河南省科技攻关计划(72102310104)
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
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- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省卫生厅医学科技攻关计划项目郑州市科技攻关计划项目更多>>
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- 核干细胞因子基因siRNA表达载体的构建及鉴定被引量：7
- 2008年
- 目的构建针对核干细胞因子(NS)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体。方法根据GenBank提供的NS基因AY825265mRNA序列及siRNA设计原则设计siRNA,筛选得到126-144nt,199-217nt和487-505nt3个19bp片段为靶序列;合成带有BamHI、XhoI酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆至载体pRNAT-U6.1中构建重组表达载体;转化DH5α,提取质粒,应用PCR技术和测序方法鉴定重组克隆。转染入食管癌EC9706细胞,检测NS基因沉默情况。结果PCR筛选得到3个目的片段的阳性重组克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR和Westernblot检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低EC9706细胞中NSmRNA和蛋白水平的表达。结论成功构建出一组针对NS基因的siRNA表达载体,为下一步NS基因的RNA干扰研究鉴定了基础。
- 张功员赵国强尹磊张钦宪
- 关键词：核干细胞因子RNA干扰基因克隆EC9706
- 沉默EC9706细胞NS基因对裸鼠移植瘤组织中EGF、EGFR基因表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的建立裸鼠食管癌移植瘤模型,探讨由RNAi诱导的EC9706细胞核干细胞因子(nucleostemin,NS)基因沉默对裸鼠移植瘤组织中EGF、EGFR基因表达的影响。方法裸鼠15只,采用STATA 8.0编制随机化分组程序,均分为3组,分别皮下注入pRNAT-U6.1-siNS2转染的EC9706细胞(siRNA干预组),pRNAT-U6.1-siC转染的EC9706细胞(无关siRNA对照组)以及正常EC9706细胞(空白对照组),接种5周,观察移植瘤生长情况,应用免疫组织化学方法和原位杂交技术检测裸鼠移植瘤组织中NS、EGF、EGFR基因蛋白和mRNA的表达。结果无关siRNA对照组及空白对照组第4天于接种部位出现肉眼可见的肿块,siRNA干预组于第6天在相应部位发现肉眼可见肿块,第5周各组裸鼠成瘤率均为100%。siRNA干预组、无关siRNA对照组及空白对照组裸鼠移植瘤组织中NS、EGF、EGFR蛋白和mRNA的阳性表达率比较差异显著(P<0.05)。相对于无关siRNA对照组和空白对照组,siRNA干预组裸鼠肿瘤组织中NS蛋白及mRNA的阳性表达率均降低。结论 EC9706细胞沉默NS基因可降低裸鼠体内EGF、EGFR基因的表达。
- 张功员关文池李晟磊张巧吴卫东
- 关键词：EC9706细胞裸鼠核干细胞因子
- 沉默EC9706核干细胞因子基因对裸鼠移植瘤生长的作用
- 2011年
- 目的:观察由RNAi诱导的EC9706核干细胞因子(NS)基因沉默对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠15只,分为3组,siRNA干预组皮下注入pRNAT-U6.1-siNS2转染的EC9706细胞,无关siRNA对照组皮下注入pRNAT-U6.1-siC转染的EC9706细胞,空白对照组皮下注入正常EC9706细胞,接种5周分别测定各组裸鼠移植瘤体积,并应用RT-PCR技术检测裸鼠移植瘤组织中Ns mRNA的表达。结果:无关siRNA对照组及空白对照组于第4天在接种部位出现肉眼可见的肿块,siRNA干预组于第6天在接种部位发现肉眼可见肿块。第5周各组裸鼠成瘤率均为100%。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组瘤体大小分别为(1806.40±77.75)mm^3、(1702.20+88.60)mm^3和(847.00±82.25)mm^3,3组相比差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组移植瘤组织中NS mRNA的表达量分别为0.681±0.033、0.685±0.034和0.497±0.056,3组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默EC9706细胞的NS基因可抑制裸鼠移植瘤生长,降低裸鼠体内NS mRNA的表达。沉默NS基因有可能成为治疗食管癌的新策略。
- 关文池张功员李晟磊赵国强张巧吴卫东
- 关键词：EC9706细胞核干细胞因子裸鼠
