黑龙江省教育厅资助项目(1151hz025)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 相关作者：裴世春张园园才琳钱丽丽张甄更多>>
- 相关机构：黑龙江八一农垦大学大庆麦伯康生物技术有限公司齐齐哈尔大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅资助项目国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠源抗AFB1噬菌体单链抗体库的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 研究以AFB1-BSA免疫的小鼠脾脏细胞为试验材料,利用RT-PCR技术,克隆了抗AFB1抗体重链和轻链可变区基因VH和VL,利用连接肽(Gly4Ser)3将VH和VL链接成单链抗体基因scFv,通过噬菌体展示载体pCANTAB-5E携带将其电转化E.coli TG1,经氨苄青霉素平板筛选,构建了库容为2.13×109 cfu/μg DNA的噬菌体单链抗体库,抗体库的克隆阳性率达到100%,且多样性良好,为高活性抗AFB1单链抗体的筛选提供了材料基础。
- 裴世春孙大庆郭德军宋薇蒋琛
- 关键词：黄曲霉毒素B1单链抗体RT-PCR
- 抗黄曲霉毒素B1重链IgG2b亚型单克隆抗体的制备及应用被引量：1
- 2009年
- 目的制备抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的重链IgG2b亚型单克隆抗体,并建立黄曲霉毒素B1的间接竞争ELISA检测方法。方法采用AFB1-BSA偶联物为免疫抗原,AFB1-STI偶联物为检测抗原,利用间接竞争ELISA筛选分泌抗AFB1单抗的细胞株,并对抗体进行鉴定。结果筛选到1株能分泌特异性抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其染色体数目为(90±10)条;所分泌的单抗亚类重链为IgG2b,轻链为λ;间接ELISA检测该株杂交瘤细胞分泌上清效价在1∶12800～1∶25600,纯化腹水效价为1∶105～1∶106。传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;建立的间接竞争ELISA检测方法的最低检出限为0.001ng/ml,校正曲线的线性范围为0.005～5ng/ml,IC50为0.01ng/ml;与AFB1的结构类似物AFM1和化学结构有差异的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的交叉反应率分别为1.4%和<1%。结论所制备的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体具有高度特异性和稳定性,可应用于间接竞争ELISA检测方法。
- 裴世春李玉花张园园才琳
- 关键词：黄曲霉毒素B1单克隆抗体酶联免疫试验
- 黄曲霉毒素B1检测ELISA条件的优化被引量：7
- 2009年
- 采用黄曲霉毒素B1与牛血清白蛋白偶联物(AFB1—BSA)抗原免疫Balb/C小鼠获得特异性抗体。以AFB1—STI为检测抗原,利用此抗体,进行间接竞争ELISA法试验。通过正交实验确定了最佳抗原包被反应质量浓度为1.0μg/mL;最佳抗原包被条件为:4℃过夜,一抗和酶标二抗IgG—HRP;最佳稀释度为1∶200000和1∶5000。在此优化条件下制备的抗体检测黄曲霉毒素B1具有很高的特异性和灵敏性,具有实际应用价值。
- 才琳张甄钱丽丽张园园裴世春
- 关键词：黄曲霉毒素B1酶联免疫吸附测定单克隆抗体
- 黄曲霉毒素B1检测ELISA条件的优化
- 采用黄曲霉毒素B1与牛血清白蛋白偶联物(AFB1—BSA)抗原免疫Balb/C小鼠获得特异性抗体。以AFB1—STI为检测抗原,利用此抗体,进行间接竞争ELISA法试验。通过正交实验确定了最佳抗原包被反应质量浓度为1.0...
- 才琳张甄钱丽丽张园园裴世春
- 关键词：黄曲霉毒素B1酶联免疫吸附测定单克隆抗体
- 文献传递
- 噬菌体展示技术在食品真菌毒素检测领域的应用被引量：4
- 2008年
- 噬菌体展示技术(Phage display technology)是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一项分子生物学新技术。它以噬菌体或噬粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。利用噬菌体表面展示技术可以构建抗体库、随机肽库、蛋白质突变体库和cDNA文库,从而广泛用于单链抗体的筛选、先导化合物的筛选、疫苗的研制等,尤其是在单链抗体、模拟抗原表位的筛选及建立食品安全快速检测体系方面,具有广阔的应用前景。本文跟踪了目前噬菌体展示技术在真菌毒素检测领域的最新研究进展和发展前景。
- 张园园裴世春郑东和
- 关键词：噬菌体展示技术食品安全单链抗体模拟表位
- 应用HTS-ELISA筛选方法制备抗黄曲霉毒素M1单抗被引量：4
- 2010年
- 【目的】确立基于高通量酶联免疫(HTS-ELISA)筛选方法制备高亲和力抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的方法体系。【方法】采用AFM1-BSA(Aflatoxin M1-bovine serum albumin)免疫Balb/C小鼠,利用HTS-ELISA方法筛选分泌抗黄曲霉毒素M1单抗的杂交瘤细胞株,并分析抗体的特性。【结果】筛选到14株具有分泌高活性抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化的最佳抗体的亲和力为5.5×10-10 mol/L。与黄曲霉毒素M1及其结构类似物黄曲霉毒素M2、B1、B2、G1、G2以及其他物质脱氧雪腐镰刀菌烯醇和BSA的交叉反应率分别为100%、4.5%、21.5%、1.0%、16.6%、1.0%、0%、0%。间接竞争ELISA检测最低检测限可达0.01μg/L,线性范围为0.1-10μg/L,竞争性抑制抗体反应50%的抑制浓度IC50为0.82μg/L,添加0.25-5μg/L黄曲霉毒素的牛奶间接竞争ELISA检测回收率在60.3%-152.8%之间。【结论】HTS-ELISA方法可以制备具有高亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体,可为黄曲霉毒素M1免疫检测体系的建立提供优质抗体材料。
- 裴世春何娜张立军陆梅生
- 关键词：黄曲霉毒素M1单克隆抗体
