国家自然科学基金(30500527)
- 作品数:4 被引量:6H指数:2
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- 相关机构:第三军医大学新桥医院第三军医大学西南医院重庆医科大学更多>>
- 发文基金:重庆市自然科学基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
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- 胞嘧啶脱氨酶自杀基因转染U251恶性脑胶质瘤细胞及其表达研究被引量:2
- 2006年
- 目的探讨胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因转染U251恶性脑胶质瘤细胞的方法及其表达效果。方法采用脂质体法将CD基因转染U251恶性脑胶质瘤细胞,G418筛选阳性克隆(U251-CD),采用RT-PCR、免疫细胞化学染色、流式细胞仪(FCM)凋亡分析和高效液相色谱(HPLC)等方法检测CD基因的表达及其功能。结果CD基因成功转染U251细胞,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR证实阳性细胞有CD基因表达,抗-CD-抗体免疫细胞化学法显示细胞浆染色阳性,U251-CD细胞加入5-氟胞嘧啶(5-FC)后,FCM显示细胞凋亡峰,HPLC可检测到5-FC培养液内有5-氟尿嘧啶(5-FU)产生。结论CD基因能够在U251细胞表达,并具备将5-FC转变为5-FU的功能,造成肿瘤细胞凋亡,CD-5-FC系统可作为恶性脑胶质瘤辅助治疗手段之一。
- 吕胜青杨辉张克斌尹昌林何家全高方友刘运生
- 关键词:胞嘧啶脱氨酶转染神经胶质瘤
- Hes-1在人脑胶质瘤干细胞分化过程中的动态表达及意义
- 2008年
- 目的研究在体外培养的人脑胶质瘤干细胞诱导分化过程中Hes-1蛋白表达的动态变化。方法对体外培养的人脑胶质瘤干细胞进行诱导分化,于未分化、分化第3、7d收集标本,行Hes-1蛋白免疫荧光染色后流式细胞术检测标本中阳性细胞比例;Hes-1分别与CD133、GFAP、MAP2、MBP蛋白双标免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜下观察Hes-1蛋白表达强度及细胞类型的变化。结果随着人脑胶质瘤干细胞的分化,Hes-1蛋白阳性细胞比例由未分化至分化第3d、第7d有明显下降(P<0.01);Hes-1蛋白在CD133、MAP2、GFAP和MBP阳性细胞均可表达,但在较幼稚的细胞中表达较强,随着细胞分化成熟,其表达明显减弱,分化第7d时大部分分化成熟的肿瘤细胞(MAP2、GFAP和MBP阳性细胞)中表达极弱或不表达。结论随着人脑胶质瘤干细胞的分化,Hes-1蛋白表达的阳性细胞比例和强度均明显下降,提示Hes-1表达的动态变化可能与调控人脑胶质瘤干细胞的分化过程有关。
- 于春泳尹昌林吕胜青杨辉
- 关键词:人脑胶质瘤干细胞分化免疫荧光染色
- pSiRNA-Shh逆转录病毒载体的构建及对恶性脑胶质瘤细胞作用的离体实验研究被引量:4
- 2007年
- 目的建立逆转录病毒介导的人Shh基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用。方法将人Shh基因RNA干扰双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer 5.1-H1 Retro中,构建成携带人Shh基因RNA干扰逆转录病毒载体pSiRNA-Shh,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染恶性脑胶质瘤细胞株U251和CHG-5细胞,用WST-8、RT-PCR和Western Blotting分别检测对转染细胞活性、人Shh mRNA和蛋白表达的影响。结果重组pSiRNA-Shh质粒经测序鉴定正确。重组逆转录病毒滴度可达210×104CFU/ml,感染U251和CHG-5恶性脑胶质瘤细胞株后3 d能明显抑制细胞生长,RT-PCR和Western Blotting检测人Shh mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论携带人Shh基因RNA干扰双链转录DNA片段的逆转录病毒体现出明显的抑制恶性脑胶质瘤细胞生长作用,为下一步开展基因治疗恶性脑胶质瘤奠定了基础。
- 尹昌林吕胜青黄轶李光辉唐莉杨辉
- 关键词:恶性脑胶质瘤基因治疗
- 胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统对恶性脑胶质瘤荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用
- 2008年
- 目的评判胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)自杀基因治疗系统对恶性脑胶质瘤的抗肿瘤效果。方法采用Lipofectamine2000^TM脂质体介导方法将CD基因转染U251恶性胶质瘤细胞系,并接种于裸鼠前臂皮下,成瘤后腹腔注射5-FC(每日500mg/kg体重)10d,观察荷瘤鼠肿瘤的生长情况,8周后比较转染组与对照组肿瘤的体积与重量,并进行病理形态学分析。结果U251细胞获得CD基因的成功转染,5-FC用于不同组别荷瘤裸鼠,8周后转染组肿瘤体积(0.09±0.03)cm^3和重量(0.28±0.11)g明显小于对照组(1.81±0.77)cm^3和(1.63±0.80)g;形态学揭示转染组肿瘤细胞出现明显的凋亡与坏死。结论裸鼠在体实验研究表明:CD/5-FC自杀基因治疗系统是治疗恶性脑胶质瘤行之有效的手段之一。
- 吕胜青张克斌刘学强尹昌林邱克军Eric E.ZHANG杨辉
- 关键词:胞嘧啶脱氨酶5-氟胞嘧啶胶质瘤