宁夏回族自治区自然科学基金(A4004)
- 作品数：4 被引量：30H指数：2
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- 相关机构：宁夏医学院首都医科大学更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骨髓基质细胞的分离培养及转基因标记被引量：3
- 2007年
- 目的采用密度梯度离心法进行骨髓基质细胞(MSCs)的分离培养,结合体外转入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因标记方法,可提供大量纯度高、便于观察的种子细胞。方法取成年SD大鼠四肢骨及胸骨获取骨髓细胞冲洗液,密度梯度离心法分离后培养,HE染色观察细胞核浆比,流式细胞术测定细胞纯度;用逆转录病毒载体转染EGFP标记基因,G418筛选后传代培养,流式细胞术检测EGFP的表达率。结果原代培养的MSCs形态多样,增殖迅速,随着培养时间的延长,细胞增殖变慢,形态趋于同一,以梭形细胞为主,核浆比高;流式细胞术检测发现CD90+/CD45-/CD11b-细胞达到75%,细胞在体外能够稳定地表达EGFP,表达率达到55.16%。结论运用密度梯度离心法分离培养的MSCs纯度高,增殖能力强;体外转入EGFP基因是一种方便、特异性高的标记MSCs的方法,为脑损伤修复研究提供了依据。
- 文玉军秦毅吴均张敏魏灵荣
- 关键词：骨髓基质细胞增强型绿色荧光蛋白流式细胞术
- 骨髓基质细胞的神经分化潜能及其在脑修复中的应用
- 2006年
- 文玉军秦毅徐群渊
- 关键词：多向分化潜能骨髓基质细胞多能干细胞MSCS间充质干细胞
- 骨髓基质细胞在大鼠纹状体出血模型脑内的存活及迁移被引量：1
- 2007年
- 目的观察骨髓基质细胞(MSCs)在大鼠纹状体出血模型脑内的存活及迁移特点,探讨其移植于出血脑内的可能性及适宜条件。方法用密度梯度离心法分离培养成年SD大鼠的MSCs,流式细胞仪检测细胞表面抗原CD11b、CD45和CD90以确定其纯度,细胞大量扩增后用逆转录病毒载体转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记基因。胶原酶加肝素纹状体注射法制备大鼠脑出血模型,行为学检测成功后,将细胞悬液5μL立体定位植入脑出血模型大鼠出血灶周边。不同时间分批灌杀大鼠,取脑作冰冻切片,免疫组织化学法检测移植细胞的EGFP表达。结果流式细胞仪检测发现CD90+/CD45-/CD11b-细胞达到75%。细胞在体外能够稳定地表达EGFP。MSCs在脑出血灶周边至少可存活4周,这些细胞形态多样,主要分布于出血灶周边,并向周围脑实质迁移,大多数细胞定居于血管周围。结论分离培养的MSCs纯度高,增殖能力强,可高效表达EGFP,移植到脑出血灶周边可存活并向周围迁移。
- 文玉军吴均张敏魏灵荣徐群渊秦毅
- 关键词：纹状体骨髓基质细胞存活
- 胶原酶注入小鼠尾状核建立脑出血模型被引量：26
- 2006年
- 目的用脑内注射胶原酶方法建立小鼠脑出血模型。方法在动物脑立体定位仪下将肝素化Ⅶ型胶原酶0．15μL（0．5U/μL）注射到昆明小鼠右侧尾状核内；分别在术后8、12、24、72h对小鼠运动功能进行检测．通过在各时间点测量血肿直径来观察出血高峰的时间，并对出血部位脑组织进行光镜观察来验证模型制作是否成功。结果术后小鼠即表现左侧肢体偏瘫症状，至12～24h症状最重。形态学观察证实右侧尾状核区血肿形成．且出血高峰的时间与肢体偏瘫症状发展过程基本一致。不同个体间血肿体积和部位基本一致。结论应用Ⅶ型胶原酶脑内注射的方法建立的小鼠脑出血模型，是一种方法简单，效果可靠，易于大批量制作的动物模型。
- 许东文玉军张莲香秦毅
- 关键词：脑出血动物胶原酶小鼠
