国家自然科学基金(30973818)
- 作品数：21 被引量：125H指数：8
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- 小鼠造血干细胞体外衰老模型的构建及其相关生物学被引量：4
- 2010年
- 目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过氧化氢(t-BHP)100μmol/L诱导Sca-1+HSCs 6h,建立HSCs衰老体外模型。采用造血祖细胞集落培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察衰老HSCs的生物学特点。DNA印迹法(Southern blotting)与TRAP-PCR SYBR Green染色法检测HSCs端粒长度和端粒酶活性。RT-PCR法检测衰老相关基因p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达水平。结果免疫磁性分选法分离、纯化的Sca-1+HSCs纯度可达(87.33±1.25)%。100μmol/L的t-BHP作用Sca-1+HSCs 6h,其体外培养形成造血祖细胞集落能力,自我更新及多向分化潜能显著低于对照组,处于G1期细胞比例增加,SA-β-gal染色阳性细胞数增加。衰老Sca-1+HSCs的端粒缩短,端粒酶活性下降,p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达水平明显增高。结论用t-BHP能建立Sca-1+HSCs体外细胞衰老模型,提示p16Ink4a-Rb通路和p19Arf-Mdm2-p53-p21Cip1/Waf1通路在t-BHP诱导Sca-1+HSCs衰老过程中发挥重要作用。
- 周玥杨斌姚欣王亚平
- 关键词：造血干细胞体外模型端粒端粒酶反转录-聚合酶链反应小鼠
- Akt-FoxO3a通路在人参皂苷Rg1抑制t-BHP诱导的人脐血源基质细胞凋亡中的作用研究
- 目的探讨人参皂苷Rg1对t-BHP诱导氧化损伤的人脐血源基质细胞(hUCB-DSCs)活力、增殖与凋亡的影响,以及Akt-FoxO3a信号通路在Rg1发挥抗凋亡效应中的作用。方法t-BHP诱导hUCB-DSCs构建氧化损...
- 刘颖易龙王亚平
- 关键词：人脐血基质细胞人参皂苷RG1FOXO3A
- 文献传递
- 人参皂苷Rg1缓解D-半乳糖致衰老大鼠脾损伤被引量：5
- 2015年
- 目的探讨人参皂苷Rg1对D-半乳糖致衰老大鼠脾组织结构与功能的影响及其机制。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、衰老模型组(D-半乳糖120 mg/kg,qd×42 d)、Rg1干预组(建模,第15天起Rg1 20 mg/kg,qd×28 d)、Rg1对照组(0.9%氯化钠注射液+Rg1)。取脾脏测定脾指数,石蜡切片观察脾脏显微形态,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测脾细胞衰老,CCK-8检测脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,ELISA检测IL-2、IL-6和晚期糖基化终产物(AGEs)含量,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS),酶法检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,Western blot检测细胞衰老相关蛋白P53、P21及Rb的表达。结果与衰老模型组比较,Rg1干预组大鼠脾指数、脾脏白髓面积比及脾细胞增殖能力提高(P<0.05);脾细胞分泌IL-2、IL-6水平和SOD活性明显增强(P<0.01);脾细胞的SA-β-Gal阳性率、ROS和MDA含量下降(P<0.01);AGEs下降(P<0.05);P53、P21及RB蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1能缓解D-半乳糖致衰大鼠脾损伤,其机制可能与抑制氧化损伤和下调P53-P21-RB信号通路有关。
- 张晶邵月张力恒冉瑞图孙嘉政张岩岩贾道勇张梦思王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1衰老模型脾脏
- 人参皂苷Rg1对衰老模型大鼠骨髓造血功能的影响及其机理被引量：8
- 2015年
- 目的:探讨人参皂苷Rg1对衰老模型大鼠骨髓造血功能的影响及其机理。方法:SD大鼠随机分为4组,每组10只。衰老模型组,皮下注射D-半乳糖120mg/kg qd×42;Rg1衰老模型组,注射D-半乳糖剂量与时间同衰老模型组,第15d起腹腔注射Rg1 20mg/kg qd×28;正常对照组,皮下注射生理盐水qd×42;Rg1正常对照组,注射生理盐水qd×14,第15d起腹腔注射Rg1(同Rg1衰老模型组)。模型复制或药物注射完成后第2d,采外周血检测血白细胞总数与分类计数和晚期糖基化终产物(AGEs),骨髓单个核细胞(BMNCs)计数,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测BMNCs衰老百分率,多向造血祖细胞集落(CFU-Mix)培养检测BMMCs形成集落能力;Western blotting检测BMMCs衰老相关蛋白P21和P53的变化;提取腹腔巨噬细胞进行培养,比色法检测巨噬细胞吞噬功能。结果:与衰老模型组比较,Rg1衰老模型组外周血白细胞数量增多,淋巴细胞比例升高,粒细胞比例降低,CD8+T细胞所占比例降低,CD4+T细胞所占比例升高,外周血AGEs水平降低,每根股骨的BMMCs细胞数增多,SA-β-Gal染色阳性的BMMCs明显降低,BMMCs形成CFU-Mix能力提高,P21和P53的表达下调,腹腔巨噬细胞吞噬中性红指数上升。结论:D-半乳糖复制的衰老模型大鼠骨髓造血功能损伤明显,人参皂苷Rg1对其致衰损伤有明确的保护作用,可能机理与调控p53/p21信号通路有关。
- 邵月张力恒冉瑞图孙嘉政张晶张梦思贾道勇张岩岩王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1衰老模型骨髓造血细胞
- 人参皂苷Rg_1诱导人白血病K562细胞株衰老的实验研究被引量：4
- 2012年
- 目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞株衰老的作用及其机制。方法:MTT比色法检测Rg1对K562细胞增殖的影响,筛选最佳作用浓度及时间(20μmol.L-1,48 h)。流式细胞术检测Rg1对细胞周期的影响;SA-β-Gal染色检测细胞阳性染色百分率;RT-PCR法检测衰老相关基因p16,p53,p21,Rb的表达;电镜观察细胞衰老超微形态学改变。结果:Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,使细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著增高(P<0.05);细胞衰老相关基因的表达上调(P<0.05);超微结构观察显示细胞增大,异染色质凝集、碎裂,线粒体体积增大,溶酶体体积增大、数目增多等衰老形态学变化。结论:Rg1能诱导K562细胞衰老,p53-p21-Rb,p16-Rb信号转导通路在其衰老调控中起重要作用。
- 蔡世忠周玥刘俊刘典峰姜蓉王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1白血病K562细胞株细胞衰老
- Sca-1^+造血干/祖细胞重建致死剂量辐射小鼠造血功能的作用被引量：10
- 2010年
- 背景:近年来,造血干细胞移植在国内外已广泛开展,移植的造血干细胞能否有效重建造血成为造血干细胞移植领域的研究热点问题之一。目的:观察Sca-1+造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,Sca-1+HSC/HPC)对造血衰竭小鼠造血功能重建的作用。方法:雌性C57BL/6受体鼠给予致死剂量60Coγ射线照射后分2组,对照组:输注无菌PBS;移植组:移植免疫磁性分选法分离纯化的同系雄性C57BL/6小鼠Sca-1+HSC/HPC;检测受体鼠生存时间;外周血白细胞、红细胞比容、血小板的变化;脾湿质量及脾集落数;PCR检测Y染色体(Sry基因)表达确定受体小鼠重建造血的细胞来源。结果与结论:移植组受体鼠30d存活率、白细胞、红细胞比容、血小板、脾湿质量及脾集落数均明显高于对照组(P<0.05);Y染色体PCR分析,证实雌性受体小鼠重建造血的细胞来源于雄性供体。提示Sca-1+HSC/HPC移植后能重建造血衰竭小鼠造血功能。
- 周玥杨斌姚欣王亚平
- 关键词：造血功能重建造血小鼠
- 人参皂苷Rg_1延缓造血干细胞衰老与p16^(INK4a)表达关系的研究被引量：16
- 2011年
- 目的:探讨人参皂苷单体Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老与p16INK4a的表达调控关系,为寻找延缓HSC衰老途径提供理论和实验依据。方法:免疫磁性分选法分离纯化Sca-1+HSC后分组。对照组常规培养;衰老组运用三丁基过氧化氢(t-BHP)复制衰老模型;Rg1组在对照组基础上加入10μmol.L-1 Rg1共培养;Rg1延缓衰老组给予10μmol.L-1 Rg1预处理后,复制衰老模型;Rg1治疗衰老组,衰老模型复制后,给予10μmol.L-1Rg1抗衰老处理。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养确定Rg1延缓或治疗Sca-1+HSC衰老生物学作用。RT-PCR及Western blotting检测衰老相关基因p16INK4a mRNA及蛋白的表达。结果:Rg1延缓衰老组,Rg1治疗衰老组与衰老组相比,SA-β-gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成造血祖细胞混合集落数增加,p16INK4a mRNA及蛋白的表达下降;Rg1延缓衰老组的SA-β-gal染色阳性细胞百分比、G1期比例、p16INK4a mRNA及蛋白的表达均低于Rg1治疗衰老组,形成造血祖细胞混合集落数高于Rg1治疗衰老组。结论:Rg1具有延缓和治疗Sca-1+HSC衰老的作用,Rg1延缓衰老比治疗衰老效果更好。Rg1可能通过调控p16INK4a的表达发挥其对抗t-BHP诱导的Sca-1+HSC衰老的作用。
- 周玥杨斌姚欣王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1P16INK4A
- 三丁基过氧化氢通过调控细胞周期诱导Sca-1^+造血干/祖细胞衰老被引量：1
- 2011年
- 目的探讨三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导Sca-1+造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的细胞周期调控机制。方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC后分为对照组(常规培养细胞),衰老模型组(用t-BHP复制细胞体外衰老模型)。通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养观察t-BHP诱导Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学作用;RT-PCR检测衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达。Western blot检测细胞周期调控蛋白P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1、Cyclin E、CDK4、CDK2的表达。结果免疫磁性分选法分离纯化的Sca-1+HSC/HPC纯度可达(87.33±1.25)%。衰老组细胞SA-β-Gal染色阳性率为(57.9±4.2)%,高于对照组[(9.1±2.4)%,P<0.05],G0/G1期细胞比例为(87.53±4.03)%,高于对照组[(72.26±3.40)%,P<0.05],生成造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)数为(1.5±1.2)/104,低于对照组[(9.8±2.1)/104,P<0.05]。与对照组比较,衰老组细胞p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA及P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1蛋白表达上调(P<0.05),Cyclin E、CDK4、CDK2蛋白表达下调(P<0.05)。结论 t-BHP能有效诱导Sca-1+HSC/HPC衰老,其机制可能与调控细胞周期调控分子的表达有关。
- 周玥姜蓉王萍杨斌姚欣刘典锋王亚平
- 关键词：衰老
- 人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺结构与功能的影响被引量：15
- 2015年
- 目的探讨人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺结构与功能的影响及机制。方法 SD大鼠随机分为4组,每组10只。衰老模型组,皮下注射D-半乳糖120 mg/kg,1次/d,42 d;Rg1衰老模型组,注射D-半乳糖剂量与时间同衰老模型组,第15天起腹腔注射Rg1 20 mg/kg,1次/d,28 d正常对照组,皮下注射生理盐水1次/d,42 d;Rg1正常对照组,注射生理盐水1次/d,14 d,第15天起腹腔注射Rg1(同Rg1衰老模型组)。模型复制或药物注射完成后第2天,取胸腺测定胸腺指数,石蜡切片观察胸腺形态学;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测胸腺细胞衰老,CCK-8检测胸腺细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,ELISA检测胸腺细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α、GM-CSF、白细胞介素(IL)-2与IL-6的能力,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)、胸腺细胞凋亡,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA),酶学检测超氧化物歧化酶(SOD),DTNB法测定谷胱甘肽(GSH)、氧化谷胱甘肽(GSSG)含量,Western印迹检测细胞衰老相关蛋白p21、p53、Rb的变化。结果 Rg1衰老模型组大鼠胸腺指数升高、胸腺皮质面积比例增加、胸腺细胞的增殖能力提高,凋亡率减少、SA-β-Gal阳性胸腺细胞百分率下降、TNF-α、GM-CSF、IL-2、IL-6的分泌能力明显提高、SOD活性明显提升;ROS和MDA含量下降;p53、p21、Rb蛋白表达有显著下调。结论 D-半乳糖复制的衰老模型大鼠胸腺结构与功能损伤明显,人参皂苷Rg1对其致衰损伤有明确的保护作用,其机制可能与抑制氧化损伤和下调p16-Rb、p53/p21信号通路有关。
- 冉瑞图孙嘉政张晶邵月张力恒李成鹏贾道勇张岩岩张梦思王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1胸腺
- 人参皂苷Rg1调控神经干细胞衰老作用及机制探讨被引量：8
- 2011年
- 用三丁基过氧化氢(t-BHP)构建神经干细胞(NSC)体外衰老模型,探讨人参皂苷Rgl延缓NSC衰老的作用及机制,为寻找延缓NSC衰老新途径提供理论和实验依据。将从新生SD大鼠海马组织中分离纯化的第三代NSC随机分为五组。对照组:在NSC完全培养基中培养2 h;衰老模型组:在对照组基础上加入终浓度为100μmol/L的t-BHP培养2 h;Rg1组:在对照组基础上加入终浓度为10μg/mL的Rg1培养2 h;Rg1抗衰老组:在衰老造模同时加入终浓度为10μg/mL的Rg1培养2h;Rg1治疗衰老组:终浓度为100μmol/L的t-BHP培养2h后再加入终浓度为10μg/mL的Rg1继续培养2 h。MTT法、神经球计数、分化细胞计数以及衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性神经球计数分析Rg1调控NSC衰老的生物学作用,RT-PCR检测衰老相关基因p16^(1NK4a)、p21^(Cipl/Wafl)mRNA的表达。结果显示,与衰老组比较,Rg1抗衰老组和治疗衰老组NSC的增殖能力和多向分化能力显著增强;衰老特异性SA-β-Gal染色阳性神经球百分比显著降低,p16^(INK4a)、p21^(Cipl/Wafl)mRNA的表达显著下降。提示Rg1具有延缓t-BHP诱导NSC衰老的作用,其机制可能与下调p16^(INK4a)、p21^(Cipl/Wafl)的表达有关。
- 彭彬王朝丽冯丽王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1神经干细胞衰老
