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抗菌肽天蚕素B突变体ABP-S1基因在E.coli中的融合表达被引量：5: 2002年; 利用绿色荧光蛋白 (GFP)基因与天蚕素 B突变体 ABP- S1基因的融合基因 ,构建了 2个原核表达载体 p Am GS1和 p Bm GS1,转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)和 E.coli BL 2 1(DE3) p L ys S。结果 ,p Am GS1未能得到转化子 ,而p Bm GS1的转化子高效表达了融合蛋白 ,经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE检查 ,融合表达产物最高可占菌体总蛋白的49.45 %。表达产物经包涵体复性 ,柱层析初步纯化 ,通过平板抑菌试验 ,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌以及鱼类重要的致病菌嗜水气单胞菌等多种革兰氏阳性。; 卢强刘维全赵凤芹刘明远江禹殷震; 关键词：抗菌肽绿色荧光蛋白抗菌活性天蚕素B 突变体 E.COLI

家蝇早期胚胎转基因前后的表达差异: 2006年; 以转基因处理的家蝇卵为对象,采用银染差异显示技术(DD-PCR),对携带绿色荧光蛋白(GFP)和抗菌肽(ABP)融合基因的真核表达质粒以电转移的方式进入家蝇受精卵后,卵内基因的表达情况做了初步研究。结果表明,转基因处理的蝇卵与未经转基因处理的蝇卵在分化开始之前基因的表达存在差异;以T11MA为锚定引物,在转基因处理组发现6条差异表达的片段,成功地克隆得到其中3条。序列分析证实其中2条为新基因片段,另1条为家蝇细胞色素C的编码片段;斑点杂交证实了新基因片段仅在转基因处理组得到表达,而细胞色素C在2组中都有表达。获得的新基因片段登录于GenBank,登录号分别为AY030235和AY030236。本试验结果为解释外源基因在宿主细胞内的去向,发现宿主内部对目的基因整合和分解的相关因素提供了可能,并为系统地开展发育相关研究打下了基础。; 江禹万忠海江露王莉莉王吉贵涂长春刘维全; 关键词：家蝇转基因基因表达

人胰岛素基因在家蝇幼虫中的表达: 2006年; 构建了家蝇基因组文库,通过噬菌斑原位杂交技术从家蝇基因组文库中筛选出mdYP1克隆,并从mdYP1克隆中分离到含约1.7 kb 5’-上游区的家蝇卵黄蛋白-1基因组基因序列.PCR扩增出大小不同的4个启动子片段,分别插入到切除了CMV启动子的pCMV-GFP质粒中的绿色荧光蛋白报告基因上游,构建pMYP1-GFP,pMYP2-GFP,pMYP3-GFP和pMYP4-GFP 4个重组质粒,经电转移试验和荧光检测表明,P2(+684/+7),P3(+1165/+7)和P4(+1616/+7)3个启动子片段具有转录活性.将P2,P3分别插入到切除了CMV启动子的pCMV-ImINS重组质粒中的人胰岛素基因上游,构建pMYP2-ImINS和pMYP3-ImINS重组质粒,电转移新鲜家蝇卵,放射免疫分析法检测人胰岛素在蝇蛆中的表达水平.pMYP2-ImINS和pMYP3-ImINS组的人胰岛素表达量分别为29.6,22.1mU.L-1;阳性对照组为13.2 mU.L-1;阴性对照组为8.8 mU.L-1.结果说明P2启动子片段活性最强,同时又证明了内源性启动子能提高外源基因的表达效率.; 夏平安刘维全崔保安张红英; 关键词：家蝇启动子克隆人胰岛素

家蝇卵黄蛋白基因启动子区的克隆与活性分析被引量：7: 2004年; 从家蝇基因组文库中分离到含约 1 7kb 5′上游区的家蝇卵黄蛋白 1基因组基因序列 ,根据其 5′上游序列 ,PCR扩增出大小不同的 4个启动子片段 ,分别插入到切除了CMV启动子的 pCMV GFP质粒中的绿色荧光蛋白报告基因上游 ,构建了 pMYP1 GFP、pMYP2 GFP、pMYP3 GFP和 pMYP4 GFP 4个重组质粒。另将 +6 84 /+7、+116 5 /+7这两个启动子片段用SpeⅠ和HindⅢ双酶切 ,去除包含CAAT/TATA盒的 +30 2 /+7序列区后 ,分别构建了pMYP5 GFP和 pMYP6 GFP两个重组质粒。通过电转移实验和荧光检测表明 ,+6 84 /+7、+116 5 /+7、+16 16 /+7这 3个启动子片段具有转录活性 ,而 +6 84 /+7启动子片段的转录活性最强 ,+2 96 /+7、+6 84 /+30 2、+116 5 /+30 2这 3个启动子片段无转录活性。上述实验结果表明 ,+30 2 /+7序列区为启动子的核心部分 ,+30 2到 +16 16之间存在调控性启动子或增强子等其他一些顺式元件。细胞转染实验证实 ,6种启动子片段在BHK-2 1和Sf9细胞中都未表现出可检测的转录活性 ,说明家蝇卵黄蛋白基因启动子具有组织或细胞特异性。; 夏平安刘维全江禹孙绍光杨淑艳王吉贵; 关键词：家蝇卵黄蛋白基因克隆绿色荧光蛋白

抗菌肽的研究进展被引量：17: 2004年; 抗菌肽又称抗微生物肽(antimicrobial peptide)或肽抗生素(peptide antibiotics),在动植物体内分布广泛,是天然免疫防御系统的一部分。抗菌肽不仅有广谱抗细菌能力,而且对真菌、病毒及癌细胞也有作用。对抗菌肽作用机理的研究是近来的热点之一,本文综述了此方面近来的进展,并对微生物针对抗菌肽的耐药性进行了讨论。; 李聪燕安俞利凤刘维全; 关键词：抗菌肽抗微生物肽耐受性分子结构

抗菌肽Shiva-1基因的人工合成与克隆被引量：9: 2000年; 参照抗菌肽 Shiva-1的氨基酸序列 ,兼顾鱼类、昆虫和大肠杆菌偏爱的密码子 ,设计了 Shiva-1基因序列 ,加上适宜基因工程操作的酶切位点 ,人工合成了 2条分别为 92 bp和 91 bp的寡聚核苷酸片段。经互补链延伸反应、Eco RI酶切 ,将完整的 Shiva-1基因反向克隆至 p UC1 8载体 ,经 PCR检测和序列分析证明 ,已正确克隆了抗菌肽; 卢强刘维全江禹王吉贵杨振国王宏伟房金波殷震; 关键词：抗菌肽基因克隆

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国家自然科学基金(39870552)