形链球菌变链素基因重组尿素酶

口腔细菌尿素酶的检测被引量：2: 2011年; 尿素可以持续地从健康人的唾液和龈沟液中分泌出来,被口腔细菌尿素酶快速水解,产生的氨能够升高口腔环境的pH值,引起菌斑生物膜的改变,从而减少龋齿的发生。由于尿素水解作用对口腔环境中微生物致病机制的重要影响,所以对尿素酶及其活性的检测对预防和治疗龋齿可能具有很大的帮助。现分别从定性检测、半定量检测、定量检测3个不同层面,将近年来报道的口腔细菌尿素酶的检测方法作一综述。; 栾晓玲王艳冯希平; 关键词：口腔细菌尿素酶龋齿

沃氏葡萄球菌尿素酶基因保守序列的克隆被引量：5: 2006年; 目的:克隆沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。方法:通过脲酶试验,定性检测沃氏葡萄球菌的尿素分解活性,应用PCR克隆其尿素酶基因中的保守序列,测序并分析。结果:沃氏葡萄球菌具有尿素分解活性,其基因组中含有尿素酶基因,与已知的尿素酶基因具有高度同源性。结论:本研究证实沃氏葡萄球菌具有尿素分解活性,并克隆出具有该活性的沃氏葡萄球菌尿素酶基因的部分保守序列。; 王艳冯希平李鸣宇黄正蔚; 关键词：尿素酶保守序列

唾液链球菌尿素酶基因的克隆和表达被引量：2: 2010年; 目的克隆唾液链球菌57.Ⅰ的尿素酶基因,并在不添加外源性镍离子的情况下表达出有活性的尿素酶,以期为进一步研究口腔细菌的尿素分解机制和牙菌斑生物膜的产碱活性提供依据.方法将尿素酶基因分成前、中、后三段,分别设计引物,应用聚合酶链反应（PCR）法进行克隆并测序鉴定;进而采用双酶切的方法将分段克隆的产物逐步连接为完整的尿素酶基因;将含有完整尿素酶基因的质粒转化感受态大肠杆菌TG-1,经酚红脲酶试验检测其尿素分解活性.结果所克隆的唾液链球菌57.Ⅰ尿素酶基因序列正确;无需添加氯化镍,该克隆能够在大肠杆菌中表达出有活性的尿素酶,分解培养基中的尿素产生氨,升高环境中的pH值.结论本研究克隆的唾液链球菌尿素酶基因无需添加外源性镍离子就能够表达出尿素分解活性,可用于今后替代疗法防龋研究中构建更适合临床应用的产碱效应菌.; 王艳冯希平谢幼华陶丹英栾晓玲; 关键词：尿素酶镍龋齿

口腔常见菌的尿素酶及其表达影响因素被引量：1: 2010年; 口腔中具有尿素酶的主要细菌有唾液链球菌、内氏放线菌、幽门螺杆菌等,通过分解尿素产氨,抵抗酸性环境,有利于本身和其他不耐酸细菌的生长,对口腔微生态的平衡起着重要作用。口腔常见菌的尿素酶表达活性受pH值、镍离子、碳水化合物、氮源等其他因素的影响。该文就口腔中常见含尿素酶细菌对微生态平衡的作用及影响尿素酶活性的因素作一综述。; 陶丹英冯希平; 关键词：尿素酶内氏放线菌 PH值

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国家自然科学基金(30572038)