国家自然科学基金(39970704)
- 作品数：11 被引量：47H指数：4
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- 依那普利对梗阻性肾病大鼠肾组织p38丝裂素激活蛋白激酶活性的影响被引量：4
- 2004年
- 目的研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)依那普利对梗阻性肾病模型肾组织p38丝裂素激活蛋白激酶(MAPK)活性的影响。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)模型,治疗组从造模前24h至造模后28d以依那普利10mg·kg-1·d-1灌胃,另设假手术组作正常对照。分别于造模后1h,3h,6h,12h,1d,3d,5d,7d,14d,21d及28d取肾组织,应用免疫沉淀结合特异性底物磷酸化法测定肾组织p38MAPK活性;免疫组织化学法检测磷酸化p38MAPK在肾组织中的表达和定位;免疫组织化学及原位杂交方法检测肾组织TGF-β1mRNA和蛋白水平的表达。结果正常大鼠肾组织基础的p38MAPK活性(吸光度值)为0.22±0.06。UUO术后1h,p38MAPK即被激活(0.45±0.14,P<0.01),并呈进行性升高,12h时达第1个高峰(0.91±0.07,P<0.01),此后活性逐渐下降;第3天后又进行性升高,第7天达到第2个高峰(0.93±0.06,P<0.01)。TGF-β1的表达在UUO术后1h、3h、6h、12h及24h均无明显增加;在第3天有明显增加(A值,13.55±6.33比基础4.32±1.72,P<0.01);第7天达高峰(26.78±8.77,P<0.01)。梗阻肾肾组织p38MAPK的激活明显早于TGF-β1表达,且p38MAPK早期活性的强弱与肾组织TGF-β1的表达水平相一致。依那普利治疗可以明显抑制p38MAPK活性(下降36%～65%,P<0.01)。
- 余学清祝胜郎娄宁郑勋华董秀清
- 关键词：依那普利梗阻性肾病肾组织蛋白激酶尿路梗阻
- 血管紧张素Ⅱ激活巨噬细胞株p38MAPK信号通路并诱导其增殖被引量：9
- 2005年
- 目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活巨噬细胞p38MAPK信号通路的模式变化及其对巨噬细胞株增殖的影响。方法:用Westernblot测定细胞p38MAPK磷酸化表达;用细胞免疫组化观察细胞p38MAPK激活后核移位;用MTT法观察细胞增殖。结果:AngⅡ(1μmol/L)可诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化表达,15-30分钟达到高峰,随时间呈峰形变化。AngⅡ呈剂量依赖性诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化。p38MAPK特异性抑制剂SB202190可显著抑制RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化,并呈剂量依赖性。AngⅡ可诱导RAW264.7细胞增殖,SB202190可显著抑制AngⅡ诱导的RAW264.7细胞增殖。结论:AngⅡ可激活RAW264.7巨噬细胞株p38MAPK信号通路,并通过p38MAPK信号通路调控RAW264.7细胞增殖。
- 娄宁余学清祝胜郎郑勋华董秀清
- 关键词：巨噬细胞肾纤维化
- 荧光素标记的反义寡核苷酸在大鼠肾小管上皮细胞中的时相分布
- 2006年
- 目的观察反义寡核苷酸(AS-ODN)在大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)中的时相分布;比较AS-ODN以脂质体(DOTAP)包裹或以游离形式转染细胞的区别。方法合成一条与大鼠骨调素(OPN)cDNA序列互补的AS-ODN,在5′端标记荧光素(FAM);将AS-ODN/DOTAP复合物(AS-ODN浓度3μmol/L)或游离AS-ODN(6μmol/L)处理培养的NRK52E细胞,于不同时间点取细胞于荧光显微镜下观察计数,同时进行普通光镜下细胞计数,计算转染效率。结果AS-ODN/DOTAP复合物在细胞中呈颗粒状分布,处理细胞3h后可见细胞胞浆中出现荧光颗粒,之后AS-ODN转移进入胞核,第8h时在胞核中可达很高浓度,并维持较长时间;游离AS-ODN在细胞中呈弥散状分布,处理细胞5h后可见细胞中出现荧光,第8h时在胞浆和胞核中可达较高浓度,并维持较长时间;AS-ODN/DOTAP复合物的转染效率明显高于游离AS-ODN;细胞是否贴壁生长及贴壁生长的细胞密度也影响AS-ODN的转染效率。结论AS-ODN转染进入细胞后最终浓聚在细胞核中,并维持较长时间;阳离子脂质体能提高AS-ODN转染速率和转染效率。
- 刘晓波余学清周树录董秀清
- 关键词：荧光素寡核苷酸肾小管
- p38MAPK在大鼠梗阻性肾病肾组织中的表达及可能作用被引量：16
- 2004年
- 目的 :探讨p38MAPK在大鼠梗阻性肾病模型肾组织中的表达及其在肾脏纤维化发病机制中的作用。方法 :采用单侧输尿管结扎制造梗阻性肾病模型 ,分别于造模后 1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d、2 1d、2 8d取肾组织 ,应用免疫沉淀结合特异性底物磷酸化法测定肾组织p38MAPK活性 ,用免疫组织化学法检测磷酸化p38MAPK在肾组织中的表达 ;用免疫组织化学及原位杂交方法检测肾组织TGFβ1mRNA和蛋白水平的表达。结果 :正常对照组大鼠肾组织有一定的p38MAPK基础活性 (吸光度A值 ) (0 2 2± 0 0 6 )。UUO术后 1h ,p38MAPK即被激活(0 4 5± 0 14vs对照组 ,P <0 0 5 ) ,12h时达第一个高峰 (0 91± 0 0 7vs对照组 ,P <0 0 1) ,此后活性逐渐下降 ,3d后又进行性升高 ,7d达到第二个高峰 (0 93± 0 0 6vs对照组 ,P <0 0 1) ,此后又缓慢下降 ,2 8d降至最低水平 (0 12± 0 0 2 )。而TGFβ1的表达在UUO术后 1h、3h、6h、12h及 2 4h无明显增加 ,第 3d有明显增加 (13 5 5 %± 6 33%vs对照组 ,P <0 0 5 ) ,第 7d达高峰 (2 6 78%± 8 77%vs对照组 ,P <0 0 1) ,第 2 8d表达最少。梗阻肾肾组织p38MAPK的激活明显早于TGFβ1表达且p38MAPK早期活性水平与TGFβ1的表达水平呈正相关 ;
- 祝胜郎余学清娄宁郑勋华李涌泉
- 关键词：尿道梗阻P38MAP激酶肾纤维化
- 血管紧张素Ⅱ通过p38丝裂原蛋白激酶信号通路诱导巨噬细胞骨调素基因的上调表达被引量：10
- 2004年
- 目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激巨噬细胞骨调素(OPN)基因表达的模式变化,及p38丝裂原蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在AngⅡ上调表达骨调素中的作用。方法 用反转录聚合酶反应(RT-PCR)测定AngⅡ体外刺激RAW264.7细胞骨调素基因表达及p38MAPK特异抑制剂SB202190的影响;用Western印迹测定Ang Ⅱ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK及其转录因子-激活转录因子2(ATF2)表达的时间模式及SB202190对AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化表达的影响。结果 (1)AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞骨调素基因表达呈时间依赖性,3 h骨调素表达略有升高,6、12、24 h骨调素分别升高0.9、2.3及2.4倍(P<0.01);而24 h阴性对照无明显变化,说明骨调素的表达呈诱导分泌性。(2)AngⅡ诱导RAW264.7细胞骨调素基因表达呈剂量依赖性,AngⅡ(1 μmol/L)孵育12 h即可诱导骨调素显著表达,升高2.6倍(P<0.01)。(3)SB202190(5 μmoL/L)在AngⅡ(1 μmol/L)刺激前30 min加入培养基抑制作用最明显,共同孵育12 h,抑制率达到61.7％(P<0.01);而同时和刺激后120 min加入SB202190(5 μmol/L),抑制作用不明显,抑制率分别为20.9％和20.1％。(4)不同浓度SB202190 1、5、10 μmol/L在AngⅡ(1μmol/L)刺激前30 min加入培养基,共同孵育12 h。
- 娄宁余学清祝胜郎郑勋华董秀清李晓艳
- 关键词：信号通路巨噬细胞基因表达
- 消耗还原型谷胱甘肽抑制血管紧张素Ⅱ激活巨噬细胞c-Jun/ATF-2及NF-κB被引量：5
- 2004年
- 目的 :探讨还原型谷胱甘肽 (GSH)在血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )激活巨噬细胞转录因子c -Jun/ATF - 2及NF -κB中的作用。方法 :用荧光分光光度法测定细胞内GSH含量 ;用丁基硫堇硫氧胺 (BSO)消耗细胞内GSH ;用免疫印迹法测定细胞c -Jun/ATF - 2磷酸化表达及NF -κBp6 5表达 ;用凝胶滞留法测定细胞NF -κB活性 ;用细胞免疫组化观察细胞c -Jun/ATF - 2磷酸化表达的时间模式。结果 :AngⅡ (1μmol/L)刺激 30 - 6 0min可降低RAW2 6 4 7细胞内GSH ;而后GSH逐渐适应性恢复。同时 ,AngⅡ刺激 6 0min ,呈剂量依赖性降低RAW 2 6 4 7细胞内GSH。GSH特异性消耗剂BSO(0 5mmol/L)与RAW 2 6 4 7细胞共同孵育 18h ,即可完全消耗细胞内GSH。AngⅡ (1μmol/L)可诱导RAW 2 6 4 7巨噬细胞c -Jun/ATF - 2磷酸化表达 ;BSO预先完全消耗细胞内GSH ,AngⅡ (1μmol/L)不能诱导巨噬细胞c -Jun/ATF - 2磷酸化。同样 ,AngⅡ (1μmol/L)可激活RAW 2 6 4 7巨噬细胞NF -κB ;BSO预先完全消耗细胞内GSH ,AngⅡ (1μmol/L)不能激活巨噬细胞NF -κB。结论 :还原型谷胱甘肽可能参与调控巨噬细胞转录因子c-Jun/ATF - 2及NF
- 娄宁余学清祝胜郎董秀清
- 关键词：谷胱甘肽NF-ΚB巨噬细胞
- 反义骨调素寡核苷酸对大鼠肾系膜细胞骨调素mRNA表达及细胞黏附能力的影响
- 2003年
- 目的 观察反义骨调素(OPN)寡核苷酸(AS-ODN)对大鼠肾系膜细胞(1097)骨调素mRNA表达及细胞黏附功能的影响。方法 针对 OPN的cDNA序列设计合成一条与OPN cDNA序列互补的AS-ODN,所有碱基均经硫代修饰并将寡核苷酸与阳离子脂质体(DOTAP)结合。不同浓度寡核苷酸处理1097细胞48h,用Trizol试剂提取细胞总RNA。采用RNA斑点杂交和 RT-PCR技术检测OPN mRNA的表达。采用胶原凝胶黏附法检测细胞的黏附功能。结果 在无血清条件下培养,1097细胞OPN mRNA表达水平很低,加入小牛血清后,其 OPN mRNA表达水平明显上调。反义OPN寡核苷酸处理的1097细胞OPN mRNA表达水平较低,明显低于1640培养基对照组,且具有AS-ODN的浓度依赖性,其最低抑制浓度为2.5μmol/L。而经顺义OPN寡核苷酸或错义OPN寡核苷酸处理的1097细胞OPN mRNA表达水平仍然较高,无明显抑制作用。反义OPN寡核苷酸处理的细胞黏附胶原凝胶的能力较弱,易被洗涤下来;而顺义或错义OPN寡核苷酸处理的细胞黏附凝胶的能力仍然较强。结论 小牛血清能诱导大鼠肾系膜细胞OPN的上调。反义OPN寡核苷酸能特异性地抑制大鼠肾系膜细胞OPN mRNA的表达和对胶原凝胶的黏附能力。
- 刘晓波余学清李晓艳董秀清
- 关键词：寡核苷酸肾系膜细胞间质性肾炎
- 白细胞介素1β通过p38信号通路上调系膜细胞表达白细胞介素6被引量：4
- 2004年
- 目的 :探讨p38信号通路 (p38MAPK)在白细胞介素 1 (IL 1 ) β上调肾小球系膜细胞表达白细胞介素 6 (IL 6 )中的作用。方法 :应用WesternBlotting检测p38MAPK在IL 1 β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度 ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和ELISA法检测IL 1 β诱导的系膜细胞促炎症介质IL 6的表达水平并观察p38MAPK特异性抑制剂SB2 0 35 80对其mRNA的转录和蛋白质生成的影响。结果 :IL 1 β以时间和剂量依赖方式刺激系膜细胞引起p38MAPK的活化 ,并明显上调系膜细胞IL 6表达。SB2 0 35 80以剂量依赖方式从基因转录和翻译水平显著抑制IL 1 β诱导的IL 6表达。 结论 :p38MAPK在IL 1 β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应产生炎症介质IL
- 李涌泉余学清李晓艳祝胜郎郑勋华
- 关键词：系膜细胞P38信号通路
- 抗体靶向寡核苷酸复合物及SPA-PLL交联物对培养细胞的毒性作用被引量：2
- 2006年
- 目的评价新型抗体靶向基因导入系统及其核心组分：葡萄球菌A蛋白．多聚赖氨酸交联物（SPA-PLL交联物）对细胞的毒性作用。方法将SPA-PLL交联物、CD44抗体和反叉寡核苷酸以适宜的质量比混合即可组装成抗体靶向寡核苷酸复合物；采用噻唑蓝比色法测定该靶向复合物或SPA-PLL交联物对培养细胞存活率的影响。结果该靶向复合物和交联物在低浓度范围内（0-62．5μg／mL）对细胞毒性作用较小，在高浓度（〉125μg／mL）时对细胞毒性作用显著增强；游离PLL对细胞的毒性作用较强，但游离SPA无毒性作用。结论抗体靶向寡核苷酸复合物和SPA-PLL交联物在常用浓度范围内对转染细胞无毒性作用。
- 张虹刘晓波余学清周树录董秀清
- 关键词：抗体靶向细胞毒作用
- 反义骨调素寡核苷酸对肾小管上皮细胞骨调素mRNA表达及其胶原凝胶黏附能力的影响
- 2003年
- 【目的】观察反义骨调素(OPN)寡核苷酸(AS-ODN)对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)骨调素mRNA表达及黏附能力的影响;比较AS-ODN的游离形式和经阳离子脂质体(DOTAP)包裹形式的反义抑制效果。【方法】用荧光显微镜观察荧光素标记的AS-ODN在细胞中的分布;将寡核苷酸处理NRK52E细胞48h,用TRIzol试剂提取细胞总RNA;用RNA斑点杂交和RT-PCR检测OPNmRNA的表达;将ODN/DOTAP复合物处理的细胞置于胶原凝胶表面,计算细胞的黏附率。【结果】AS-ODN能转移进入胞核中;AS-ODN处理的细胞OPNmRNA表达水平均较低(P<0.05),而顺义或错义寡核苷酸处理的细胞OPNmRNA水平较高,即使30μmol/L浓度也无抑制作用;游离AS-ODN最低抑制浓度为3.75μmol/L,而AS-ODN浓度为0.5μmol/L的AS-ODN/DOTAP复合物具有良好抑制作用;AS-ODN处理的细胞黏附率降低,而顺义或错义寡核苷酸处理的细胞黏附能力较强。【结论】反义骨调素寡核苷酸能特异地抑制大鼠肾小管上皮细胞OPNmRNA表达和黏附胶原凝胶能力;阳离子脂质体能促进AS-ODN的反义抑制作用。
- 刘晓波余学清李晓艳祝胜郎董秀清
- 关键词：骨调素反义寡核苷酸肾小管上皮细胞胶原凝胶肾脏疾病
