国家科技支撑计划(2011BAI15B01)
- 作品数：16 被引量：65H指数：6
- 相关作者：贺争鸣岳秉飞冯育芳赵德明杨利峰更多>>
- 相关机构：中国食品药品检定研究院中国农业大学中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：8
- 2013年
- 目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1 pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-3/mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。
- 王吉卫礼付瑞李晓波冯育芳王淑菁岳秉飞贺争鸣
- 关键词：小鼠肝炎病毒反转录聚合酶链式反应长爪沙鼠小鼠
- G亚属猴腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用
- 2012年
- 目的建立G亚属猴腺病毒(simian adenovirus,SAdV)特异的荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。方法根据G亚属SAdV基因保守区,设计特异性引物和TaqMan探针。制备重组质粒pGEM-TEasy-SAdVpol标准品,建立标准曲线。经灵敏度、特异性、准确性和重复性评价后,检测33份猴粪便样本和4批次脊髓灰质炎疫苗。结果建立的FQ-PCR检测方法特异检测G亚属,与A、F亚属无交叉反应,准确性及重复性较好。标准曲线相关系数0.999,线性范围6lg(60～6×106拷贝),最低检出限可达6拷贝/μl。33份猴粪便样本中15份为阳性(45.5%),4批脊髓灰质炎疫苗均为阴性。结论建立的FQ-PCR检测方法可定量检测G亚属SAdV拷贝数,初步应用表明我国实验猴群中G亚属SAdV流行率较高,应加强监测避免人类感染的潜在风险。
- 张荣建贺争鸣
- 关键词：荧光定量PCR
- 多种沙门氏菌分离培养基效果比较及在实验动物和垫料检测中的应用被引量：1
- 2015年
- 目的改进实验动物沙门氏菌分离培养方法,建立垫料中沙门氏菌检测方法。方法参考国内外沙门氏菌检测方法,用不同分离培养基对沙门氏菌、大肠杆菌和变形杆菌进行培养。选用最佳筛选效果培养基对动物肠道和垫料样品进行检测。结果 BPW预增菌、MKTTn选择性增菌转种XLT4培养基分离沙门氏菌的效果优于其他培养基,在1015份动物样品中检测出3份沙门氏菌阳性,能够检测出垫料中1CFU/g的沙门氏菌。结论改进的沙门氏菌分离培养方法检出率高于现有国标方法,结果准确,可用于实验动物沙门氏菌及垫料的检测。
- 邢进冯育芳岳秉飞贺争鸣
- 关键词：沙门氏菌实验动物垫料
- 北京市大鼠、小鼠、豚鼠的病理学调查被引量：2
- 2014年
- 目的实验动物的健康状况对科学研究的发展有重要的影响,为了保证实验用鼠的健康质量,自从2009年起本实验室对北京市多家实验动物单位的实验用鼠进行了病理学抽检,从病理学的角度来调查北京市部分实验鼠的主要脏器的情况。方法我们主要对实验鼠的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠进行取材,通过甲醛固定,石蜡切片HE染色、冰冻切片油红"O"染色、PAS染色等方法对实验用鼠进行病理学分析。结果根据病理学的调查结果,部分实验动物在以肝脏和肾脏为代表的器官中出现了不同程度的病变。结论结合对实验鼠的微生物学检测,分析认为,北京市的啮齿类实验动物中几乎无细菌、病毒和寄生虫等病原微生物的阳性感染个体,对人、动物及周围环境无明显危害;但是少部分实验鼠在临床上出现一定程度的病理学异常。
- 付永瑶吕悦王继宏姚皓赵文杰宋志琦薛志新袁振刘春法彭云李超赵德明杨利峰
- 关键词：病理学诊断脂肪变性PAS染色
- 猴腺病毒(SAdV)PCR检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2012年
- 目的建立SAdV特异的PCR检测方法并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。方法比对分析多株SAdV序列,设计SAdV特异引物,优化PCR实验条件,建立的PCR方法经验证后检测实验猴群和猴源性生物制品,阳性产物测序并构建进化树。结果经特异性和敏感性鉴定,在设计的5对引物中确定一对最佳引物,可以区分SAdV和MAD,ICH,CELO且可以检测到的最小DNA量为47.9 pg/mL。PCR方法检测实验猴群,阳性率49.2%,测序及进化分析表明,SAdV感染型别呈广泛基因多样性。主要分布在G亚属和以SAdV-49为代表的分支。结论经测序验证,PCR检测方法具有很好准确性,初步应用表明我国实验猴群中SAdV高度流行,应加强实验猴群及相关生物制品中SAdV的监测,避免人类感染SAdV的潜在风险。
- 张荣建贺争鸣
- 关键词：PCR
- 应用TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR结合分离培养监测分析灰仓鼠细菌多样性被引量：6
- 2014年
- 目的:监测分析中国灰仓鼠细菌的多样性,收集更多的质量信息,获得更全面的微生物背景知识,为灰仓鼠的种群建立、生物净化和动物模型的建立提供科学的数据依据。方法:60只成年灰仓鼠来自新疆地区,安乐死后剖解采集标本。应用TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规微生物学方法进行细菌多样性研究。结果:本研究采用常规微生物学方法从灰仓鼠中鉴定出179株细菌,包括大肠埃希菌、鲍氏志贺菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、栖冷克吕沃尔菌、嗜肺巴斯德菌、溶血性巴斯德菌、产气巴斯德菌、铜绿假单胞菌、栖稻假单胞菌、门多萨假单胞菌、粪产碱杆菌、阴道加特纳菌、卡它莫拉菌、莫拉克斯氏菌、CDC group EF-4a、特氏纤维单胞菌、戊糖片球菌、金黄色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、腐生葡萄球菌、模仿葡萄球菌、头状葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、鸡葡萄球菌、里昂葡萄球菌、山羊葡萄球菌、粘滑罗斯菌、麻疹孪生球菌、肺炎链球菌、咽峡炎链球菌、血链球菌、牛链球菌Ⅰ型、乳房链球菌、少酸链球菌、无乳链球菌、粪肠球菌、黄肠球菌、浅绿气球菌、解酪蛋白巨大球菌、拥挤棒杆菌、人皮肤棒状杆菌、蜂房芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽胞杆菌。分离培养鉴定出12个科21个属48个种179株细菌,肠杆菌科是主要优势菌群,葡萄球菌科、肠球菌科、假单胞菌科、巴斯德菌科、链球菌科是次优势菌群。应用TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法从灰仓鼠中检出167份核酸阳性标本,包括支原体、泰泽氏菌、空肠弯曲菌、CAR菌、幽门螺杆菌、肝螺杆菌、嗜肺巴斯德菌。TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测结果显示支原体是最主要的优势菌群,泰泽氏菌、空肠弯曲菌、CAR菌、幽门螺杆菌、肝螺杆菌是次优势菌群。结论:TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR结�
- 高正琴邢进冯育芳关伟鸿贺争鸣岳秉飞
- 关键词：灰仓鼠细菌多样性TAQMAN实时荧光定量PCR生化鉴定监测分析
- 周龄和激素水平对长爪沙鼠超数排卵效果的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨不同周龄和激素水平对长爪沙鼠超数排卵效果的影响,以期确定长爪沙鼠最佳超排周龄和激素使用剂量。方法腹腔注射10 IU PMSG/HCG对4～18周龄8个年龄段的雌性长爪沙鼠进行超数排卵,末次注射16～17 h内对各组动物卵母细胞计数,确定最佳超排周龄后,对该年龄动物以5、10、15 IU3个剂量水平腹腔注射PMSG/HCG,观察各组动物的卵母细胞计数差异。结果与其它周龄组相比,6周龄组长爪沙鼠超数排卵后的卵母细胞数最多,各组间有统计学意义(P<0.05),而5、10、15IU等3个剂量组的超排效果也有一定的差异,10 IU组数量最高。结论对长爪沙鼠而言,采用10 IU激素注射和6周龄的动物进行超数排卵,获得的卵母细胞数量最多而且超排效果稳定性。
- 路静朱祥宇王超王迎陈振文杜小燕
- 关键词：长爪沙鼠周龄超数排卵
- 2011年秋季实验用鼠健康状况的病理学调查和分析被引量：6
- 2012年
- 2011年10月本实验室对14家实验动物单位的实验用鼠进行了病理学抽检。主要内容是对实验动物的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠进行取材,通过甲醛固定,石蜡切片HE染色、冰冻切片油红O染色、PAS染色等方法对实验用鼠的健康状况进行鉴定。结果显示,绝大多数实验用鼠为健康状态,而非健康动物主要以肝脏脂肪变性和轻度肺脏病变为主。这可能与饲养环境和饲料有关,通过加强饲养管理可以使这种情况得到改善。
- 王敏刘进林竹潘博王运盛康静静唐娜张嘉嘉胡凤娇杨利峰尹晓敏赵德明周向梅
- 关键词：病理学诊断脂肪变性PAS染色
- 2014年北京地区啮齿类实验动物质量的病理学评价被引量：9
- 2015年
- 目的从病理学角度评价啮齿类实验动物的健康情况,为实验动物标准化饲养提供建议,确保相关科研结果的准确性。方法本文主要对2014年10月北京市15家实验动物单位的啮齿类实验动物病理学抽检情况进行统计分析。采集啮齿类实验动物的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠后经甲醛钙液固定,通过石蜡切片HE染色、PAS染色、冰冻切片油红O染色后于显微镜下观察。结果实验动物总体合格,但个别单位仍然存在问题。检出病变器官主要是肝脏和肺脏,肝脏病变检出率小鼠为6%,大鼠为2.5%,豚鼠为8.2%,地鼠未检出,肝脏病变表现为细胞肿胀,且经特殊染色确证部分为脂肪变性;肺脏病变检出率豚鼠为15.5%,其余未检出,肺脏病变表现为淤血、渗出及间质性肺炎。结论实验动物病理学检测基本健康,肝脏出现损伤可能与饲料有关;而肺脏病变可能与垫料及空气有关,而秋冬季雾霾及低温可能对实验动物健康有所影响。
- 李超董浩迪徐琳凯王春雨宋志琦刘春法李超斯岳瑞超程广宇赵化佳赵德明尹晓敏周向梅杨利峰
- 关键词：病理学诊断PAS染色
- 实验动物皮肤病原真菌多重PCR检测方法的建立与初步应用被引量：3
- 2015年
- 目的建立石膏样毛癣菌(Tm)、石膏样小孢子菌(Mg)、犬小孢子菌(Mc)和猴类毛癣菌(Am)的多重PCR检测方法,用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S-28S rRNA序列设计特异性引物,通过引物、d NTP、Taq DNA聚合酶浓度及退火温度和时间的优化,建立四种皮肤病原真菌的多重PCR体系。经特异性和敏感性检验后,对15份人工感染真菌大鼠毛和260份实验动物毛发样本进行检测。结果所建多重PCR方法能够有效区分四种皮肤病原真菌,产生192 bp(Tm)、460 bp(Mg)、290 bp(Mc)和602 bp(As)的目的片段,最低检测限分别为5.9 pg/μL、6.6 pg/μL、9.5 pg/μL和5.1 pg/μL。被检的15份人工感染样本扩增结果准确,260份毛发样本中未检测出四种真菌。结论所建立的多重PCR方法能够同时对实验动物中的四种皮肤病原真菌进行快速的检测,具有较高的应用价值。
- 邢进冯育芳岳秉飞贺争鸣
- 关键词：多重PCR实验动物
