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三疣梭子蟹蜕皮周期中MIH基因mRNA水平与蜕皮激素浓度变化被引量：23: 2013年; 甲壳动物的蜕皮过程被认为是由位于眼柄的X器-窦腺复合体(XO-SG)分泌蜕皮抑制激素(MIH)通过调节Y器(YO)合成蜕皮激素而调控的。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)发现MIH基因在三疣梭子蟹眼柄X器-窦腺复合体中表达最强。采用qRT-PCR分析了MIH基因在三疣梭子蟹蜕皮周期中的表达变化,结果表明;A期为(0.42±0.08)倍,B期为(1.09±0.09)倍,C期为(1.35±0.16)倍,D0亚期为(1.00±0.10)倍,D1亚期(0.78±0.07)倍,D2亚期为(0.27±0.08)倍,D3/4亚期为(0.20±0.04)倍。采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-MS/MS)法完成了三疣梭子蟹蜕皮周期中蜕皮激素(20E)浓度变化的测定。A/B期蜕皮激素的浓度较低,低于仪器检测限0.33 pg,C期为(1.666±0.762)ng/mL,D0亚期为(4.047±1.5133)ng/mL,D1亚期为(6.756±4.928)ng/mL,D2亚期为(8.609±3.827)ng/mL,D3亚期为(19.534±4.799)ng/mL,D4亚期为11.616 ng/mL。在三疣梭子蟹蜕皮周期中,MIH基因表达量与血淋巴中蜕皮激素浓度呈现一定拮抗性,揭示MIH抑制Y器合成蜕皮激素而调控着三疣梭子蟹蜕皮的发生和进行。; 汪春建朱冬发亓一舟胡则辉谢熙沈洁; 关键词：三疣梭子蟹蜕皮抑制激素

三疣梭子蟹CYP302a1基因克隆及其表达分析被引量：4: 2015年; 细胞色素P450(CYP)302a1是昆虫蜕皮激素合成通路中的关键酶,为了研究其在三疣梭子蟹蜕皮过程中的调控作用,实验采用反转录PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到了三疣梭子蟹CYP302a1全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KM596851)。该序列全长为3 171 bp,包含一个长度为1 626 bp的开放阅读框,编码541个氨基酸;序列分析显示该氨基酸含helix-C、helix-K、helix-I、PERF及heme-binding共5个P450特征保守区域;系统进化树分析发现三疣梭子蟹CYP302a1与日本剑水蚤CYP302a1聚为一小支,再与其他物种CYP302a1聚为一支。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析了CYP302a1在不同组织和蜕皮过程中的表达水平变化。结果显示,CYP302a1的表达量在Y器中最高,而在其他组织中均极低(P<0.05);蜕皮过程中,CYP302a1在蜕皮后期(A、B期)表达量最低,从蜕皮间期(C期)开始上升,至蜕皮前期的D1亚期达到最大值,随后下降。结果表明CYP302a1在三疣梭子蟹蜕皮调控中可能起着重要作用。; 柳志业朱冬发谢熙邱锡尔周彦琦沈锡权; 关键词：三疣梭子蟹基因克隆

高效液相色谱-三重四级杆质谱分析海洋甲壳动物淋巴和肌肉中的20-羟基蜕皮酮被引量：5: 2011年; 在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)血淋巴中加入高油菜素内酯作为内标,用乙腈去除蛋白,采用高效液相色谱-三重四级杆质谱(HPLC-QqQ MS)对20-羟基蜕皮酮进行分析;对3种甲壳动物(三疣梭子蟹、脊尾白虾(Palaemon carincauda Holthuis)和口虾蛄(Oratosquilla oratoria))的肌肉则采用甲醇提取、正己烷脱脂,加入高油菜素内酯作为内标进行分析。在电喷雾电离源正离子模式下,分别取m/z445.2和109.1作为蜕皮激素和内标的定量目标离子进行检测。结果表明,蜕皮激素和内标在Hypersil Gold C18色谱柱上得到良好分离,在0～50μg/L范围内线性相关系数为0.9978,方法的检出限为0.03μg/L。三疣梭子蟹血淋巴中蜕皮激素回收率达91.8%～99.2%,相对标准偏差小于7.1%;3种甲壳动物肌肉中蜕皮激素回收率达85.7%～91.2%,相对标准偏差小于7.3%。对采自浙江宁波3批三疣梭子蟹血淋巴及三疣梭子蟹、脊尾白虾和口虾蛄的肌肉进行测定,三疣梭子蟹血淋巴中游离20-羟基蜕皮酮平均浓度在2.43～2.86μg/L范围内,而3种甲壳动物肌肉中20-羟基蜕皮酮平均含量在4.8～9.6ng/g范围内。; 赵鹏徐继林亓一舟陈娟娟朱冬发严小军; 关键词：20-羟基蜕皮酮甲壳动物

三疣梭子蟹FAMeT基因克隆及其在蜕皮周期中的表达水平被引量：12: 2013年; 为了研究法尼酸甲基转移酶(FAMeT)在甲壳动物蜕皮调控中的作用,采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆得到了三疣梭子蟹FAMeT的全长cDNA序列(GenBank登录号:KC192659),它包括一个201 bp的5'非编码区、一个318 bp的3'非编码区和一个825 bp的开放阅读框(ORF),编码274个氨基酸;推导的氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物FAMeT进行比对,发现一致性达75%～97%,其中与远海梭子蟹FAMeT的一致性最高;而且该氨基酸序列由两个CF(CPAMD8/FAMeT)区域组成,这两个CF区域是FAMeT的标志,在所有甲壳动物的FAMeT里均有发现,因此推导的氨基酸序列是三疣梭子蟹FAMeT基因。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法分析了其在不同组织中、不同蜕皮周期中的表达量变化,发现FAMeT在三疣梭子蟹的各个组织里均有表达,且在胸神经节里表达最强;在三疣梭子蟹蜕皮过程中,大颚器中FAMeT在D1期表达最强,然后逐渐下降至D4最低。该结果表明FAMeT在三疣梭子蟹蜕皮调控中起着重要的作用。; 谢熙朱冬发崔晓雨汤洁邱锡尔; 关键词：三疣梭子蟹克隆

养殖三疣梭子蟹中甲基法尼酯的GC/MS分析: 2011年; 建立了人工养殖三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)淋巴和肌肉中甲基法尼酯的毛细管气相色谱-质谱联用检测法.向淋巴或冷冻干燥后的肌肉样品中加入十九烷酸甲酯作为定量内标物,淋巴中加入0.9%NaCl和乙腈后用正己烷提取;肌肉冷冻干燥后用正己烷提取,浓缩定容后用EI源在SIM检测模式下进行检测.结果表明:甲基法尼酯与内标物十九烷酸甲酯在SPB-1柱上得到良好的分离,方法在5.00～200.00ng.mL-1浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.99995,方法的最低检测限3.27pg.淋巴和肌肉中甲基法尼酯平均回收率分别达到95.32%和88.37%,标准相对偏差分别为5.71%和7.94%.对采自浙江宁波象山港养殖三疣梭子蟹进行分析测定,甲基法尼酯在血清中含量在15.11～145.23ng.mL-1范围内,而肌肉中则在3.23～10.32ng.g-1范围内.; 侯云丹沈洁徐继林朱冬发严小军; 关键词：三疣梭子蟹气相色谱-质谱联用

甲壳动物蜕皮抑制激素调控机制的研究进展被引量：7: 2010年; 甲壳动物的蜕皮过程主要是由Y器(Y-organ)分泌的蜕皮类固醇激素与X器-窦腺复合体(X-organ-sinus gland,XO-SG)分泌的蜕皮抑制激素MIH相互拮抗而进行调控的。而MIH调控机制较为复杂,且存在争议。本文就MIH调控机制的研究进展,包括研究方法,以及目前调控机制中争议最大的3个问题:MIH受体、cAMP与cGMP功能以及Ca2+功能作一综述。; 亓一舟朱冬发杨济芬苏青; 关键词：甲壳动物蜕皮抑制激素

三疣梭子蟹蜕皮周期的分期被引量：41: 2011年; 采用形态学特征观察法对三疣梭子蟹蜕皮周期的划分进行了研究,并将三疣梭子蟹蜕皮周期划分为蜕皮后期、蜕皮间期、蜕皮前期和蜕皮期。结果显示,根据甲壳硬度变化蜕皮后期被分成A期(身体各部位很软),B期(背甲边缘变硬,腮区、心区尚软);根据游泳足趾节末端新旧表皮基线间距/旧表皮厚度的比值(R值)结合解剖后新壳的生长状况,蜕皮前期被细分为D0亚期(0; 沈洁朱冬发胡则辉亓一舟汪春建; 关键词：三疣梭子蟹

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