国家高技术研究发展计划(Z210301)
- 作品数：5 被引量：58H指数：4
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- 牛β-乳球蛋白基因的克隆及其调控外源基因表达的研究
- 2001年
- 目的 制备乳腺生物反应器所必需的乳腺特异性表达的调控序列 ,并验证其指导外源基因表达的能力。方法 用PCR法从奶牛染色体上分 5段扩增出了全长 8 2Kb的牛 β 乳球蛋白基因 ,包括 1 8Kb的 5′侧翼区、1 7Kb的 3′侧翼区及 4 7Kb的gDNA区。扩增出的各片段克隆到T 载体上 ,酶切鉴定及序列分析均证实了所扩增片段的正确性。将五个片段与荧光素酶cDNA拼接成荧光素酶瞬时表达载体并在小鼠乳腺中瞬时表达。结果 注射荧光素酶瞬时表达载体的小鼠乳汁中明显测出了荧光素酶活性。结论 所克隆的牛 β 乳球蛋白基因表达调控序列能够指导外源基因在小鼠乳腺中表达。
- 陈红星程萱杨晓邓继先苏国富黄培堂
- 关键词：乳腺荧光素酶外源基因表达Β-乳球蛋白基因
- 乳腺生物反应器制备中表达载体的发展被引量：17
- 2002年
- 乳腺生物反应器拥有巨大的开发价值 ,但开发成功的例子却寥寥可数 ,主要的原因是外源基因的表达量较低 ,达不到开发生产的要求。提高外源基因表达量的关键在于乳腺生物反应器表达载体的构建。近年来 ,这方面的新思路、新方法不断出现 。
- 陈红星杨晓黄培堂
- 关键词：乳腺生物反应器转基因动物
- 提高制备转基因小鼠效率的研究被引量：32
- 2001年
- 目的 提高制备转基因动物的效率。方法 着重对注射DNA的制备 ,高质量受精卵的获得 ,显微注射及胚胎移植各步骤中的主要影响因素进行了优化。结果 移植后出生的小鼠经PCR及Sonthern Blot检测 ,从最初的 146只仔鼠中检测到 2只阳性鼠 ,提高到由 34只仔鼠中检测到 10只阳性鼠 ,阳性鼠概率由 1 4%基本稳定增加到 30 %。结论 通过技术改良后 ,转基因效率得到明显提高 。
- 程萱陈红星杨晓谭晓红黄培堂
- 关键词：阳性仔鼠移植后转基因小鼠转基因动物受精卵
- BLG-LAtPA和鼠WAP共注射提高LAtPA在转基因小鼠乳腺中的表达水平被引量：5
- 2001年
- 为了提高长效组织纤溶酶原激活剂 (LAtPA)在转基因小鼠乳腺中的表达水平 ,将受控于羊 β 乳球蛋白(BLG)的LAtPA表达载体BLG LAtPA与小鼠乳清酸蛋白 (WAP)基因片段进行共注射 ,采用此方法建立的转基因小鼠 ,经PCR筛选和Southern印迹鉴定 ,获得 3只LAtPA和WAP共整合阳性鼠 ,并在阳性母鼠乳汁中检测到有溶纤活性的LAtPA表达 ,表达水平达到 10 μg/mL。
- 周江邓继先程萱卢一凡杨晓黄培堂
- 关键词：组织纤溶酶原激活剂转基因小鼠乳腺
- 哺乳动物克隆的研究进展与应用前景被引量：5
- 2001年
- 显微注射技术本身固有的缺点在很大程度上限制了转基因动物的研究及应用。近年来 ,体细胞基因打靶和体细胞克隆的最新研究进展表明 ,这两种技术相结合将成为制备大型转基因动物的有效途径。
- 谭晓红杨晓黄培堂
- 关键词：转基因动物基因打靶核移植哺乳动物
