国家自然科学基金(31101426)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 油菜菌核病菌激发子基因SsXYN克隆及表达载体构建
- 2013年
- 以核盘菌菌株NGA4提取的总RNA为模版,利用RT-PCR技术扩增获得SsXYN基因的全长cDNA片段,将其克隆到pMD19-T载体上,菌落PCR、酶切鉴定和cDNA测序结果表明成功克隆了核盘菌SsXYN基因。从pMD19-T:SsXYN载体上,用BamH I和Sal I双酶切切下目的基因片段,将该基因片段连接到原核表达载体pET32a中。菌落PCR和酶切鉴定结果显示成功构建了表达载体pET32a:SsXYN。利用热击法将该重组表达载体导入大肠杆菌BL21,获得携带SsXYN基因的大肠杆菌菌株,为进一步研究激发子诱发植物抗病性机理奠定了基础。
- 蒋冰心吴群高智谋张华建
- 关键词：核盘菌激发子
- 核盘菌激发子基因SsCut克隆、原核表达及纯化被引量：4
- 2014年
- 为开发以病原菌激发子为主要成分的新型生物农药,根据核盘菌的全基因组数据信息,采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术从核盘菌菌株NGA4克隆到编码角质酶基因的全长c DNA序列,在不同条件下进行原核表达,通过Ni2+亲和层析重组蛋白HisSs Cut,并进行激发子活性检测。序列分析表明,克隆的基因编码核盘菌角质酶开放阅读框为609 bp,预测编码202个氨基酸,并将基因命名为Ss Cut(Sclerotinia sclerotiorum cutinase)。含Ss Cut/p ET32a的表达菌株BL21经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,于28、30和37℃均能产生44.3 k D左右的融合蛋白,其中30℃诱导3 h,融合蛋白表达量最高,浸润的烟草出现过敏性坏死反应。经纯化的蛋白His-Ss Cut和细菌His-Harpin分别浸润烟草叶片出现类似的细胞死亡。表明His-Ss Cut具有激发子的活性。
- 吴群赵同瑶唐仕妤高智谋张华建
- 关键词：核盘菌激发子原核表达过敏反应
