国家重点基础研究发展计划(2007CB109007)
- 作品数：15 被引量：42H指数：4
- 相关作者：曹孟良李丁邢俊杰韩小霞谢灵灵更多>>
- 相关机构：中南大学国家杂交水稻工程技术研究中心湖南西城杂交水稻基因科技有限公司更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 野生稻基因组抗性基因富集文库的构建被引量：2
- 2008年
- 通过集成候选抗性基因克隆技术和磁珠富集文库技术以及可转化基因组文库技术,提出了基于野生稻基因组富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略。包括构建野生稻可转化基因组文库,利用RecA重组蛋白介导生物素标记的探针对文库进行磁珠富集,构建野生稻基因富集文库,然后对富集文库的克隆进行鉴定分析,包括点杂交和克隆末端测序分析,最后对富集文库的阳性克隆进行全序列测定和功能验证。按照上述方法,构建了东乡普通野生稻和小粒野生稻可转化基因组文库,库容量分别达到1.58×105和2.68×105个克隆,进而构建了东乡野生稻基因组候选抗性基因富集文库,单克隆总数1 152个,对富集文库的菌落原位杂交筛选获得12个阳性克隆,对其中5个阳性克隆全序列测定结果表明,4个阳性克隆含有已克隆抗性基因的保守序列,证实构建候选抗性基因富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略是可行的。
- 曹孟良李磊韩小霞田志坚邢俊杰李强崔玲玲张朝良李玲龙罗秀娟杨志刚李丁谢灵灵陶小平罗泽宇唐丽
- 关键词：野生稻富集文库新基因克隆
- 水稻叶绿体基因组定点表达载体的构建及增强型绿色荧光蛋白原核表达分析
- 2011年
- 分别克隆了水稻叶绿体基因组同源重组片段trnI和trnA、具有3种不同核糖体结合位点(RBS)序列的增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)、来自烟草叶绿体的16S rRNA基因启动子Prrn和psbA基因终止子TpsbA,将上述元件通过酶切位点依次连接到质粒pUC19上,构建了3种能编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的水稻叶绿体基因组定点整合表达载体pIA-EGFP1、pIA-EGFP2和pIA-EGFP3。进行分子检测验证后,对上述载体进行了大肠杆菌EGFP原核表达检测,结果携带来源于λ噬菌体T7基因10的5'端非翻译区的载体pIA-EGFP3荧光最强,适合用于水稻叶绿体转化。
- 谢灵灵李丁崔玲玲严礼左佳贺荣华赵迎曦高婧曹孟良
- 关键词：水稻原核表达
- 水稻苗期抗寒性的杂种优势分析被引量：3
- 2011年
- 通过观察12个水稻杂交组合(包括父母本)的苗期叶片的相对电导率和植株的成苗率,来探讨水稻苗期抗寒性的杂种优势.分析表明:在经过4℃、2 d的冷处理后,12个杂交组合的相对电导率的超亲优势值都为负数,中亲优势值在-37.27%～+21.02%之间,成苗率在-30.80%～+7.20%之间,杂种优势表现为中亲优势.
- 贺荣华左佳李丁谢灵灵韩小霞高婧舒服李祺曹孟良
- 关键词：杂种优势相对电导率成苗率
- 小粒野生稻酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：5
- 2010年
- 采用酵母双杂交系统,利用SMART技术,在酵母菌株AH109中构建了小粒野生稻全长cDNA文库,文库容量约为1×106,插入片段平均大小约为640bp。该文库可以用于进一步的酵母双杂交筛选。
- 邢俊杰陶小平李玲龙阳志刚唐丽李丁谢灵灵李莉曹孟良
- 关键词：小粒野生稻酵母双杂交CDNA文库构建
- 东乡野生稻苗期抗寒性QTL的初步定位被引量：16
- 2012年
- 以9311/东乡野生稻F2群体为材料,用108对SSR标记构建连锁图谱,以苗期分蘖叶片相对电导率为抗寒性鉴定指标,采用完备区间作图法检测抗寒性QTL。结果在第3号和11号染色体上定位到2个与抗寒性相关的QTL qSCR3和qSCR11,其表型贡献率分别为16.3%和19.2%。
- 左佳高婧贺荣华李丁韩小霞邢俊杰李祺曹孟良
- 关键词：东乡野生稻抗寒性QTL定位相对电导率
- 优化菌落原位杂交体系筛选野生稻基因组文库被引量：3
- 2008年
- 菌落原位杂交仍是当今筛选基因组文库的重要方法之一,但难以保持背景清晰和阳性杂交点明显的稳定的杂交体系.通过对杂交膜不同处理方法的对比,表明利用溶菌酶处理杂交体系进行菌落原位杂交筛选,其杂交结果背景较干净,且能根据杂交信号的强弱很清晰地显色阳性黑点.采用该法筛选野生稻基因组文库,已筛选出22个阳性克隆,并测序分析均为阳性克隆.
- 陶小平李磊李强韩小霞邢俊杰崔玲玲李玲珑张朝良张秋平曹孟良
- 关键词：基因组文库溶菌酶阳性克隆
- 低温诱导东乡野生稻幼苗期叶片cDNA文库的构建和鉴定
- 2010年
- 从8℃低温诱导的东乡野生稻幼叶中提取总RNA,以总RNA为模板,利用SMART技术合成第1链,再经LD-PCR扩增合成第2链后,将获得的双链cDNA与双元表达载体YPL3连接,重组质粒电转入大肠杆菌,成功构建了东乡野生稻cDNA文库。经测定,原始文库滴度平均为4.4×107cfu/mL,平均插入片段约1kb,重组率为100%,符合cDNA文库构建要求,为后续利用酵母功能互补技术筛选东乡野生稻有利基因奠定了基础。
- 李玲龙邢俊杰崔玲玲韩小霞阳志刚李丁谢灵灵曹孟良
- 关键词：东乡野生稻CDNA文库构建SMART技术
- 小粒野生稻STK类抗病基因同源序列的克隆与分析被引量：5
- 2009年
- 根据丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶类(serine-threonine kinase,STK)抗病基因结构中保守结构域,设计引物,以小粒野生稻基因组DNA为模板,扩增获得10条STK类抗病基因同源序列.同源性分析表明其都具有STK保守结构域,与已克隆的STK类抗病基因有不同程度的相似性,为进一步克隆小粒野生稻中的STK类抗病基因提供依据.
- 崔玲玲韩小霞邢俊杰李玲龙阳志刚罗秀娟李丁谢灵灵曹孟良
- 关键词：小粒野生稻抗病基因同源序列
- 水稻光温敏核不育系不育基因的分子检测被引量：1
- 2013年
- 对部分水稻光温敏核不育系及相关可育材料中的光温敏核不育基因p/tms12-1和温敏核不育基因tms5进行了检测。通过PCR-RFLP方法,在农垦58S、培矮64S和双8S中检测到光温敏核不育基因p/tms12-1,其SNP位点为G;而安农S-1、Y58S、株1S、农垦58、安农N携带p/tms12-1正常可育基因,其SNP位点为C;农垦58S×农垦58 F1代种子中同时存在C和G 2个SNP位点,测序分析表明,安农S-1、双8S、Y58S和株1S携带有温敏核不育基因tms5,培矮64S、安农N、农垦58和农垦58S不含tms5基因。说明双8S同时携带p/tms12-1和tms5不育基因。
- 李丁赵迎曦夏玉梅袁隆平高婧沈春修方真李祺曹孟良
- 关键词：水稻分子检测
- 基于杂交水稻种子鉴别其亲本的分子检测技术
- 2009年
- 根据杂交水稻种子稻壳来自母本及SSR分子标记的共显性特点,提出了一种基于杂交水稻种子鉴别其亲本的分子检测技术。首先提取杂交水稻种子稻壳的DNA,获得母本的DNA指纹图谱,再结合杂种带型,推导出父本带型。这样只要建立已有亲本的DNA指纹图谱库,通过比对,就可以鉴别杂交水稻的亲本是已登记亲本还是新创亲本。以金优207及其亲本作为实验材料,选用5对SSR引物验证了上述检测技术。
- 阳志刚邢俊杰詹庆才朱克永王伟平刘芳芳何赵云袁隆平曹孟良
- 关键词：杂交水稻种子稻壳SSR分子标记
