国家自然科学基金(39970654)
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
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- 胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株的毒性作用被引量：2
- 2007年
- 采用MTT检测法、Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测法及细胞形态学观察法,研究了植物型杀虫剂胡椒碱对白纹伊蚊Aedes albopictusC6/36细胞株的细胞毒性、诱导细胞凋亡与坏死的关系、Fas蛋白的表达、细胞生长状态改变及受损细胞的恢复。结果表明:胡椒碱浓度在0.035mmol/L以上时可以诱发C6/36细胞形态学改变,在倒置显微镜下表现为细胞呈多形性,细胞胀大或皱缩,细胞间隙增宽,大片细胞聚集成团,脱落、崩解、死亡。用胡椒碱处理24h后,对C6/36细胞的半数毒性浓度(IC50)为0.32mmol/L,且毒性作用强度随着药物浓度增加而增强。Annexin-V/PI双染法检测结果显示药物浓度在0.28mmol/L以上诱导的细胞凋亡明显,药物浓度为0.56mmol/L时细胞凋亡率达19.4%,而药物引起的细胞总死亡率为72.7%;Fas蛋白表达在药物浓度0.28mmol/L以上时有所上调,但不明显。高浓度胡椒碱(0.56mmol/L)分别作用于C6/36细胞24和48h,在经历一段生长停滞后,24h组受损细胞均可缓慢恢复,而48h组细胞则出现不可逆性的损伤。由此认为:胡椒碱对C6/36细胞株有毒性作用,但药物诱导的细胞凋亡在细胞毒性作用机制中不占主导地位;胡椒碱对C6/36细胞的作用有时间依赖性,延长作用时间,药物对细胞的毒性作用增强。
- 王玉芳诸葛洪祥周霞黄利红
- 关键词：白纹伊蚊胡椒碱细胞凋亡
- 钉螺血淋巴细胞及其功能的研究被引量：12
- 2007年
- 目的研究获取钉螺血淋巴细胞的方法,观察其形态结构,研究其免疫等相关功能。方法参照外周淋巴器官中淋巴细胞的悬浮收集法,获取钉螺血淋巴细胞,经Giemsa染色后显微镜观察其形态。血淋巴细胞经结晶紫染色后分别计数悬浮法、传统压片法及针刺法获取的血淋巴细胞数,并进行方差分析和Dunnett-t检验。取冻融的血淋巴细胞上清进行免疫沉淀、抑菌、吞噬杀菌实验。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析血淋巴细胞蛋白组份相对分子质量(Mr)。结果钉螺血淋巴细胞分为圆形有丝状伪足、嗜酸性圆形无丝状伪足、嗜碱性圆形无丝状伪足和梭形细胞4种形态,平均直径依次约为10．93、6．13、6．08及11．06μm,各约占细胞总数的50％、30％、5％及15％。每只钉螺悬浮法、传统压片法及针刺法获取的血淋巴细胞均数分别为1．50、0．66及0．03万／ml。悬浮法与传统压片法、与针刺法差异有统计学意义(F=281．47,P<0．01)。进一步Dunnett-t检验,悬浮法与压片法、与针刺法的血淋巴细胞总体均数差异有统计学意义(t1=15．67,t2=24．50,两组P<0．01)。血淋巴上清与日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)反应出现絮状沉淀．抑菌试验对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌出现明显的抑菌圈,血淋巴细胞对白色念珠菌的吞噬率和杀菌率分别为86％和46％。血淋巴细胞蛋白组份相对分子质量约为Mr112 300、107 100、97 200、73 500、60000及12 000。结论悬浮法可获得大量钉螺血淋巴细胞,其具有沉淀SEA、抑制金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌生长。以及吞噬杀灭白色念珠菌等免疫功能。
- 张红梅诸葛洪祥王玉芳龚唯陆祥彬黄利红
- 关键词：钉螺血淋巴细胞抑菌SDS-PAGE
- 汉滩病毒76-118株核蛋白部分基因片段的克隆、表达和抗原活性测定
- 2005年
- 为了研究汉坦病毒的DNA疫苗,用PCR方法克隆汉滩病毒76-118株S片段部分基因,构建真核细胞表达质粒pEGFP-HTNV-S0.7,并在成纤维细胞L929中进行瞬时表达。成功地得到预期大小约0.7kb的重组基因,并在成纤维细胞中进行了瞬时表达。免疫印迹分析产生的相对分子质量约26000的蛋白质具有抗汉坦病毒的抗原活性。直接免疫荧光分析显示了特异性的绿色荧光。
- 张梦寒诸葛洪祥陈明中许菊
- 关键词：汉滩病毒S片段
- 汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫小鼠效果的实验被引量：3
- 2004年
- 目的 观察汉滩病毒DNA疫苗滴鼻免疫诱导机体产生的免疫应答 ,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。方法 用重组质粒PcDNA3 1B -S1 3 经滴鼻接种BALB/c小鼠 ,采用ELISA、淋巴细胞转化试验及流式细胞仪等方法检测了其诱导的系统和粘膜免疫反应。结果 免疫小鼠血清IgG及粪便IgA明显增高 (P <0 0 1) ,且IgA增幅较大 ;实验组淋巴细胞增殖反应明显 ,刺激指数 (SI)显著增大 (P <0 0 5 ) ;免疫后CD+ 4 、CD+ 8T细胞均增加 (P <0 0 1) ,而CD+ 4 /CD+ 8T细胞比值无显著变化 (P >0 0 5 )。结论 汉滩病毒重组质粒滴鼻免疫能诱导机体产生了特异的系统免疫和较强的粘膜免疫 ,滴鼻的疫苗免疫途径有着潜在的应用价值。
- 石永兵诸葛洪祥金东华许菊钱峰张学光
- 关键词：汉滩病毒核酸疫苗免疫小鼠
- 汉滩病毒核酸疫苗滴鼻及肌注免疫小鼠效果的比较研究被引量：2
- 2005年
- 观察汉滩病毒DNA疫苗滴鼻及肌注免疫诱导机体产生的免疫应答,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。以pcDNA3.1B-S1.3进行肌肉注射及滴鼻免疫小鼠,采用ELISA、淋巴细胞转化试验及特异性CTL杀伤活性测定等方法检测其诱导的系统和黏膜免疫反应的差异。实验结果表明,滴鼻组粪IgA滴度明显高于肌注组(P<0.05);而肌注组血IgG滴度均值虽高于滴鼻组,但两者统计上无显著意义(P>0.05);滴鼻组及肌注组小鼠脾细胞分别经ConA刺激后,其刺激指数作统计分析,结果无显著性差别(P>0.05);肌注组与滴鼻组效应细胞对靶细胞的杀伤力用方差分析进行比较,无显著性差异(P>0.05)。这些均表明,滴鼻免疫对特异的黏膜免疫激发作用明显优于肌肉注射,疫苗的滴鼻免疫途径较肌注途径有着明显的优势。
- 石永兵金东华诸葛洪祥许菊钱峰张学光
- 关键词：汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫
- 汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫小鼠表达动力学研究被引量：2
- 2004年
- 目的 构建汉滩病毒DNA疫苗 ,考查小鼠鼻内接种DNA疫苗后的基因组织定位及表达动力学 ,为进一步研究汉滩病毒DNA疫苗粘膜免疫的疗效作前期准备。方法 采用PCR法从PJSA1175 S质粒扩增汉滩病毒的S基因片段后装入PcDNA3 1B(- )载体 ,并以此候选DNA疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠 ,在不同时间、不同部位取其组织抽提基因组DNA和组织总RNA ,用PCR及RT PCR检测质粒的分布和表达动力学。结果 构建了汉滩病毒DNA疫苗PcDNA3 1B S1 3 。免疫接种该疫苗第 1天后在小鼠鼻咽、肺、肾、肝、脾、小肠等组织中均有质粒分布 ;第 1周内上述组织中均可检测到特异mRNA ,第 2周起小肠、肝及肾中特异mRNA消失。结论 成功构建了PcD NA3 1B S1 3 DNA疫苗 ,构建的疫苗滴鼻免疫后在小鼠体内得到广泛的分布及表达。
- 石永兵诸葛洪祥金东华许菊钱峰张学光
- 关键词：汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫粘膜免疫HFRS
- 汉滩病毒核酸疫苗滴鼻及皮肤划痕免疫小鼠的比较研究被引量：4
- 2006年
- 目的观察汉滩病毒的DNA疫苗滴鼻及皮肤划痕免疫诱导机体产生的免疫应答,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。方法采用不同剂量50μg、10μg、1μg的裸露质粒pcDNA3.1B-S1,3分别进行滴鼻及皮肤划痕免疫小鼠,采用ELISA方法分别检测血清及粪便中特异性抗体变化,观察其诱导的系统和黏膜免疫反应的差异。结果用汉滩病毒核酸疫苗免疫小鼠,通过表皮划痕方式其诱导体液免疫在50μg剂量时与滴鼻途径相当,在10μg及1μg低剂量时优于滴鼻途径,但在黏膜免疫方面,其明显不如滴鼻途径。结论滴鼻免疫对特异的黏膜免疫激发作用明显优于皮肤划痕,疫苗的滴鼻免疫途径较皮肤划痕有着明显的优势。
- 石永兵金东华诸葛洪祥许菊钱峰张学光
- 关键词：汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫
