北京市科技计划项目(Z121100001212002)
- 作品数：13 被引量：94H指数：5
- 相关作者：刘伟成卢彩鸽张殿朋刘霆吴慧玲更多>>
- 相关机构：北京市农林科学院植物保护环境保护研究所广东海洋大学长江大学更多>>
- 发文基金：北京市科技计划项目北京市自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 解淀粉芽胞杆菌MH71摇瓶发酵培养基及发酵条件优化被引量：39
- 2015年
- 从黑龙江省漠河多年永冻土层采集的冻土样品中分离的拮抗菌解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens MH71,对多种植物病原真菌和细菌具有较强的拮抗作用。本研究主要以无菌滤液对番茄灰霉病菌的抑菌活性为检测指标,采用单因素试验筛选菌株MH71的最佳产抗菌物质培养基及最佳碳源、氮源和无机盐,运用Minitab软件,通过Box-Benhnken试验及响应面分析相结合的方法对该菌株产抗菌物质的发酵培养基配方和摇瓶发酵条件进行了优化。结果表明,菌株MH71产抗菌物质最佳培养基组成为玉米粉36.6 g/L、牛肉膏3.2 g/L、Na Cl 1.33 g/L、葡萄糖14 g/L、蛋白胨7 g/L、Mg SO40.4 g/L、K2HPO4 0.8 g/L、Ca CO3 8 g/L。最适发酵条件为培养温度30℃、摇床转速200 r/min、发酵起始p H 7.0、接种量3%、装液量100 m L/500 m L、发酵时间为72 h。在最佳培养基和培养条件下,菌株MH71的活菌数达到了2.1×109 CFU/m L,芽孢数为1.2×109 CFU/m L,同时对番茄灰霉病菌的抑菌能力较优化前提高了37.4%。
- 卢彩鸽董红平张殿朋王俊丽刘德文刘伟成
- 关键词：番茄灰霉病菌抗菌活性物质发酵条件优化
- 类芽孢杆菌Bg1抗真菌蛋白的分离及其特性分析被引量：5
- 2014年
- 为了明确类芽孢杆菌（Paenibacillus sp．）Bg1的主要抗真菌物质及其特性，本文利用抑菌圈法测定了Bg1抗菌蛋白在各种处理条件下抑菌活性的稳定性；通过60％硫酸铵沉淀、DEAE—Sephadex A50离子交换层析及Sephadex G100凝胶过滤层析进行了抗菌蛋白的分离纯化，以SDS-PAGE进行了其纯度检测。结果表明，28～100℃处理30min、4℃存放55d及在pH值3～7范围内菌株Bg1抗菌蛋白抑菌活性均无显著性变化，但pH值〉8显著影响其抑菌活性，蛋白酶处理则使其抑菌活性完全丧失；纯化后所得抗菌蛋白分子量约10KD。据此可知，类芽孢杆菌Bg1主要抗菌活性物质为低分子量蛋白，其对热和酸性条件及贮存时间稳定性好，具有进一步开发应用的潜能。
- 叶慧敏张殿朋刘霞于莉刘伟成
- 关键词：类芽孢杆菌抗真菌蛋白分离纯化稳定性分析
- 利迪链霉菌A02产纳他霉素补料分批发酵参数的优化
- 2014年
- 为建立利迪链霉菌（Streptomyces lydicus）A02生产纳他霉素的高产发酵工艺，对其补料分批发酵的主要参数进行了优化。利用pH值实时监控自动补料摇床辅助优化，筛选出利迪链霉菌A02产纳他霉素的适宜pH值范围，以此为控制点进行30L自动发酵罐补料分批发酵实验，通过分析软件发酵之星（Biostar）5．0检测分析主要发酵参数动态趋势曲线与纳他霉素产量的相关性。结果显示，菌株A02最适于纳他霉素生物合成的发酵过程多参数优化组合为：培养温度30℃，pH值控制在6．25-6．29范围内。溶氧（DO）为20％。30％，摄氧率（OUR）和CO2释放率（CER）分别为25～15mmol／（L-h）和20-12mmol／（L·h），氨基氮含量0．20～0．23g／L。还原糖保持1．5％左右，至88h后自然下降，至112h为0．32％；此时纳他霉素质量浓度达最高值，发酵上清液中为2．02g／L，发酵液中为6．98g／L，较不控制pH值的对照分别提高28．66％和69．83％，为较好的发酵终点。通过优化调控主要发酵参数有效提高了利迪链霉菌A02生产纳他霉素的发酵水平。
- 刘霆卢彩鸽花玉鹏刘德文刘伟成
- 关键词：纳他霉素发酵参数
- 粉红粘帚霉ACM941固体发酵条件的优化被引量：4
- 2014年
- 为提高粉红粘帚霉ACM941发酵过程中的分生孢子产量,本研究对其固体发酵条件进行了优化。以产孢量为测定指标,通过单因子和正交试验,确定ACM941固体发酵基础培养基为麦麸和棉籽壳混合物,其比例为4∶6;在基础培养基中添加2%玉米粉、2%燕麦粉、3%牛肉膏、2%蛋白胨可获得更大产孢量;对发酵温度、接种量等发酵条件进行了优化,确定发酵培养基初始含水量为30%;种龄48 h;接种量6%;发酵过程中24 h全光照;菌丝生长温度25℃,产孢温度20℃。在最佳发酵条件下,ACM91产孢量达1.17×109cfu/g培养物,比初始发酵水平提高了12.4倍,为生防制剂的开发奠定了基础。
- 张涛涛刘伟成吴慧玲董丹刘霆
- 关键词：发酵条件
- 解淀粉芽胞杆菌MH71的生防活性及脂肽类抗生素基因检测被引量：12
- 2015年
- 从漠河多年永冻土层采集的冻土样品中分离的拮抗菌解淀粉芽胞杆菌MH71,对多种植物病原真菌和细菌具有较强的拮抗作用。本文对该菌株的生防活性相关特性及其对番茄灰霉病的离体防效进行了研究,同时,应用特异性引物对MH71中脂肽类抗生素合成有关基因进行检测。结果表明,该拮抗菌产生嗜铁素、蛋白酶、纤维素酶和吲哚-3-乙酸(IAA),不产生磷酸酯酶和几丁质酶;番茄离体叶片第5天调查结果表明该菌发酵液对番茄灰霉病的防效为92.8%,而在番茄果实上第7天和第11天调查的结果表明,与清水对照对比,发酵原液、发酵液5倍稀释液与50%啶酰菌胺1 000倍液化学农药对番茄灰霉病均有良好的防治效果,防效均为100%;从该菌的基因组DNA中扩增得到了fenB、mycB、ituA、sfp等脂肽类抗生素合成酶基因。此研究结果为该拮抗菌生防潜力的深入评价及活性物质的分离、鉴定和番茄灰霉病的生物防治提供了重要的参考资料。
- 卢彩鸽张殿朋刘霆董红平王俊丽刘伟成
- 关键词：番茄灰霉病
- 小链霉菌Yn168抗病毒活性组分的分离及其稳定性研究被引量：4
- 2015年
- 为进一步了解小链霉菌Yn168代谢产物中抗病毒活性物质的化学本质,为其作用机理的研究和产品开发提供依据,对该小链霉菌产生的抗病毒物质的活性组分进行了分离纯化及稳定性研究。经过乙酸乙酯萃取、三氯乙酸沉淀、Sephadex G-75柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),证明小链霉菌Yn168发酵液中的活性成分为2个组分的蛋白质Ⅰ168和Ⅱ168,分子量分别为34,22 k Da。稳定性研究表明,抗病毒蛋白在温度超过60℃、p H值小于6或大于8以及紫外线照射时间超过8 h的条件下,抗病毒活性均明显下降。所以,该小链霉菌的抗病毒活性成分为2个组分的小分子蛋白质,适于在较低温度、酸碱度接近中性及避光条件下保存和使用。
- 田兆丰刘霆吴慧玲厚凌宇刘伟成
- 关键词：分离纯化稳定性
- Collimonas sp.ZL261蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学特性被引量：5
- 2014年
- 分离自西藏色季拉山海拔4530 m高山草甸土壤的山冈单胞菌(Collimonas sp.)ZL261代谢产物具有很高的蛋白酶活性,为了明确其蛋白酶种类及其作用特点,本文采用限制性内切酶法构建了菌株ZL261的基因组文库,利用透明圈法筛选其胞外蛋白酶活性克隆,对其基因及蛋白结构进行了分析,进一步研究了该酶的表达和酶学特性。结果表明:该蛋白酶基因(命名为capro)包含一个长为1092 bp的完整开放阅读框(GenBank:KF992845),其编码蛋白由363个氨基酸组成;序列比对和同源性分析结果显示,该氨基酸序列与食真菌山冈单胞菌(Collimonas fungivorans)Ter331胞外蛋白酶序列(NC015856)相似性最高,为83%;一级、二级和三级结构分析均显示该蛋白含M35金属蛋白酶家族(EC 3.4.24.20)保守结构域。蛋白酶基因在大肠杆菌DH5α中异源表达获得了约38 kDa的目的蛋白。ZL261粗酶液对金属蛋白酶抑制剂EDTA敏感,最适作用pH值为7,最适温度30℃,在10℃时仍保持70%以上酶活力。综合分析可知,该蛋白酶为中性低温金属蛋白酶。具有较好的开发应用潜能。研究结果为微生物蛋白酶的开发提供了新型种质资源,也为探求不同生境微生物蛋白酶的系统进化关系提供了基础信息。
- 李洁琼张殿朋卢彩鸽吴慧玲于莉刘伟成
- 关键词：蛋白酶基因
- 放线菌Yn168菌种鉴定及其发酵条件对抗病毒活性的影响被引量：3
- 2013年
- 通过对一株具有广谱抗病毒活性的放线菌菌株Yn168的形态、培养特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析,对该放线菌进行了菌种鉴定,并研究了不同发酵条件对该菌发酵液抗病毒活性的影响。鉴定结果表明,该菌株为一株小链霉菌(Streptomyces parvus)。不同发酵条件下发酵液抗病毒活性检测表明,当种子培养24 h、种子液接种量为8%、培养温度为28℃、初始pH值为7.0、摇床转速为200 r/min时,发酵液对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制活性最强,枯斑抑制率在86%以上。
- 田兆丰刘霆张涛涛李永丹董丹刘伟成
- 关键词：放线菌菌种鉴定抗病毒活性发酵条件
- 利迪链霉菌G117产纳他霉素发酵培养基的优化被引量：3
- 2015年
- 纳他霉素对甘蓝枯萎病菌、番茄和甜椒灰霉病菌等多种植物病原真菌有显著的抑制作用,且具有安全、高效、环保等特点,有望作为一种新型生物农药。为了提高利迪链霉菌G117生产纳他霉素的产量,依次使用PlackettBurman设计法、最陡爬坡法和Box-Behnken Design对其发酵培养基进行优化。应用Plackett-Burman设计法筛选出影响纳他霉素产量的3个关键因素为玉米淀粉、豆粕粉、氯化钠。通过Box-Behnken Design及响应面分析确定了3个关键因素的最佳浓度,分别为玉米淀粉46.15 g/L、豆粕粉14.80 g/L、氯化钠5.88 g/L,纳他霉素预测最大产量为2 708.06mg/L。利用优化后的发酵培养基进行3次平行实验,得到纳他霉素的平均产量为2 718.57 mg/L,与理论预测值无显著差异,比基础培养基产量提高了33.2%。为建立利迪链霉菌的纳他霉素高产发酵工艺奠定了基础。
- 闫徳博卢彩鸽王俊丽刘德文刘德文于莉
- 关键词：纳他霉素响应面法发酵培养基
- 利迪链霉菌A02细菌人工染色体基因组文库的构建被引量：1
- 2013年
- 利迪链霉菌A02是从京郊森林土壤中分离筛选出的植物真菌病害高效生防菌，其活性产物为安全高效广谱的抗真菌剂纳他霉素。为了克隆纳他霉素生物合成基因簇和调控其表达相关的功能基因。通过基因改良的方式进行A02的定向分子改造，提高纳他霉素的效价和产量。提取了利迪链霉菌A02的基因组DNA，用HindⅢ和BamHI部分酶解后，回收了97-194kb和48．5-97kb大小的高分子量DNA。与质粒载体Copycontrol pCClBAC连接，分别构建了含有800个和1500个克隆的两个BAC文库。从文库中随机挑选20个克隆。酶切检测平均插入片段分别为133kb和65kb，空载率小于1％，假定利迪链霉菌的基因组有8×10^6kb，计算文库基因组覆盖率分别为12.28倍和11.25倍。因此。从文库筛选到目标片段的概率达99．99％以上。
- 董丹吴慧玲张涛涛刘伟成
- 关键词：BAC文库脉冲场凝胶电泳
