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国家自然科学基金(31200503)

作品数：12 被引量：37H指数：4
相关作者：华玉伟黄华孙黄天带李季蔡海滨更多>>
相关机构：中国热带农业科学院海南大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目国家天然橡胶产业技术体系建设专项更多>>
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文献类型

  • 12篇中文期刊文章

领域

  • 9篇农业科学
  • 4篇生物学

主题

  • 10篇橡胶树
  • 10篇胶树
  • 8篇基因
  • 7篇转基因
  • 2篇植物
  • 2篇植株
  • 2篇体细胞胚
  • 2篇胚状体
  • 2篇启动子
  • 2篇转基因植株
  • 2篇花青素
  • 2篇基因植株
  • 2篇巴西橡胶
  • 2篇巴西橡胶树
  • 2篇FCA
  • 1篇地高辛
  • 1篇叶片
  • 1篇液相
  • 1篇液相色谱
  • 1篇遗传稳定性分...

机构

  • 12篇中国热带农业...
  • 5篇海南大学

作者

  • 12篇华玉伟
  • 10篇黄华孙
  • 10篇黄天带
  • 7篇李季
  • 4篇蔡海滨
  • 3篇陈涛
  • 2篇鲁旭
  • 2篇孙芳
  • 1篇毕政鸿
  • 1篇杨加伟
  • 1篇辛士超
  • 1篇顾小川

传媒

  • 5篇热带作物学报
  • 2篇热带农业科学
  • 2篇基因组学与应...
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇广东农业科学
  • 1篇热带生物学报

年份

  • 1篇2017
  • 1篇2016
  • 3篇2015
  • 4篇2014
  • 3篇2013
共 12 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
多重PCR技术在橡胶树转基因分子鉴定中的应用被引量：2
2014年
为了同时检测橡胶树转基因胚状体和叶片中含有的多个目标基因序列,并排除扩增结果的假阴性,利用正交试验首次建立了橡胶树管家基因(HbActin)、目标基因新霉素磷酸转移酶II(NptII)基因和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因的多重PCR检测体系。利用2种酶(PCR Mix酶和Taq酶)对18个转基因胚状体和叶片进行单一引物PCR扩增和多重PCR检测。结果表明:多重PCR检测结果与单一PCR结果完全一致,且多重PCR体系带型清晰,无非特异性扩增,更易读取。多重PCR检测系统具有简单、准确并且高效等特点,只需要进行一个反应就可以检测多个目标基因序列,因而在转基因分子鉴定上具有非常重要的应用价值与潜力。
李季黄天带华玉伟黄华孙
关键词：多重PCR橡胶树分子鉴定
橡胶树转基因植株遗传稳定性分析被引量：6
2013年
以GUS染色为阳性的抗性胚状体继代再生植株的叶片为材料,通过PCR分析结合GUS染色对橡胶树转基因植株进行初期的阳性鉴定。结果表明,在59份转基因再生植株中,两对特异引物的PCR扩增结果与GUS染色检测结果一致,其中37株仍然表现为阳性,而22株却检测不到目的基因的存在以及GUS基因的表达,表现为外源基因的丢失。因此,初步推测低选择压造成了早期阳性胚状体在长期的连续继代培养再生植株的过程中发生了外源基因的丢失现象,并结合现有的研究提出了初步的解决措施。
李季黄天带蔡海滨华玉伟黄华孙
关键词：橡胶树转基因检测基因丢失继代
橡胶树体细胞胚花青素HPLC分析被引量：4
2015年
花青素已成为植物遗传转化的新型可视化报告基因。为了探索花青素作为报告基因在橡胶树体细胞胚遗传转化中的应用,本研究通过橡胶树体细胞胚花青素HLPC分析,检测橡胶树体细胞胚中是否自身累积花青素及其种类。结果显示,利用3 mol/L的盐酸水溶液沸水浴,从离体培养的橡胶树体细胞胚中分离到花青素,同时,HPLC测定发现橡胶树体细胞胚中花青素主要有两个吸收峰,分别出现在10.571 min和11.763 min,与标准品比对发现保留时间为11.742 min为矢车菊素,其含量为4.613 7μg/g,另一个需要进一步分析。橡胶树体细胞胚在离体培养条件下能够检测到花青素的积累,说明在体细胞胚中存在完整的花青素代谢途径,通过花青素基因调控,有望实现花青素作为橡胶树遗传转化的报告基因。
陈涛畅姣黄天带黄华孙华玉伟
关键词：花青素
巴西橡胶树LEAFY基因的克隆及其对拟南芥的转化
2015年
研究巴西橡胶树开花调控机理是缩短橡胶树育种周期的重要研究内容。本研究通过同源克隆的方法,克隆了2个橡胶树LEAFY(简写为LFY)基因,分别命名为HbLFY1和HbLFY2。采用农杆菌介导法,将其转化野生型拟南芥和拟南芥LFY突变体,发现克隆的橡胶树LFY1和LYF2基因并不能显著促进拟南芥提早开花,也不能恢复拟南芥LFY突变体开花时间。据此推测,LFY基因可能不是调控橡胶树开花的关键基因或不能独自起作用。
应佳志毕政鸿陈涛华玉伟
关键词：巴西橡胶树植物表达载体转基因
橡胶树转基因植株Southern杂交体系的优化被引量：2
2014年
以地高辛标记的Southern杂交技术已广泛应用于多个物种中。选择橡胶树为材料,就基因组DNA的提取、探针标记方法的选择以及具体的杂交操作过程等方面对该体系进行了优化。结果表明,至少40μg高质量的DNA在300μL的大酶切体系中,酶切12 h可获得良好效果;PCR法标记的探针杂交条带清晰、背景浅,其效率明显强于随机引物法标记的探针。本研究优化的体系信号强、背景浅和灵敏度高,为橡胶树Southern杂交鉴定分析提供参考。
李季鲁旭黄天带华玉伟黄华孙
关键词：橡胶树转基因SOUTHERNBLOT地高辛
转基因橡胶树中载体骨架序列的初步研究
2014年
以橡胶树转基因材料为研究对象,首次基于载体左右边界序列设计的特异引物进行载体骨架序列的初步PCR检测,结果表明,15个转基因阳性株系中有5个和2个株系分别含有左侧和右侧的边界序列,占33.3%和13.3%,结合这些株系PCR产物的序列分析结果进一步证实除T-DNA区以外的载体骨架序列确实整合到这些株系的植物基因组中。同时对载体骨架序列存在的弊端及可能的解决途径做了相应的分析。
李季黄天带蔡海滨华玉伟黄华孙
关键词：橡胶树转基因PCR
茉莉酸诱导橡胶树体细胞胚花青素的累积被引量：16
2016年
花青素是一种简单、安全和肉眼直接可辨转基因筛选标记。本研究为了建立橡胶树体细胞胚花青素调控基因发掘的实验体系，探讨了茉莉酸处理方式和时间对橡胶树体细胞胚累积花青素的影响，以及分析了花青素合成关键结构基因在茉莉酸处理前后表达。结果显示140μmol／L茉莉酸甲酯液体培养4h后，再转移到无茉莉酸甲酯的固体培养基上继续培养，不但能够诱导花青素累积，而且较直接固体培养基添加茉莉酸甲酯，提早1～2d观察到花青素的累积，同时，累积花青素主要为矢车菊，处理后矢车菊含量提高了5倍以上。再者，花青素合成相关13个结构基因在茉莉酸甲酯处理后均上调表达，尤其HbLDOX上调表达13．29倍。本研究证实了茉莉酸是诱导橡胶树体细胞胚花青素累积的有效诱导剂，而且HbLDOX可能是橡胶树体细胞胚花青素累积关键限速步骤。
畅姣陈涛黄天带黄华孙华玉伟
关键词：茉莉酸甲酯橡胶树体细胞胚花青素
巴西橡胶树FCA基因的克隆及功能分析被引量：2
2014年
FCA基因是植物自主开花途径中的重要调控基因,已被证实是促进植物开花的保守基因。研究通过巴西橡胶树甲基化文库获得橡胶树HbFCA基因一段434 bp的保守cDNA序列,应用RACE技术,成功克隆得到橡胶树的HbFCA基因。进一步通过构建HbFCA真核过表达载体pXCS-HbFCA-HAStrep,并转化拟南芥发现,转基因植株35 d后已经抽薹开花,野生型对照未开花,HbFCA的过表达能显著促进拟南芥开花。
鲁旭孙芳华玉伟黄华孙
关键词：橡胶树转基因RT-PCR
橡胶树HbFCA启动子的克隆及其在橡胶树中的表达分析被引量：4
2013年
FCA(Flowering control locus A)基因是自主开花调控途径中的关键调控基因之一,同时,FCA功能具有多样性。本研究中,利用TAIL-PCR方法获得2 039 bp橡胶树FCA基因的启动子序列,生物信息学分析发现该启动子中具有28种顺式调控元件,其中主要为基因表达调控核心元件(TAAT-box和CAAT-box)和光响应调控元件。此外,还含有激素、胁迫信号和光周期的顺式作用元件。同时,将橡胶树FCA启动子与GUS基因融合构建植物表达载体转化橡胶树,发现在胚状体、叶片和树根中GUS基因均强烈表达,但在茎段中表达较弱,说明橡胶树FCA基因除参与开花调控外,还可能参与多种发育过程的调控。本研究获得的HbFCA启动子转化橡胶树植株为进一步分析HbFCA基因功能及表达调控模式提供了遗传材料。
华玉伟孙芳黄天带蔡海滨杨加伟黄华孙
关键词：橡胶树LOCUS启动子转基因
橡胶树体胚遗传转化中早代转化胚状体的PCR鉴定被引量：3
2013年
橡胶树体胚遗传转化体系已成功建立．但抗性胚状体的循环增殖可获得大量抗性胚状体的同时，其后期的继代工作繁重。本文对橡胶树基因组DNA的CTAB提取方法进行了优化，同时筛选出了适合PCR检测的胚块重量。文中建立的胚块DNA的CTAB提取方法及筛选出的1～3mg重的胚块提取的DNA量均可满足早代胚状体PCR分析鉴定，且PCR鉴定结果与胚块的GUS染色结果吻合。该方法可用于橡胶树体胚遗传转化抗性胚状体早代筛选．
李季黄天带蔡海滨华玉伟黄华孙
关键词：橡胶树GUS
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