国家自然科学基金(30900915) 作品数:11 被引量:33 H指数:4 相关作者: 陈观水 潘大仁 周以飞 林生 艾育芳 更多>> 相关机构: 福建农林大学 漳州职业技术学院 江西中医药大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 福建省自然科学基金 福建省教育厅资助项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
鲤鱼源嗜水气单胞菌FAH5分离鉴定及其对寄主感染的解剖病理学研究 被引量:2 2017年 【目的】对具有典型溶血性病征的染病鲤鱼进行病原菌分离纯化鉴定,并研究其对寄主感染的解剖病理学特征。【方法】采用营养琼脂平板划线方法从染病鲤鱼肝脏样本中分离得到病原菌菌株FAH5,使用VITEK-32全自动细菌分析仪进行其生理生化特性探讨,初步鉴定为嗜水气单胞菌。然后,采用嗜水气单胞菌FAH5人工感染健康鲤鱼,并通过解剖分析其器官病变情况。【结果】感染嗜水气单胞菌FAH5后,鲤鱼体表粘液增加,分泌物增多,鳍部和腹部泛红,鳃部出现腐烂现象,并充血发黑。解剖后腹腔和内脏有出血点,肝脏,肾脏,脾脏等器官病理变化以血液循环障碍,血管扩张为主,严重感染时这些器官有充血、出血和溶血现象,活性细胞经感染病变至弥散性坏死。【结论】有溶血性病征的染病鲤鱼分离纯化得到了嗜水气单胞菌FAH5,人工感染健康鲤鱼后出现相同症状,解剖病理学特征为腹腔和内脏有出血点,肝脏,肾脏,脾脏等器官病变以血液循环障碍,血管扩张为主。 余文杰 陈观水关键词:鲤鱼 嗜水气单胞菌 甘薯IbNPR1全长cDNA序列的分离与表达特性分析(英文) 被引量:5 2009年 在植物系统获得性抗性(SAR)中,NPR1蛋白是水杨酸介导的基因表达中关键调控因子。本研究以青农2号为试验材料,利用同源序列法和RACE技术分离甘薯SAR途径的主要抗病信号元件NPR1(none expresser of PR gene)的全长cDNA序列。序列分析表明,IbNPR1基因全长2353bp,包含一个编码586个氨基酸残基的开放阅读框,包含有类似拟南芥NPR1蛋白中的BTB/POZ和锚蛋白重复氨基酸序列结构域。聚类分析显示IbNPR1与来源于番茄的NPR1蛋白关系最近。Southern杂交及半定量RT-PCR分析表明,甘薯NPR1基因属于低拷贝基因家族,表达模式为组成型表达,并且SA能提高其表达水平。由该结果推测,IbNPR1可能在甘薯抵御病原物的侵染中起重要的作用。 陈观水 周以飞 林生 张铮 潘大仁关键词:甘薯 抗病 CDNA末端快速扩增技术 红龙鱼源β-溶血性嗜水气单胞菌AH的分离及其对机体铁代谢的影响 2018年 对具有典型败血症病症的染病红龙鱼进行病原菌分离鉴定分析。从其肝脏中分离得到病原菌菌株AH,经VITEK-32全自动细菌分析仪鉴定为嗜水气单胞菌。通过多重PCR检测确认该嗜水气单胞菌AH属于β-溶血性嗜水气单胞菌,含有气溶素基因(aer A)和溶血素基因(ahh1)。此外研究嗜水气单胞菌AH侵染红龙鱼后对其机体铁代谢的影响,通过腹腔注射嗜水气单胞菌AH,在侵染后不同时间点收集红龙鱼的血液和肝脏组织,分别采用分光光度计法和电感耦合等离子体原子发射光谱(inductively coupled plasma-atomic emission specrometry,简称ICP-AES)法检测红龙鱼血清和肝脏中的铁含量,同时采用实时荧光定量PCR法对铁调素基因(hepc)、白细胞介素基因(il-6)、JAK/STAT信号通路的蛋白质酪氨酸激酶3基因(jak3)、信号转导子和转录激活因子3基因(stat3)表达量进行检测。结果表明,侵染嗜水气单胞菌AH后,红龙鱼血清中铁浓度明显降低,在24、48h时显著低于对照组,总铁结合力有所上升,但没有达到显著水平;肝脏中铁含量相对于对照组差异没有达到显著水平,但仍有明显升高。肝脏中hepc基因的表达量在一定时间范围内显著上升;il-6、jak3和stat3基因表达量开始均有所上调,随后有所下降,但在各时间点的表达量均高于对照。由结果可知,机体通过调节铁调素基因(hepc)等铁相关基因的表达,进而降低自身游离铁含量,并增加储存铁含量来应对细菌的侵染。 余文杰 陈观水关键词:嗜水气单胞菌 IL-6基因 铁代谢 甘薯等7种植物NPR1基因的生物信息学分析 被引量:4 2011年 水杨酸介导的植物系统获得性抗性的正向关键调控基因NPR1功能上在许多植物中极其保守。本研究利用生物信息学相关软件对以甘薯NPR1基因为主要分析对象的7个NPR1基因的核苷酸序列及其相应氨基酸序列的组成成分、氨基酸翻译后修饰、导肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二、三级结构以及功能结构域等进行分析。结果表明:该类基因属于不具信号肽的疏水性蛋白,α-螺旋和无规则卷曲是蛋白质二级结构最大量的结构元件,β-转角和延伸链散布于整个蛋白质中,具有BTB/POZ和ANK功能结构域。这一结果可为植物NPR1的结构与功能分析及利用研究提供进一步的信息与参考。 陈观水 余文杰 阮孝麟 施桂姣 潘大仁关键词:NPR1基因 生物信息学 Gibberella fujikuroi侵染果蔗叶片病程相关蛋白编码基因的表达分析 被引量:1 2012年 利用实时荧光定量RT-PCR,用梢腐病病原菌(Gibberella fujikuroi)侵染不同果蔗品种叶片,对病程相关蛋白编码基因SoSOD、SoCHIT、SoPOD与SoTPS6P的转录水平进行了分析。结果表明,果蔗的SoSOD、SoCHIT、SoPOD与SoTPS6P受到梢腐病病原菌的诱导表达,丰城紫皮、白鳝、福安与拔地拉果蔗叶片中它们的表达量较高,而在温岭、宁德与歪干担叶片中的表达量较低。这说明这些病程相关蛋白编码基因表达水平与不同果蔗品种的梢腐病抗病性存在一定的关联。 林生 周明明 陈婷 陈观水 周以飞 潘大仁关键词:果蔗 GIBBERELLA 病程相关蛋白 QRT-PCR 甘薯IbNPR1基因表达载体的构建及转化烟草 被引量:6 2009年 为了研究甘薯NPR1基因在转基因植物广谱抗病中的应用,利用前期克隆的甘薯NPR1基因,以pCAMBIA1300质粒为基本载体,构建了由组成型CaMV35S启动子驱动IbNPR1基因的植物表达载体pCAMBIA1300+IbNPR1;然后,采用冻融法转入农杆菌EHA105菌株,通过叶盘法对烟草进行了遗传转化。经PCR检测,IbNPR1基因已整合到烟草基因组中。 陈观水 张铮 周以飞 林生 郭友国 潘大仁关键词:NPR1基因 植物表达载体 烟草 鲢鱼感染嗜水气单胞菌FAH5后免疫因子的变化研究 2022年 为研究鲢鱼受到嗜水气单胞菌FAH5感染后机体免疫因子的变化过程,在健康鲢鱼体内注射嗜水气单胞菌FAH5,感染后12~108 h收集鲢鱼的血液和肝脏,使用分光光度计测定血液铁浓度和载体蛋白浓度,使用ICP-AES测定肝脏铁浓度,使用实时荧光定量PCR测定铁调素基因hepc20、白细胞介素基因il-1、酪氨酸激酶基因jak1、应激因子基因stat1的表达量。结果表明,健康鲢鱼受到嗜水气单胞菌FAH5感染不同时间后,鲢鱼血液铁浓度出现不同程度的降低,其中24和36 h时与对照组比较,达到显著差异;血液载铁蛋白浓度与对照组比较,出现不同程度上升,但均未达到显著差异;肝脏铁浓度与对照组比较,出现不同程度上升,但均未达到显著差异。肝脏中hepc20铁调素基因的表达量在12和24 h时与对照组比较上升,达到显著差异;肝脏中il-1白细胞介素基因的表达量在24和36 h时与对照组比较上升,达到显著差异;肝脏中酪氨酸激酶jak1基因的表达量在12和24 h时与对照组比较上升,达到显著差异;肝脏中stat1应激因子基因的表达量在12和24 h时与对照组比较上升,达到显著差异。因此,鲢鱼机体通过调节铁调素基因hepc20、白细胞介素基因il-1、酪氨酸激酶基因jak1、应激因子基因stat1等免疫基因的表达的变化,降低机体游离铁浓度和增加储存铁浓度来应对嗜水气单胞菌FAH5的感染。 余文杰 谢建华关键词:鲢鱼 免疫因子 基因表达 三浅裂野牵牛ItSGT1基因克隆及分析(英文) 2013年 SGT1(suppressor of the G2allele of skp1)是多种植物抗病基因介导的抗病信号途径中的重要元件。该研究利用RT-PCR和RACE方法克隆出甘薯近缘野生种三浅裂野牵牛的SGT1基因,命名为ItSGT1。该基因含有一个长度为1 087bp的开放阅读框,编码361个氨基酸,分子量约为40.1kD,等电点为5.05。Blast及多序列比对分析表明,该基因与其他植物中的SGT1具有较高的相似性,且具有SGTl蛋白典型的功能域结构,即TPR区、VR1区、CS区、VR2区和SGS区。Southern杂交结果显示,SGT1基因在三浅裂野牵牛基因组中是多拷贝基因。组织特异性表达分析表明,ItSGT1基因在三浅裂野牵牛的根、茎和叶中均有表达。 陈观水 柏洁 夏咛 周以飞 潘大仁关键词:抗病基因 RT-PCR 干旱胁迫对巨菌草幼苗水分状况和渗透调节物质的影响 被引量:5 2015年 为明确巨菌草幼苗对干旱胁迫的适应性,在盆栽控水条件下,对巨菌草幼苗的水分状况和渗透调节进行了干旱胁迫响应研究。结果表明,干旱胁迫后土壤含水量呈下降趋势,且各期间(胁迫4~5 d除外)差异显著(P〈0.05)。干旱胁迫过程中巨菌草幼苗的含水量、相对含水量和水势均呈下降的趋势,可溶性蛋白含量呈现先升高后降低趋势,而游离氨基酸和脯氨酸含量则表现显著上升趋势。这些指标反映出巨菌草幼苗对干旱环境的适应性变化,是其抵御逆境的一种积极调节机制。 艾育芳 陈观水 钟陈菲 柯玉琴关键词:干旱胁迫 水分状况 渗透调节物质 太子参鲨烯环氧酶基因的克隆及其表达分析 被引量:4 2017年 目的对太子参三萜类皂苷生物合成关键调控酶鲨烯环氧酶1(SQE1)基因进行全长c DNA克隆和功能分析。方法基于其他植物SQE基因的同源序列设计简并引物,以太子参块根总RNA为模板,RT-PCR结合RACE技术克隆太子参SQE1基因的全长c DNA,并进行生物信息学分析。利用农杆菌叶盘转化法将SQE1基因转化烟草,研究其对烟草总三萜量的影响。结果获得太子参SQE1基因全长c DNA序列2 038 bp,该序列包含1 554 bp的开放阅读框,编码517个氨基酸,相对分子质量为5.67×104,等电点为8.8,与其他药用植物的SQE蛋白具有较高的同源性,含有FAD结合结构域和4个跨膜区域,转太子参SQE1基因的烟草的总三萜量明显高于非转基因植株。结论首次克隆获得太子参SQE1基因的全长c DNA,该基因的异源表达可一定程度提高转基因植物的总三萜量,为阐明与应用太子参三萜类成分生物合成途径提供科学依据。 陈观水 林思妮 柯兰兰 苏彤彤 朱婧 徐阳 潘大仁关键词:太子参 三萜皂苷 转基因烟草 异源表达