国家自然科学基金(30270875)
- 作品数：10 被引量：120H指数：6
- 相关作者：朱常香温孚江宋云枝刘红梅朱俊华更多>>
- 相关机构：山东农业大学山东省作物生物学重点实验室烟台市农业科学研究院更多>>
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- 正向和反向重复RNA介导的抗马铃薯Y病毒基因工程比较研究被引量：51
- 2004年
- RNA介导的病毒抗性与RNA沉默现象密切相关。反向重复cDNA序列(IR)的转录产物往往形成双链RNA结构,而双链RNA是诱发RNA沉默的有效因子。据此,本研究通过体外合成马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)5'端反向重复cDNA序列和正向重复cDNA序列(DR),分别构建植物表达载体pROK-IR和pROK-DR,利用农杆菌介导方法转化烟草NC89,比较这2种转基因烟草在RNA介导抗病性方面的差异。抗病性检测表明,转化IR和DR的转基因烟草均可获得抗病程度达到免疫的植株,但转化IR序列可大大提高抗病植株在转基因植株中的比例。分析结果表明所获得的抗病性为RNA介导的抗病性,是RNA沉默的结果。这一研究结果为利用IR策略进行抗病毒遗传育种提供了理论依据,并为讲一步开展RNA介导抗病性的机制研究奠宗了基础。
- 朱俊华朱常香温孚江宋云枝
- 关键词：RNA介导基因工程
- 利用RNA介导的抗病性获得抗2种病毒的转基因烟草被引量：23
- 2005年
- RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX-CP)基因和非翻译的马铃薯Y病毒的衣壳蛋白(PVY-CP)基因组成嵌合基因,构建植物表达载体pROKXY,利用农杆菌介导法转化烟草NC89,获得6株对PVX和PVY的混合侵染表现为免疫的转基因植株。分子分析表明,这种抗性为RNA介导的病毒抗性。这一研究结果为利用RMVR进行植物多抗病毒育种提供了重要数据和资料。
- 白庆荣朱俊华刘晓玲朱常香宋云枝温孚江
- 关键词：马铃薯X病毒嵌合基因转基因烟草
- 马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因和外壳蛋白基因介导的抗病性研究被引量：13
- 2005年
- 以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达载体pROKⅡp25和pROKⅡCP。利用农杆菌介导方法转化烟草NC89。经卡那霉素筛选、PCR检测,共获得转非翻译PVX p25的转基因植株78株,转非翻译PVX CP的转基因植株83株。抗病性试验表明,转非翻译PVX p25的78株中有31株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为39.7%;转非翻译PVX CP的83株中有11株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为13.3%。分子生物学检测和抗病性分析表明,抗病性均为RNA介导的病毒抗性。研究结果初步证明,转非翻译PVX p25可以更有效地获得抗PVX转基因植株。
- 刘晓玲宋云枝刘红梅温孚江朱常香白庆荣
- 关键词：马铃薯X病毒运动蛋白外壳蛋白
- 正向和反向重复RNA介导的抗PVY比较研究
- RNA介导病毒抗性是近几年发现并引起广泛关注和深入研究的一种植物抗病毒基因工程策略。RNA介导的病毒抗性的本质是一种RNA沉默现象。双链RNA在细胞内的存在是RNA沉默的直接诱因。目前这方面的研究主要集中在使用一些标记基...
- 朱俊华朱常香温孚江宋云枝
- 关键词：PVYRNA
- 文献传递
- RNA介导的病毒抗性在转基因烟草中的遗传分析被引量：23
- 2005年
- 以含非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白 (PVY MCP)基因的抗病和感病T0 代转基因烟草为材料 ,对转基因及RNA介导的病毒抗性在T1～T4代转基因植株中的遗传进行了研究。结果表明 ,在含低拷贝 (1～ 2个 )转基因的感病植株后代中 ,转基因是作为一个单显性遗传位点 ,遵循孟德尔遗传分离规律 ,各世代转基因植株仍表现感病。含多拷贝 (4～ 6个 )转基因的抗病植株 ,转基因在T1代的分离虽符合多位点插入的 15∶1和 6 3∶1遗传规律 ,但转基因发生了重排 ,RNA介导的病毒抗性表现为不稳定遗传。从含多拷贝转基因的抗病植株的T1代株系中 ,分离获得了两株含 2个拷贝转基因的抗病植株 ;其后代中 ,转基因及抗性遗传遵循孟德尔遗传分离规律 ,可稳定遗传和表达 ,获得纯合的抗病转基因株系。对转基因在不同抗病类型植株中整合方式分析显示 。
- 朱常香刘红梅宋云枝温孚江
- 关键词：马铃薯Y病毒转基因烟草
- 病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用被引量：3
- 2008年
- RNA沉默是一种依赖核酸序列特异性的RNA降解过程,是动物、植物抵抗病毒等外源核酸的一种保守防御机制。而针对寄主的这种防御机制,许多病毒演化出RNA沉默抑制子以克服这种防御反应。本文综述了几种动物、植物病毒抑制子的结构和作用方式,讨论了病毒抑制子之间的交叉抑制功能,病毒运动和沉默抑制子之间的关系,病毒RNA和亚病毒寄生物通过沉默抑制子而进行的自我保护原理,抑制子对于miRNA(microRNA)途径的影响以及病毒抑制子在生物技术方面的应用。
- 孙燕霞刘红梅
- 关键词：RNA沉默小分子干扰RNA微RNA
- 马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段长度对RNA介导抗病性的影响被引量：25
- 2004年
- 在已证明转化马铃薯Y病毒(PVY)全长衣壳蛋白基因可获得高度抗病的转基因烟草、且这种抗病性为RNA介导抗病性的基础上,克隆了马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)3'端202(1/4 CP),417(1/2 CP)和603 bp(3/4 CP)的部分基因片段(CP202,CP417和CP603),并分别构建植物表达载体pROKⅡ-CP202,pROKⅡ-CP417和pROKⅡ-CP603.利用农杆菌介导方法转化烟草NC89.抗病性鉴定表明,转化1/2 CP和3/4 CP基因片段的转基因烟草均可获得抗病程度达到免疫的植株,而转化1/4CP的基因片段没有获得抗病植株.分子分析结果表明这种抗病性为RNA介导的抗病性,是转录后基因沉默的结果.研究表明,能够诱发RNA介导抗病性所需的PVY-CP基因的最短有效片段长度可能介于202和417 bp之间.这一研究结果对改进利用转录后基因沉默策略来防治植物病毒病害以及研究转录后基因沉默机制具有意义.
- 朱俊华竺晓平温孚江白庆荣朱常香宋云枝
- 关键词：马铃薯Y病毒转基因烟草基因沉默
- 马铃薯X病毒运动蛋白基因的原核表达、抗血清制备及应用被引量：3
- 2008年
- 构建马铃薯X病毒运动蛋白(P25)原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达融合蛋白,所表达的P25蛋白经SDS-PAGE电泳纯化后免疫小鼠,抗血清效价为1∶4000,抗血清与PVX有特异性反应(P/N>2),且具有较强的反应特异性,而与PVY、TMV均不发生反应。该方法制备的抗血清可用于ELISA检测PVX感病植株及Western blot检测转基因植株。
- 刘秀君张献军刘兰伟孙燕霞刘红梅
- 关键词：马铃薯X病毒运动蛋白原核表达抗血清转基因烟草
- 核基质结合区对马铃薯Y病毒全长非翻译CP基因介导抗病性的影响被引量：7
- 2005年
- 为探索核基质结合区(m atrix attachm ent reg ions,MAR s)对RNA介导的病毒抗性的影响,我们将从烟草中克隆到的核基质结合区TM 2构建在包含马铃薯Y病毒全长非翻译CP基因的植物表达载体pRPVYCPN的表达盒的两侧,构建了植物表达载体pRTM 2CPNTM 2。采用农杆菌介导基因转化法,将表达载体pRPVYCPN和pRTM 2CPNTM 2转入烟草品种NC89中,分别获得了144株和344株转基因烟草。抗病性检测发现,核基质结合区的存在能明显提高RNA介导抗性的产生效率。在含MAR s转基因植株中,抗病植株的比率为15.1%,而不含核基质结合区的转基因植株的抗病比率则为8.3%。这一研究结果对抗病毒植物的分子育种和转基因表达调控有指导意义。
- 迟胜起宋云枝朱常香郑成超刘晓玲温孚江
- 关键词：核基质结合区马铃薯Y病毒
- 高温激活RNA沉默介导的心叶烟抗病毒防御反应被引量：1
- 2008年
- 在真核细胞内,RNA沉默是一种保守的抵抗病毒及外源基因等寄生分子的防御机制。温度可以明显地影响植物体与病毒之间的相互作用。在常温状态下,常常会伴随病毒病的爆发,但在较高温度下,症状则会减轻,甚至有些感病植株新生叶片可以较快地恢复健康。目前这类现象的内在机制还不完全清楚。本文通过定量分析不同温度下马铃薯X病毒(Po-tatovirus X,PVX)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)侵染的心叶烟(Nicotiana glutinosa)植株体内病毒蛋白含量,结合症状观察,确定30℃左右是PVX和PVY在心叶烟上引起症状消失即发生系统性RNA沉默的临界温度,此时的感病植株上部新生展开叶片呈现无症状态,下部已发病叶片症状不变。在常温时,由病毒激发的RNA沉默会受到抑制,病毒来源的小分子干涉RNA(small interfering RNAs,siRNAs)含量极少或根本检测不到,植株对于病毒的敏感性较强。当温度达到30或32℃时,感病植株下部症状保持叶片中,病毒起源的siRNAs含量明显增加,而上部新生健康叶片中却检测不到siRNAs的存在。这说明高温激活了RNA沉默介导的植物抗病毒防御反应,导致病毒症状减轻甚至消失。
- 孙燕霞张献军刘兰伟刘秀君刘红梅
- 关键词：RNA沉默SIRNASPVXPVY
