国家教育部博士点基金(200806981028)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：牛刚贺大林王蓉王新阳吴开杰更多>>
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- 细胞内胆固醇代谢在前列腺癌神经内分泌转化中的变化及意义被引量：3
- 2013年
- 目的:建立前列腺癌雄激素非依赖进展过程中的神经内分泌转化(NED)体外细胞模型,分析前列腺癌NE细胞转化时细胞内胆固醇代谢及其调控可能的变化及意义。方法:去雄激素诱导建立前列腺癌LNCaP细胞NE模型,通过细胞形态学观察、蛋白印迹检测多种NE标记物(SgⅢ、NSE、CgA)表达、体外细胞增殖实验检测NE的发生;利用免疫荧光染色检测细胞内胆固醇和SgⅢ的表达及分布;利用半定量RT-PCR检测多种参与胆固醇合成、摄取相关蛋白基因(LDL-R、SREBP-1、SREBP-2)的表达。结果:去除雄激素后体外培养,LNCaP细胞胞体缩小,轴突增长,呈NE样改变;SgⅢ、NSE、CgA等多种NE标记物表达上调,并随着时间延长逐渐增多;同时细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。NE转化后的LNCaP细胞内胆固醇分布呈现明显的轴突末端聚集趋势,但表达量并无显著改变,相应的细胞内参与胆固醇合成、摄取相关蛋白基因的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论:短期去雄激素体外培养可成功诱导雄激素依赖的前列腺癌LNCaP细胞发生NED,NED后的细胞内胆固醇分布发生显著的轴突末端聚集趋势,以增强细胞内多种神经内分泌颗粒的形成。
- 王蓉吴开杰牛刚王新阳贺大林
- 关键词：前列腺癌雄激素非依赖胆固醇代谢
- 胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的可视化与定量研究
- 2011年
- 目的通过菲律宾菌素III染色和脂质测定法,对胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的分布进行可视化与定量研究。方法利用胆固醇荧光探针菲律宾菌素Ⅲ标记稳定表达phogrin-GFP的MIN6细胞,对比细胞内游离胆固醇与胰岛素分泌囊泡的分布情况。通过连续蔗糖密度梯度离心法分离MIN6细胞中的胰岛素分泌囊泡,应用钼酸铵分光光度法和薄层分析法分别测定生物脂膜中磷脂和游离胆固醇含量,从而得到胆固醇所占比例。结果 MIN6细胞内菲律宾菌素III标记的游离胆固醇与胰岛素分泌囊泡在胞浆中的分布一致,主要聚集在核周及细胞膜下。此外,连续蔗糖密度梯度离心法分离胰岛素分泌囊泡层中富含胆固醇,该层游离胆固醇摩尔百分比为(48.62±3.28)mol%,高于其余各层的细胞器。结论本研究首次进行了胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的可视化与定量测定,发现胰岛素分泌囊泡富含胆固醇,为进一步研究胆固醇对胰岛素分泌囊泡形成的影响提供了理论基础和方法学依据。
- 王蓉牛刚张少娟贺大林
- 关键词：胰岛素分泌囊泡胆固醇
