国家科技支撑计划(2006BA105A07)
- 作品数：29 被引量：276H指数：11
- 相关作者：叶军顾学范邱文娟韩连书高晓岚更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属新华医院北京大学第一医院广州市妇女儿童医疗中心更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多重连接探针扩增技术及其应用被引量：15
- 2009年
- 多重连接探针扩增是一种建立在PCR技术上的新型相对定量检测技术，该技术具有高效率、高分辨率、操作简便、设备要求低等诸多优势，目前已被广泛应用于基因片段缺失与重复、点突变及甲基化检测等相关疾病的分子生物学研究。其与基因芯片结合而建立的多重连接探针扩增微阵列芯片技术不但真正具备了高通量的检测能力，还使该技术的可靠性获得了很大的提高。本文就多重连接探针扩增的技术方法、应用进展及目前还存在的局限性作一综述。
- 周大文任兆瑞
- 关键词：毛细管电泳芯片
- 诱导供者胰岛细胞高表达血红素加氧酶-1延长大鼠胰岛移植物的存活时间
- 2009年
- 目的探讨钴原卟啉（CoPP）诱导大鼠胰岛细胞高表达血红素加氧酶－1（HO-1）后，对延长胰岛移植物存活时间的作用。方法（1）将分离和纯化的供者（BN大鼠）胰岛细胞分为CoPP诱导组和未诱导组。CoPP诱导组供者在分离胰岛细胞前3天和前1天腹腔注射2．5mg／kg的CoPP，未诱导组不注射CoPP。诱导后，采用免疫荧光法及Western免疫印迹法检测两组胰岛细胞中HO-1的表达情况，采用酶联免疫吸附试验（EUSA）和葡萄糖刺激试验检测胰岛细胞的胰岛素释放水平。（2）Lewis大鼠经四氧嘧啶静脉注射后建立糖尿病模型，取10只成功建立糖尿病模型的大鼠作为胰岛细胞移植的受者，随机平均将受者分为实验组和对照组，分别移植经CoPP诱导和未经诱导的供者胰岛细胞。移植后，观察和比较两组受者胰岛移植物的存活时间和发生排斥反应后胰岛移植物的组织病理学变化。结果CoPP诱导组胰岛细胞高表达HO-1，而未诱导组不表达HO－1；CoPP诱导组和未诱导组供者胰岛细胞胰岛素分泌量，在低糖刺激下分别为（15．65±0．89）mU／L和（12．28±0．89）mU／L（P〉0．05），在高糖刺激下分别为（46．60±1．13）mU／L和（19．01±1．49）mU／L（P〈0．05），刺激指数分别为2．98±0．10和1．55±0．01（P〈0．05）。实验组和对照组胰岛移植物平均存活时间分别为（12．20±5．67）d和（5．60±1．14）d（P〈0．05）；当受者发生排斥反应时，对照组胰岛移植物周边可见明显的淋巴细胞、成纤维细胞以及单个核细胞浸润，而实验组细胞浸润的程度明显较轻。结论CoPP可诱导大鼠胰岛细胞高表达HO-1，其对胰岛细胞有明显保护作用。移植高表达HO-I的胰岛细胞能显著延长胰岛移植物的存活时间。
- 侯凌尹注增向莹李俊华陈实陈刚罗小平
- 关键词：胰岛移植血红素加氧酶-1
- 糖原累积病Ⅲ型十例AGL基因突变研究被引量：7
- 2009年
- 目的研究糖原累积病Ⅲ型（glycogen storage diseases typem，GSDⅢ）患者糖原脱支酶AGL基因突变情况。方法采用PCR、DNA直接测序法，对临床表现为肝大、低血糖、生长落后、运动耐力下降的10例GSDⅢ患者的糖原脱支酶基因进行突变检测。检出突变的片段再经DNA双向测序证实。采用限制性内切酶片段长度多态性和荧光PCR结合基因扫描方法证实5个新突变。结果10例患者中共检出13种突变类型，包括4种剪切突变：IVS6＋1G〉A、IVS6—1G〉A、IVS14＋1G〉T、IVS26-2A〉C；5种无义突变：R469X、R864X、S929X、R977X、Y1428X；3种缺失突变：c．408—411delTTG、c．2717—2721delAGATC、c．2823delT；1种插入突变：C．4234insT。除IVS14＋1G〉T、R864X和R977X，其余10种均未见报道过。限制性内切酶片段长度多态性分析证实了3个新剪切突变，荧光PCR结合基因扫描方法证实2个缺失突变的缺失碱基数。2例患者仅检出1个致病突变，其余患者均明确有2个致病突变，突变检出率为90％。IVS14＋1G〉T突变频率最高，占25％。结论10例GSDm型患者的糖原脱支酶基因突变呈高度异质性，发现13种突变，其中10种是新突变，IVS14＋1G〉T是较常见的突变类型。
- 王霞邱文娟叶军韩连书张惠文蒋丽蓉张雅芬顾学范
- 关键词：突变
- Alport综合征治疗进展被引量：2
- 2015年
- Alport综合征白1927年首次报道命名以来，人类对其不断研究和认识已接近90年。约85％的Alport综合征患者是COIAA5基因突变导致的X连锁显性遗传型Alport综合征，其中男性患者病情较重，40岁前肾衰竭的比例达90％，女性患者病情相对较轻。约15％的Alport综合征患者是COL4A3或COIAA4基因突变导致的常染色体遗传型Alport综合征，其中以常染色体隐性遗传型Alport综合征患者为主，几乎均在30岁前出现肾衰竭。可见alport综合征是一种严重危害青壮年身体健康的疾病。
- 张琰琴丁洁王芳张宏文
- 关键词：ALPORT综合征ALPORT综合征常染色体隐性基因突变遗传型女性患者
- 多重连接依赖性探针扩增技术在X连锁Alport综合征基因诊断中的应用被引量：3
- 2012年
- 目的应用多重连接依赖性探针扩增（MLPA）技术检测COL4A5基因，为x连锁Alport综合征基因诊断探索新的方法。方法对在北京大学第一医院临床诊断的，并且行COL4A5基因检测存在大片段缺失突变的3例X连锁Alport综合征患者，采用反转录（RT）-PCR、PCR和MLPA三种方法检测分析COIAA5基因突变。结果患儿l发现COIAA5基因连续缺失第22、23、24外显子；患儿2发现COIAA5基因缺失第30外显子；患儿3发现缺失COIAA5基因第1、2外显子和COIAA6基因第1、2外显子。这3个大片段缺失突变均为国内外首次报道新的突变。RT-PCR、PCR和MLPA方法结果一致，相互验证补充。结论MLPA可以用于检测COIAA5基因大片段缺失突变，为X连锁Alport综合征基因诊断提供了一种新的方法。
- 张琰琴赵丹俞礼霞丁洁王芳
- 关键词：肾炎遗传性突变
- 甲基丙二酸血症伴同型半胱氨酸血症患儿临床及基因突变分析被引量：20
- 2009年
- 目的对甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症患儿进行临床诊治分析及基因突变检测。方法诊断主要依靠串联质谱检测血中的丙酰肉碱水平、气相色谱-质谱检测尿中甲基丙二酸水平及荧光偏振免疫法检测血同型半胱氨酸水平；治疗给予维生素B12、甜菜碱、左旋肉碱、叶酸及维生素B6；基因突变分析应用PCR扩增MMACHC基因外显子，直接测序。结果14例患儿中12例经治疗后，临床症状明显好转，血中丙酰肉碱、同型半胱氨酸及尿中甲基丙二酸显著降低，2例患儿放弃治疗死亡。12例患儿检测到5种MMACHC基因突变，2例未检测到突变。7例为609G〉A纯合突变，5例为609G〉A伴658_660delAAG（2例）、567_568insT、394C〉T和217C〉T杂合突变，其中658_660delAAG和567_568insT为尚未报道的突变。结论甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症患儿经合理治疗可达到较好的临床效果。基因突变检测表明609G〉A为中国患儿的热点突变。
- 韩连书王斐胡宇慧叶军邱文娟张雅芬高晓岚王瑜金晶顾学范
- 关键词：甲基丙二酸血症同型半胱氨酸血症基因突变
- 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因启动子区域甲基化状态与先天性心脏病的关系被引量：4
- 2012年
- 目的通过比较先天性心脏病(CHD)患儿与无先天性出生缺陷儿童的5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因启动子区域甲基化状态,探讨MTHFR基因启动子甲基化状态与儿童CHD的关系。方法收集53例CHD患儿(病例组)及80例无先天性出生缺陷的儿童(对照组)外周静脉血液标本。二组儿童年龄为10个月～14岁,均为武汉市及周边地区的汉族人。病例组男29例,女24例;对照组男44例,女36例。首先提取血液白细胞DNA,然后对DNA进行亚硫酸氢钠修饰,采用甲基化特异性PCR(MSP)技术通过特异性引物检测MTHFR基因启动子区域甲基化状态。应用SPSS 15.0软件进行χ2检验,分析MTHFR基因启动子区域甲基化状态与CHD的关系。结果 MSP分析显示,病例组和对照组MTHFR基因启动子区域非甲基化分别为36例(67.92%)和69例(86.25%),部分甲基化分别为15例(28.30%)和9例(11.25%),甲基化分别为2例(3.78%)和2例(2.50%),2组间MTHFR基因启动子甲基化状态的差异具有统计学意义(χ2=6.554,P=0.038)。结论 MTHFR基因启动子区域超甲基化可能是导致CHD发病的原因之一。
- 张文迪余肖黄姗罗小平
- 关键词：先天性心脏病甲基化启动子
- Kennedy病两个家系的临床表型、基因型和遗传特征分析被引量：8
- 2010年
- 目的分析两个Kennedy病家系的临床表型、基因型和家系特征。方法收集Kennedy病患者的临床资料，用基因分析的方法，明确患者及家族成员雄激素受体基因第1外显子cAG序列的重复数。结果A家系4代共58人，先证者39岁隐袭起病。B家系5代共61人，有两例患者分别于39岁、41岁缓慢起病。3例患者均以下运动神经元损害为特征，都出现了雄激素不敏感综合征的相关表现。血清肌酶呈轻中度升高；肌电图呈广泛前角损害；肌肉活检示神经源性肌萎缩；雄激素受体基因第1外显子中CAG重复数分别为49、48、47。两个家系的遗传方式均为X连锁隐性遗传。结论Kennedy病多为中年男性隐袭起病，主要表现为延髓肌和脊髓肌的萎缩和无力，基因分析有助于对本病的确诊，并可明确携带者，以进行遗传咨询及产前诊断。
- 杨娟张成胡朝晖詹益鑫操基清任惠
- 关键词：临床表型基因分析家系分析
- Citrin缺陷所致新生儿肝内胆汁淤积症研究进展
- 2009年
- Citrin缺陷所致新生儿肝内胆汁淤积症（NICCD）是近年来新发现的一种遗传代谢缺陷病，是由于SLC25A13基因突变引起citrin蛋白合成障碍所致。其临床表现复杂多样，确诊需要依赖基因诊断，目前尚缺少特异性的治疗方法。该文介绍了NICCD的国内外研究进展及发展趋势，以促进国内对NICCD的认识和进一步研究。
- 樊春刘丽陈耀勇
- 关键词：SLC25A13基因肝内胆汁淤积症瓜氨酸血症
- 人骨髓间质干细胞经心脏移植治疗超氧化物歧化酶1-G93A转基因鼠的疗效被引量：1
- 2010年
- 目的研究经心脏移植人骨髓间质干细胞（hMSCs）对肌萎缩侧索硬化（ALs）模型鼠发病时间、生存期和病理的影响。方法体外培养扩增hMSCs，流式细胞仪鉴定其性质及纯度。将3×10。个第5代hMSCs经心脏移植入预放疗的8周龄超氧化物歧化酶1（SOD1）-G93A转基因鼠，用Weyd4分法评定移植鼠和未治疗鼠的生存期、发病时间，采取尼氏染色计数脊髓前角运动神经元，通过免疫荧光检测人特异性核抗原验证hMSCs在受体鼠中枢神经系统中的植入。结果生存分析显示，经心脏移植hMSCs的ALS模型鼠平均发病时间为（172．85±5．82）d，比未治疗组[（156．56±3．60）d]延迟16d，差异有统计学意义（χ2=10．888，P=0．001）；hMSCs经心脏移植组平均生存期为（202．19±d．09）d，比未治疗组[（188．32±3．51）d]延长14d，差异有统计学意义（χ2=3．917，P=0．04）。尼氏染色显示在20周时移植鼠脊髓前角大运动神经元计数多于未治疗鼠；终末期hMSCs移植鼠中，在脑和脊髓前角病变区可检测到人特异性核抗原。结论hMSCs可经心脏移植，在ALS模型鼠中可长期植入，延长生存期，延缓脊髓前角运动神经元的丢失。
- 赵翠萍张成王益华周畅李婉仪
- 关键词：肌萎缩侧索硬化间质干细胞移植超氧化物歧化酶
