新疆维吾尔自治区自然科学基金(2011211A048)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：魏晓丽李明远郭琼吴红红金一帮更多>>
- 相关机构：新疆医科大学新疆医科大学附属中医医院四川大学更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠β-防御素-2对肿瘤细胞SiHa生长的抑制作用及其机制被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨小鼠β-防御素-2（beta defensin 2，BD2）对 SiHa 细胞生长的抑制作用及其机制。方法将pcDNA3．1（＋）/mBD 2、pcDNA3．1（＋）/rmBD 2质粒转染 SiHa 获得的稳定转染细胞 SiHa/M、SiHa/R 裂解，用细胞裂解上清进行 Western blot 检测 mBD2蛋白表达；同时采用细胞活力分析对转染细胞的细胞活力进行测定，采用 AnnexinⅤ、PI 流式细胞分析法和 TUNEL 法检测细胞凋亡情况，并计算细胞凋亡指数。结果 SiHa/M、SiHa/R 组在4～6 Ku 区域出现目标条带；SiHa/M、SiHa/R 组细胞在贴壁后2～3 d 细胞活性明显低于 SiHa 细胞（P ＝0．018），但随着时间推移，细胞活性开始下降，3组细胞的细胞活力差异无统计学意义（P ＝0．374）；SiHa/M、SiHa/R 及 SiHa 组 Annexin Ⅴ＋/PI＋双阳性细胞的百分率分别为2．4％、2．3％、2．3％；Annexin Ⅴ＋/PI-细胞分别为0．9％、1．2％、1．5％，3组差异无统计学意义（P ＝0．743）；SiHa/M、SiHa/R 组凋亡细胞发生率较高，分别达到40．7％、30．2％，而 SiHa 组细胞凋亡率只有7．3％，SiHa/M、SiHa/R 组细胞凋亡率明显高于 SiHa 组，差异有统计学意义（P ＝0．004）；SiHa/M 组凋亡发生率高于 SiHa/R 组，差异有统计学意义（P ＝0．003）。结论 mBD 2能够抑制 SiHa 细胞的生长和诱导细胞凋亡。
- 郭琼吴红红李明远魏晓丽
- 关键词：Β防御素细胞活力流式细胞术凋亡指数
- 小鼠beta防御素2原核表达与抗菌作用的初步研究
- 2012年
- 构建小鼠β-防御素-2(mouse beta defensins 2,mBD2)原核表达质粒pET32/mBD2,进行蛋白诱导表达及纯化,测定并纯化蛋白的抗菌活性。旨在为进一步研究其生物学特性奠定基础。通过腹腔注射脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立小鼠急性时相反应,采用RT-PCR方法扩增mBD2成熟肽,经KpnI和XhoI双酶切后插入相同酶切的pET-32a(+)载体,构建的重组质粒。将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达。通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白。将融合蛋白采用肠激酶酶切、洗脱并用滤纸片法测定目的蛋白的抗菌活性。成功构建了原核表达质粒pET32a(+)/mBD2,并转化工程菌BL21(DE3)。在0.25 mmol/L IPTG、30℃诱导4 h条件下获得的融合蛋白。采用抑菌试验证实蛋白具有一定的抑制革兰阳性菌及阴性菌生长的作用。本研究成功构建了pET32/mBD2原核表达质粒,得到了在大肠杆菌中稳定表达mBD2蛋白。
- 魏晓丽金一帮朱明李亮温浩
- 关键词：原核表达SDS-PAGE抑菌作用
