国家高技术研究发展计划(2006AA06Z402)
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 相关作者：鲁卫平顾大勇周元国刘乐何永红更多>>
- 相关机构：清华大学第三军医大学大坪医院深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学机械工程更多>>
- 纳米金新型基因芯片检测系统结合限制性酶切非PCR法同时检测多种病原性微生物的研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究将纳米金新型基因芯片检测系统与限制性酶切非PCR法结合以实现同时对多种病原性微生物进行检测的方法。方法以幽门螺杆菌、肺炎支原体、沙眼衣原体、白色念珠菌、解脲脲原体、EB病毒作为检测目标,选择HhaⅠ内切酶作为工具酶。对所有待检样本核酸进行HhaⅠ酶切,对酶切产物进行同聚A加尾处理,并结合纳米金新型芯片检测系统,分别与特异性探针及通用探针进行两次杂交以完成对目标微生物的检测。通过对168份临床样品的检测,考察新构建芯片的检测结果与荧光定量PCR检测结果的符合率;对构建芯片的稳定性及检测灵敏度进行测试。结果新构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术实现了对选定目标的检测。对168份临床样品的检测结果显示,该芯片检测与荧光定量PCR检测的结果有150例完全相符,符合率为89.2%;进一步芯片检测性能实验结果表明,该芯片检测稳定性为100%,检测敏感性为50pmol/L。结论本研究构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术可以同时实现对细菌、真菌、支原体、衣原体及病毒等微生物的检测,适用性广且对大幅度提高检测通量有积极意义。
- 梁冰顾大勇鲁卫平王华周元国
- 关键词：纳米金寡核苷酸序列分析病原微生物
- 基于表面等离子共振扫描成像的DNA芯片的研究被引量：3
- 2010年
- 基于表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术的检测方法是一种灵敏度极高的光学检测方法,用于基因芯片的检测时具有高灵敏、免标记、无污染等优点,是一种很有发展潜力的芯片检测方法。将酵母Y5基因的特异性片段5′端修饰巯基后作为探针,利用单分子层自组装法把探针固定在金膜表面,应用列扫描表面等离子共振成像检测系统研究和分析DNA芯片上探针点阵的杂交信息,从而建立一套基于列扫描表面等离子共振检测系统的DNA芯片的制备和检测分析技术。实验结果表明:37℃条件下探针的最佳固定时间为5～7h,杂交特异性良好,杂交的最佳时间为5～30min。探针浓度低于0.5μmol/L时,杂交效率高而且SPR信号变化明显,探针浓度达到20μmol/L时SPR响应达到最大。
- 张崇文马绥华刘乐种心原杨汝德张广何永红
- 关键词：DNA芯片表面等离子共振杂交
- 纳米金基因芯片结合通用引物1次PCR法同时检测多个病原菌的研究被引量：7
- 2008年
- 目的基于基因分型技术构建通用引物1次PCR法的样品制备技术,并结合纳米金基因芯片检测系统实现1次对多个病原菌的检测分析。方法针对rDNA保守序列设计通用引物,实现1次PCR完成对各靶细菌ISR序列的扩增;设计针对各靶细菌的特异探针,构建纳米金新型基因芯片,并用芯片进行实际检测。结果设计的通用引物可实现对12种待检靶细菌的正确扩增;选用的各探针特异性强、可靠性好;芯片具有较好的灵敏度、特异性及可靠性;检测敏感性达到50 fmol/L;临床检测显示本方法准确可靠。结论与多重PCR样品制备法芯片比较,本芯片检测的步骤和复杂性大为减低,且有较好的检测性能,可用于各靶病原菌的检测。
- 顾大勇鲁卫平王华周元国
- 关键词：纳米金基因芯片病原菌16S-23S
- 潜艇舱室密闭环境中微生物检测的基因芯片技术的研究进展被引量：1
- 2008年
- 为了探索研究用于潜艇舱室大气环境中致病微生物的在线检测技术理论,结合目前国际先进的基因芯片技术,设计利用肽核酸作为探针来进行在线检测;理论证明,肽核酸探针与DNA探针相比,其杂交的稳定性和特异性增加,且能在低盐浓度下进行杂交,因此它能够大大提高微生物学检测和医疗诊断的效率和灵敏度。PNA独特的生化属性已逐渐为世人所瞩目,PNA探针技术也得到了迅速发展,尤其是其在微生物检测领域中的应用,在结合潜艇舱室密闭环境的主要特点和舱室内致病微生物的来源和危害的基础上,发展以肽核酸为探针的基因芯片技术。
- 赵欣李震顾大勇王为宗
- 关键词：表面等离子体共振肽核酸
- 使用并行扫描光谱SPR成像方法检测DNA微阵列
- ＜正＞表面等离子体共振（SPR）技术是一种高灵敏、无需标记的光学检测技术,在生物、化学检测领域有着广泛的应用。微阵列（microarrays）也叫做生物芯片（biochip）技术
- 刘乐何永红马辉郭继华
- 关键词：SPR微阵列生物芯片
- 文献传递
- 表面等离子体共振芯片检测系统快速检测淋病奈瑟氏菌的研究
- 2007年
- 目的应用表面等离子体共振(SPR)芯片检测系统进行淋病奈瑟氏菌的快速检测。方法制备淋病奈瑟氏菌的SPR响应型基因芯片,并对最适的探针自组装时间,探针浓度,以及SPR检测的灵敏度,特异性等指标进行测定;对临床样品进行实际检测并与临床常规方法比较。结果当固定探针浓度为1500nM,自组装时间为4.5h时,构建的芯片具有较好的SPR检测效率,能够准确识别碱基的错配,其检测灵敏度大约为10fM;临床检测结果与常规经典鉴定方法相比结果一致。结论本芯片检测系统具有良好的检测性能,检测方法准确可靠。
- 顾大勇石磊禹华伟梁冰鲁卫平周元国徐云庆史蕾张雅鸥
- 关键词：表面等离子体共振基因芯片淋病奈瑟氏菌
- 线扫描准共焦荧光成像被引量：1
- 2010年
- 为了克服目前生物芯片荧光检测方法中诸如系统结构复杂、检测速度慢、灵敏度低、成本高等缺点,提出了一种新型生物芯片荧光检测方法——线扫描准共焦荧光成像法,并搭建了初步原理性装置。用线扫描代替共聚焦中的点扫描,将二维扫描变为一维扫描,在保持高灵敏度的同时,增加了探测速度,简化了系统,降低了成本。为了验证方法的可行性,使用搭建的原理性装置对手工点样的低密度DNA生物芯片进行了荧光成像检测。实验结果显示,系统的空间分辨率<18μm,在使用像素平均法降噪后,测量浓度为0.03μmol/l的探针溶液所得信噪比为5.5×102。这项技术综合了面成像检测方法的低成本、结构简单的优势和点共焦方法具有的高分辨率的优点,适合在实验室中对生物芯片进行检测研究。
- 杨彬刘乐刘智毅马绥华种心原何永红
- 关键词：线扫描生物芯片微阵列
- 基于表面等离子体共振检测原理的基因芯片的构建被引量：3
- 2008年
- 我们首先采用Frens法制备纳米金胶体液,然后以氯金酸/羟胺法铺制二维纳米金单膜层,进行单分子自组装层技术(Self-assembled monolayer,SAM)固定探针,从而制备出具有表面等离子体共振(Surface plasmon reso-nance,SPR)响应的基因检测芯片,并进一步对芯片的自组装时间、探针浓度、灵敏度、特异性等指标进行优化验证。结果表明2.5 nm胶体金所铺金膜芯片具有较好的SPR响应特性,且当固定探针浓度为1 500 nmol/L,自组装时间为4.5 h时,可以获得较好的SPR检测效率,能够准确识别碱基的错配,其检测灵敏度大约为10 fmol/L,可应用于SPR传感器的检测中。
- 顾大勇石磊禹华伟王华鲁卫平梁冰周元国张雅鸥
- 关键词：表面等离子体共振基因芯片
- 一种新型光谱表面等离子体共振二维探测方法在DNA微阵列中的应用被引量：2
- 2010年
- 在此前曾提出过一种新型二维折射率探测方法——并行扫描光谱表面等离子体共振(surface plasmonresonance,SPR)成像方法。在这种方法中,使用线形光照明,CCD得到的图像包含SPR光谱信息和一维空间信息,进而通过计算可得到折射率的一维分布信息。通过一维扫描,就能够得到整个被扫描区域内的折射率二维分布信息。该方法具有高灵敏、高通量的优点,适合微阵列(microarray)的检测,并完善了这种方法的数据处理过程,使用空气折射率作为参考,消除了无法精确控制入射角的难题。使用该方法对手工点制的军团菌mip DNA探针微阵列进行了检测,证明了这种方法高灵敏无标记地探测微阵列的可行性。我们得到的军团菌mip DNA探针制备浓度与其等效折射率的关系,这对基于SPR的微阵列技术的发展有着重要的参考意义。
- 刘乐何永红马绥华鲁卫平赵欣张雅鸥郭继华
- 关键词：SPR光谱微阵列生物芯片
- 纳米金基因芯片表面原子排列构象的形貌研究
- 2009年
- 我们利用基于扫描隧道显微镜的原子力显微镜对纳米金基因芯片在不同检测阶段表面原子排列构象的变化状况进行扫描研究。结果显示芯片片基(醛基玻片)表面原子呈现规律的多孔状排列;结合探针后,多孔状的规律排列改变,呈现参差不齐;与目标核酸杂交后,表面原子又呈现出相对规整的、密集交叉平行的条索状排列。但银染后导致表面原子出现较大的高突起的聚团块状结构,排列严重的参差不齐。从这些结果我们可以直观地感知到芯片表面探针结合、核酸杂交、银染显色的过程和差异,也可以从微观层面上对相关的实验进行验证。
- 顾大勇梁冰禹华伟鲁卫平周元国张雅鸥
- 关键词：纳米金基因芯片原子力显微镜扫描隧道显微镜
