国家高技术研究发展计划(2012AA101502)
- 作品数：15 被引量：129H指数：6
- 相关作者：张友军王少丽吴青君谢文高希武更多>>
- 相关机构：中国农业科学院蔬菜花卉研究所中国农业大学东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程生物学更多>>
- 枯草芽孢杆菌NJ-18的质粒消解及其在小麦根部的定殖被引量：2
- 2013年
- 【目的】研究从土壤中分离出来的具有广谱抗菌活性的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株NJ-18与作物互作关系,并观察外源导入绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的NJ-18菌株在小麦根部的定殖能力。【方法】首先使用十二烷基硫酸钠(SDS)消解NJ-18的质粒,然后采用化学法导入gfp分子标记,并采用激光共聚焦显微镜检测该标记菌株在小麦根部的定殖能力。【结果】获得了NJ-18的质粒消解菌株C136,并采用化学方法成功将外源基因导入野生型菌株NJ-18及其质粒消解菌株C136,C136的转化效率可达到3.42×105cfu/μg质粒DNA,是NJ-18转化效率的10倍左右。对比NJ-18与C136的生物活性发现,C136能够保持原有的抑菌活性;但是C136的生长曲线第一峰值出现的时间滞后12 h,第一峰值被抑制了29.4%;NJ-18-GFP能够附着在病原菌菌体上,导致其菌丝呈现膨大、畸形等;接种7 d后能够在小麦根部表皮和中柱稳定定殖。【结论】枯草芽孢杆菌NJ-18菌株的转化方法宜选用化学法;该菌株能够在小麦根部定殖。
- 卢靖乐余新燕侯毅平王建新周明国陈长军
- 关键词：化学转化GFP定殖
- 小菜蛾抗药性监测方法——叶片药膜法被引量：13
- 2013年
- 小菜蛾Plutella xylostella(L.)是重要的十字花科蔬菜害虫。生物测定是进行害虫抗药性监测及筛选有效防治药剂的重要技术。本文对小菜蛾的生物测定技术进行了详细总结,以期为小菜蛾等鳞翅目害虫幼虫生物测定方法的规范提供依据。
- 郭磊边全乐张宏军高希武梁沛
- 关键词：小菜蛾生物测定
- 小菜蛾类钙粘蛋白片段的原核融合表达载体构建及其条件优化被引量：1
- 2013年
- 构建了小菜蛾钙粘蛋白片段基因的重组载体,为提高其在大肠杆菌中的表达量,研究了时间、温度、IPTG浓度对融合蛋白表达量以及可溶性的影响。结果表明,使用LB培养基37℃培养1.5h后,采用终浓度为0.1mmol·L-1的IPTG,在25℃180r·min-1诱导培养36h融合蛋白的表达量最大,并且温度的改变对融合蛋白的可溶性几乎没有影响,SDS-PAGE电泳检测结果表明,融合蛋白的分子质量与预计大小一致,约为16kDa。
- 郑晓旭杨峰山朱勋张友军
- 关键词：小菜蛾钙粘蛋白原核表达
- 水稻白叶枯病菌室内链霉素抗性菌株的诱导及其抗性分子机制和风险评价被引量：4
- 2013年
- 通过紫外光照射诱导获得了6株水稻白叶枯病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae抗链霉素突变体。测得链霉素对水稻白叶枯病菌敏感菌株ZJ173及其抗性突变体的最低抑制浓度(MIC)分别为0.10和600μg/mL;对敏感菌株的有效抑制中浓度(EC50)为0.03μg/mL,对抗性菌株的平均EC50值为11.64μg/mL,平均抗性倍数为388。通过PCR扩增了敏感菌株ZJ173及5株抗性菌株的rpsL基因(编码S12核糖体蛋白)和rrs基因(编码16S rRNA),并检测了strA基因是否存在。序列分析表明,5株被测抗性菌株的rpsL基因均发生了突变,其中4株在氨基酸43位、1株在88位,均由赖氨酸突变为精氨酸,而rrs基因未发生突变,strA基因未被检测到。表明实验室诱导获得的水稻白叶枯病菌抗性菌株对链霉素的抗药性是由rpsL基因突变引起的。抗性风险研究表明,抗性突变体的抗药性在无药剂压力下可稳定保持,其致病性、生长速率与敏感菌株相比无明显差异,竞争性低于或略低于敏感菌株,抗性自发突变率较高,且抗性突变为单一位点突变,病害循环为多循环,因此由rpsL基因突变引起的水稻白叶枯病菌对链霉素的抗性风险较高。
- 徐颖祝晓芬周明国
- 关键词：水稻白叶枯病菌链霉素诱导抗性RPSL基因抗性风险
- 昆虫对双酰胺类杀虫剂抗性机制研究进展被引量：32
- 2015年
- 双酰胺类杀虫剂是以昆虫鱼尼丁受体为作用靶标的新型杀虫剂,由于其作用机制独特,对多种鳞翅目害虫具有良好的防治效果而得到广泛应用。但已经有多种害虫的田间种群对该类药剂产生了抗性,甚至导致田间防治失败。本文在综述昆虫对双酰胺类杀虫剂抗性现状的基础上,重点总结了抗性机制方面的最新研究进展,并对今后的研究方向进行了展望,以期为进一步深入研究双酰胺类杀虫剂的抗性机制提供借鉴。
- 李秀霞梁沛高希武
- 关键词：抗药性点突变
- 荔枝霜疫霉不同发育阶段对4种QoI类杀菌剂的敏感性被引量：4
- 2016年
- 荔枝霜疫霉是荔枝上的严重病害。在离体条件下比较了4种QoI类杀菌剂烯肟菌酯、烯肟菌胺、SYP-2815和苯醚菌酯对荔枝霜疫霉不同发育阶段的影响。结果表明：供试药剂对荔枝霜疫霉病菌菌丝扩展及孢子囊产生量均表现出一定的抑制作用,EC50值分别在0.197 01.257 9μg/m L和0.212 70.816 0μg/m L之间,而对其游动孢子释放的抑制作用较低,EC50值在4.144 87.425 3μg/m L之间;4种药剂在一定浓度下会加速游动孢子的消解,抑制休止孢的形成;对孢子囊和休止孢萌发具有优异的抑制活性,EC50值分别在0.046 50.342 4μg/m L和0.036 50.187 7μg/m L之间。
- 周俞辛杨云碧张彧李斌司乃国刘长令刘西莉
- 关键词：荔枝霜疫霉发育阶段敏感性
- 小菜蛾中肠氨肽酶N2在昆虫细胞中的表达被引量：2
- 2012年
- 利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac baculovirus expression system)表达获得小菜蛾Plutella xylostella(L.)中肠氨肽酶N2(aminopeptidase N,APN2)蛋白,成功建立了该蛋白在昆虫细胞中的表达体系。将对Cry1Ac毒素敏感和已产生抗性的小菜蛾中肠APN2基因插入表达载体pFAST Bac HTB中,并在草地夜蛾Spodoptera frugiperda细胞系(Sf9)中进行了重组表达。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白免疫印迹技术(Western-blotting)结果显示,在107 kDa处有1条特异性蛋白条带。研究表明,小菜蛾中肠APN2基因可在Sf9细胞中成功表达,这为继续研究其功能及抗性的关系奠定了基础。
- 王俊华周小毛吴青君王少丽谢文陈得峰徐宝云张友军
- 关键词：苏云金芽孢杆菌氨肽酶N杆状病毒表达系统
- 番茄晚疫病菌和叶霉病菌对嘧菌酯和甲基硫菌灵的敏感性检测及抗药性风险分析
- 本研究对2013年采集自全国主要番茄产区的番茄病样进行分离、纯化，获得了番茄晚疫病菌472株和番茄叶霉病菌776株。通过室内毒力测定，建立了番茄晚疫病菌对嘧菌酯的敏感基线，并分别检测了田间番茄晚疫病对嘧菌酯、番茄叶霉病菌...
- 王秋实郑晖黄中乔朱春雨刘西莉
- 关键词：番茄晚疫病番茄叶霉病抗药性风险
- 甲氧虫酰肼亚致死剂量对抗、感棉铃虫解毒酶活性的影响
- 以室内经甲氧虫酰肼选育的棉铃虫抗性种群(R,抗性倍数约为28)和同源敏感(S)种群作为研究对象,经LC40剂量分别处理两种群3龄初幼虫,48h后转入人工饲料饲养,测定3～6龄棉铃虫体内解毒代谢酶系的活性.通过对CK处理下...
- 任龙徐希宝张靖芮昌辉
- 关键词：甲氧虫酰肼解毒酶活性
- 近等基因系Cry1Ac抗性和敏感小菜蛾中肠蛋白酶的测量及部分生物学参数比较
- 2014年
- 比较了近等基因系Cry1Ac抗性(NIL-R)和敏感(DBM1Ac-S)小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫中肠蛋白酶的活性,测量了NIL-R和DBM1Ac-S的卵宽、卵长和蛹重,并对其卵的孵化率、化蛹率、雌雄比等参数进行了统计。结果表明,抗、敏种群中肠类胰凝乳蛋白酶的活力差异不显著,而敏感种群中肠的总蛋白酶、类胰蛋白酶的活力显著高于抗性品系。这两个种群卵的大小和孵化率、蛹重和化蛹率、雌雄比在统计上没有显著性差异,说明就以上生物学参数来看,NIL-R对Cry1Ac的抗性并没有引起抗性的适合度代价。
- 杨艳菊朱勋向文胜王少丽吴青君徐宝云谢文张友军
- 关键词：近等基因系CRY1AC小菜蛾
