国家自然科学基金(81260398)
- 作品数：12 被引量：48H指数：4
- 相关作者：徐林陈超李永菊秦娜琳胡燕更多>>
- 相关机构：遵义医学院苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”贵州省国际科技合作计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-sponge的构建及其表达活性研究被引量：6
- 2014年
- 目的构建靶向miR-126的真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-海绵体(sponge),并探讨其下调miR-126的表达对肝癌HepG2细胞体外生长的影响,为后续深入研究miR-126在肝癌发生中的作用提供前期实验基础。方法合成miR-126-sponge,构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体,体外瞬时转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察EGFP的表达情况;Real-time PCR检测细胞中miR-126的表达水平;MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖变化;划痕实验观察细胞的体外迁移能力改变。结果成功构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体(命名为p-miR-126-sp);Real-time PCR结果显示,与对照组(p-Cont)相比,p-miR-126-sp组中miR-126表达水平显著降低(P<0.05);MTT检测发现,p-miR-126-sp组中细胞增殖数目明显减少(P<0.05);此外,p-miR-126-sp组的克隆形成数和细胞迁移数均明显减少(P<0.05)。结论 miR-126-sponge可显著下调miR-126的表达水平进而抑制肝癌细胞HepG2的体外增殖及迁移能力。
- 胡燕廖珍媛李永菊陈超朱顺飞熊思东徐林
- 关键词：肝癌HEPG2细胞细胞增殖
- miRNA-126真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用被引量：4
- 2013年
- 目的:构建miRNA-126的重组真核表达载体,研究其对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和迁移的影响。方法:设计合成miRNA-126的正义和反义寡核苷酸,构建真核表达载体pcDNA6.2-miR-126,体外瞬时转染至4T1细胞,荧光显微镜下观测转染效率。Real-time PCR检测4T1细胞中miRNA-126的表达,MTT法和克隆形成实验检测4T1细胞的增殖和克隆形成能力,划痕法观察4T1细胞的体外迁移。结果:成功构建pcDNA6.2-miR-126真核表达载体,其可在4T1细胞中有效表达miR-126。与转染空质粒组(pcDNA6.2-Ctrl)相比,瞬时转染72 h后,pcDNA6.2-miR-126转染组4T1细胞的体外增殖能力受到明显抑制[(0.30±0.03)vs(0.51±0.04),P<0.05];瞬时转染48 h后,pcDNA6.2-miR-126组4T1细胞迁移能力也受到明显抑制[(8.17±2.30)vs(28.33±2.16)个,P<0.05]。结论:miRNA-126过表达可抑制乳腺癌4T1细胞的增殖及迁移。
- 廖珍媛秦娜琳李永菊陈超田丹罗军敏徐林
- 关键词：MIR-126真核表达乳腺癌增殖迁移
- 微小RNA-7过表达对人肺癌细胞体内外转移的影响被引量：4
- 2013年
- 目的探讨过表达miR-7对人肺癌细胞体内外转移的影响。方法将真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(命名为p-miR-7)体外瞬时转染人肺癌95D细胞后,划痕法检测细胞的体外迁移情况;侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;建立人肺癌裸鼠体内转移模型,HE染色观察过表达miR-7对肺部肿瘤转移的影响;免疫荧光技术检测肿瘤转移相关蛋白Sema4C蛋白的表达。结果过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体外迁移和侵袭能力(P<0.05);与对照组相比,过表达miR-7组未观察到明显的肺部肿瘤细胞转移灶(P<0.05);免疫荧光结果显示,过表达miR-7组中,肿瘤细胞内Sema4C蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-7可以显著抑制人肺癌细胞体外及体内的转移能力,提示miR-7有望成为肺癌后续基因治疗的新靶点。
- 朱顺飞廖珍媛胡燕陈超李永菊刘思静罗军敏熊思东徐林
- 关键词：肺癌生物治疗
- 微小RNA-21与肿瘤关系的研究进展被引量：3
- 2015年
- 已有资料显示,一群长度为22~24个核甘酸（nucleotide,nt）的内源性、短小非编码RNA—微小RNA（micro RNA,mi RNA,mi R）,不仅广泛存在于多种生物体中,而且参与包括肿瘤在内的多种疾病的发生过程。近年来的研究发现,mi RNAs家族成员mi R-21与肺癌、胃癌和宫颈癌等多种肿瘤的发生、生长、转移以及预后等密切相关,推测其可作为多种肿瘤临床诊治的新靶标。本文就mi R-21与这些肿瘤的发生关系、调控机制以及诊断和治疗等相关的研究进展作一综述。
- 徐华林赵娟娟郑文卢佳雷良玉陶弋婧郭萌萌罗军敏徐林
- 关键词：肿瘤微RNAMI
- CCR6与免疫细胞关联性研究进展被引量：1
- 2014年
- 趋化因子受体6(chemokine receptor 6,CCR6)是趋化因子受体CCR亚家族成员之一,可表达在单核细胞、树突状细胞、T细胞、B细胞等多种免疫细胞上。新近研究显示,CCR6在免疫细胞介导的炎症反应、移植排斥反应以及肿瘤免疫逃逸等中发挥了重要作用。本文就其相关研究进展做一综述。
- 李永菊胡燕朱顺飞陈超秦娜琳郑静罗军敏徐林
- 关键词：CCR6CCL20免疫细胞
- 微RNA-7与肿瘤关系的研究进展被引量：3
- 2014年
- 目前,肿瘤的发病率逐年增加,且严重危害人类健康,然而其发生和发展机制仍未阐明。新近研究发现,一类长度约22个核苷酸的内源性非编码RNA分子——微RNA(microRNA,miRNA)在肿瘤的发生和发展过程中具有重要调控作用。微RNA-7(microRNA-7,miR-7)是miRNAs家族的重要成员之一。现有的研究显示,miR-7与包括乳腺癌和肺癌在内多种肿瘤的发生、生长、转移以及预后等密切相关,推测其可作为肿瘤临床诊治的新靶标。本文就miR-7与肿瘤的相关研究进展进行综述。
- 赵娟娟陶弋婧郭萌萌秦娜琳郑静田丹徐林
- 关键词：肿瘤微RNAS
- TTF-1启动子调控microRNA-7真核表达载体的构建被引量：2
- 2014年
- 目的构建甲状腺转录因子(TTF-1)启动子调控miR-7表达的真核表达载体,并观察其表达miR-7对人肺癌细胞体外生长的影响。方法抽提人肺癌95D细胞基因组DNA,PCR分别扩增TTF-1启动子序列(promoter)和miR-7前体序列,纯化产物分别经Kpn I/Mul I双酶切和Mul I/HindⅢ双酶切,克隆入PGL3-basic-载体,构建pGL3-basic-TTF-1-promoter-miR-7真核表达载体(命名为p-T-miR-7);将p-T-miR-7真核载体体外瞬时转染人肺癌95D细胞,Real-time PCR探针法检测细胞中miR-7的表达水平;CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖情况;划痕实验检测转染后细胞的体外迁移情况。结果经酶切和测序鉴定成功构建TTF-1启动子调控的miR-7真核表达载体p-T-miR-7;转染后72 h,与对照相比,p-T-miR-7转染组中miR-7的表达水平增加约2.5倍(P<0.05);CCK-8实验和克隆形成实验显示,p-T-miR-7转染组中95D细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);划痕实验进一步显示,细胞的体外迁移能力也显著削弱(P<0.05)。结论成功构建TTF-1启动子调控的miR-7真核表达载体,这为后续肺癌基因治疗策略开发提供重要前期实验基础。
- 陈超赵娟娟胡艳郭萌萌陶弋婧周涯秦娜琳郑静徐林
- 关键词：肺癌甲状腺转录因子真核表达
- 过表达microRNA-7对人肺癌95D细胞凋亡的影响被引量：3
- 2015年
- 目的探讨过表达micro RNA-7对人肺癌95D细胞体内外凋亡的作用。方法将mi R-7真核表达载体(命名为p-mi R-7)体外瞬时转染人肺癌95D细胞,利用TUNEL法观察95D细胞凋亡的变化;免疫荧光技术检测各组细胞磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白的表达;建立人肺癌裸鼠模型,肿瘤局部注射p-mi R-7后利用TUNEL法检测肿瘤局部细胞凋亡变化,同时,免疫组织化学法检测凋亡相关的磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白的表达变化。结果体外转染p-mi R-7后可导致人肺癌细胞的凋亡(P<0.05)。同时,细胞中磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白水平显著增加(P<0.05);肿瘤局部注射p-mi R-7后,肿瘤局部mi R-7表达水平及细胞凋亡也明显增强(P<0.05),磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白水平也显著增加。结论过表达mi R-7可以导致肿瘤细胞凋亡,这与凋亡相关蛋白Caspase3和Caspase9磷酸化水平增加有关。
- 陈超廖珍媛李颖李永菊罗军敏徐林
- 关键词：肺癌细胞凋亡
- MicroRNA-7基因敲减小鼠模型的鉴定被引量：10
- 2014年
- 目的鉴定miR-7基因敲减小鼠模型,为进一步研究miR-7的生物学功能奠定基础。方法常规剪取7只miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)小鼠的脚趾和尾巴,分别用来提取基因组DNA和总RNA;剪取1只WT(wild-type,WT)小鼠的尾巴,提取其总RNA;将提取的两组小鼠的总RNA逆转录成c DNA;分别以基因组DNA和c DNA为模板,用特异性引物PCR技术扩增目的基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)片段;提取WT和miR-7KD小鼠7个不同组织器官的总RNA,利用Real-time PCR探针法检测各组织器官中miR-7成熟体的表达水平;HE染色观察miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠的形态学结构改变。结果 PCR结果显示,模型小鼠的脚趾基因组DNA和尾巴c DNA中均能扩增出载体目的基因EGFP片段;Real-time PCR结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肝脏和脾脏等组织器官miR-7成熟体的表达水平较WT小鼠均显著下调(P<0.05);HE染色结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠形态学结构发生了明显的病理性改变。结论成功鉴定了miR-7基因敲减小鼠模型,为后续深入探讨该分子的生物学功能提供重要实验基础。
- 朱顺飞李永菊陈超胡燕赵娟娟郭萌萌陶弋婧秦娜琳徐林
- 过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长被引量：16
- 2014年
- 目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P<0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P<0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P<0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P<0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。
- 胡燕廖珍媛陈超秦娜琳郑静田丹李永菊朱顺飞罗军敏徐林
- 关键词：肺癌细胞生长
