国家自然科学基金(40376047) 作品数:9 被引量:83 H指数:5 相关作者: 陈松林 孟亮 张玉喜 杨绒 李伟 更多>> 相关机构: 中国水产科学研究院黄海水产研究所 中国海洋大学 长江大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
巴氏毕赤酵母表达系统的特点及其研究进展 被引量:38 2004年 巴氏毕赤酵母表达系统具有真核生物表达的特点。本文综述了巴氏毕赤酵母菌及其表达载体的特点以及外源基因在该系统中表达存在的一些问题。 隋少飞 陈松林关键词:巴氏毕赤酵母 外源蛋白 大菱鲆免疫球蛋白轻链IgL全长cDNA的分离、鉴定及表达分析 被引量:2 2010年 实验采用末端快速扩增(RACE)技术从大菱鲆脾脏cDNA文库中筛选得到了免疫球蛋白轻链IgL的全长cD-NA片段。该序列包含47 bp的5′末端非编码区(5′UTR),738 bp的开放阅读框(ORF)和202 bp 3′UTR,整个开放阅读框编码246个氨基酸。系统发生分析表明大菱鲆IgL基因与五条鰤的IgL基因起源关系最近。RT-PCR分析表明,大菱鲆IgL基因只在正常脾脏、肾脏和头肾组织中表达;IgL在大菱鲆胚胎发育细胞期就已开始表达,在大菱鲆胚胎尾芽期和体节期表达持续增强;在鳗弧菌感染大菱鲆脾脏和头肾早期均检测到IgL基因强烈表达,后期表达逐渐减弱;大菱鲆胚胎细胞(TEC)在用鳗弧菌感染48h后,IgL开始表达。这些结果均表明IgL基因在大菱鲆免疫应答中起着重要作用。 王贤丽 张玉喜 孟亮 陈松林关键词:大菱鲆 IGL CDNA RT-PCR 水产动物抗菌肽的研究进展 被引量:15 2005年 抗菌肽广泛分布于多种生物,具有分子量小、耐热、广谱抗菌等特性。它在杀菌过程中不易产生耐药性,使其具有潜在的医药价值。本文综述了水产动物抗菌肽的结构特征、生物学活性、抗菌机制、目前克隆的基因的结构与功能,以及在免疫防御中的表达等一系列问题。 杨绒 陈松林关键词:动物抗菌肽 生物学活性 广谱抗菌 医药价值 抗菌机制 免疫防御 脊椎动物父系基因组主动去甲基化研究进展 被引量:1 2013年 基因组表观遗传重组出现在细胞发育潜能发生变化的时期。早期植入前胚胎的表观遗传重新编程对于细胞分化和胚胎的生长发育是至关重要的,这涉及到表观遗传印记(尤其是DNA甲基化)的消除和重建过程。脊椎动物许多物种中,DNA复制起始前父系基因组通常要经历主动去甲基化,而母系基因组则可以保持甲基化的状态不变,直到在随后的卵裂过程中被动去甲基化。综述了脊椎动物父系基因组主动去甲基化的机制,这种去甲基化在脊椎动物各物种间的差异,以及影响这种主动去甲基化机制的因素。另外,研究外源基因表达的表观调控机制(尤其是表观遗传重编程的异常现象)有利于理解转基因克隆水产动物中普遍存在的授精成功率较低,基因整合率较低,以及胚胎发育异常等现象,有利于更好地应用转基因克隆技术。 孙冰 谢明树 陈松林 赵文关键词:DNA甲基化 脊椎动物 大菱鲆hepcidin抗菌肽基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达 被引量:7 2007年 通过同源克隆结合RACE的方法从大菱鲆(Scophthal mus maximus)肝脏中克隆了大菱鲆hepcidin抗菌肽基因全长cDNA(GenBank accession number AY994074)。大菱鲆hepcidin基因cDNA全长778bp,包含有1个273bp的开放阅读框,编码1个长90氨基酸的前体肽。将大菱鲆hepcidin抗菌肽基因的成熟肽序列重组至原核表达载体pGEX-4T-1中,用IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳显示在29ku处有特异性蛋白条带出现,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,融合蛋白约占总蛋白的26%。Western-blotting分析发现表达的融合蛋白可以特异性地与GST抗体相识别。这些结果表明大菱鲆hepcidin抗菌肽基因成功实现了原核表达。 李伟 陈松林 赵晓杰关键词:HEPCIDIN 抗菌肽 牙鲆抗菌肽hepcidin基因在成鱼组织和不同发育时期胚胎中的表达分析 被引量:6 2006年 抗菌肽hepcidin是由hepcidin基因编码产生的小分子多肽,是机体天然免疫的重要因子。本文利用RT-PCR的方法分析表明,抗菌肽hepcidin基因在牙鲆成鱼不同组织和不同发育时期胚胎中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异。 杨绒 陈松林 李伟 王志坚关键词:牙鲆 RT-PCR 大菱鲆(Scophthalmus maximus)一种CXC趋化因子的克隆及其表达特征 被引量:5 2007年 从大菱鲆脾脏cDNA文库中筛选到一种CXC趋化因子。它的全长cDNA含有一个81bp的5’UTR,一个414bp的开放阅读框和一个449bp的3’UTR。开放阅读框编码了137个氨基酸残基。经过PCR扩增发现,该CXC趋化因子基因内含有4个外显子和3个内含子。RT-PCR分析表明,大菱鲆CXC趋化因子在正常脾脏和头肾中表达强烈;在胚胎的不同发育时期,大菱鲆CXC趋化因子从体节期开始才有微弱的表达。大菱鲆胚胎细胞(TEC)在用鳗弧菌感染后6h也有强烈的表达。这些结果表明该CXC趋化因子在大菱鲆免疫应答中起着重要作用。 刘洋 陈松林 孟亮 张玉喜关键词:CXC 趋化因子 CDNA 大菱鲆抗菌肽基因酵母表达载体的构建及表达 被引量:4 2008年 将大菱鲆(Scophthalmus maxinus)hepcidin基因成熟肽序列经过部分改造后采用PCR方法克隆到毕赤酵母胞内表达载体pGAPZB中,构建了重组胞内表达载体pGAPZB-tbhep6his。用BlnI线性化重组质粒后,电击转化毕赤酵母SMD1168。经过Zeocin筛选和PCR扩增转化子基因组筛选,得到了数株基因工程酵母菌。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,发现目的蛋白与预期蛋白的分子量相吻合,并能与特异抗体antihis特异性结合,表明大菱鲆抗菌肽hepcidin基因在酵母菌中进行了表达。大菱鲆抗菌肽酵母表达载体的构建和表达为进一步研究该抗菌肽的功能并开发新型鱼类饵料奠定了理论基础。 李伟 陈松林关键词:酵母 海水养殖鱼类免疫相关功能基因的克隆及其在鱼类抗病育种中的应用潜力 病害是限制水产养殖业可持续发展的关键因子。目前我国缺乏优良抗病养殖鱼类品种。基因转移、分子标记和基因标记等分子育种技术是培育抗病优良鱼类新品种的很有潜力的技术手段,已成为国际上的发展趋势。鱼类功能基因组技术的发展为筛选鱼... 陈松林 徐美瑜 张玉喜 李伟 刘洋 孟亮文献传递 大菱鲆T淋巴细胞酪氨酸激酶(LCK)基因全长cDNA的克隆及表达分析 被引量:7 2009年 本研究采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)从大菱鲆(Scophthalmus maximus)脾脏cDNA文库中克隆得到T淋巴细胞酪氨酸激酶(LCK)全长cDNA序列。该序列包含193bp的5′末端非编码区(5′UTR),1506bp的开放阅读框(ORF)和300bp3′UTR,整个开放阅读框编码502个氨基酸。系统发生分析表明,大菱鲆LCK基因与红鳍东方鲀(Fugu rubripes)和黑青斑河鲀(Tetraodon nigroviridis)的亲缘关系最近。在大菱鲆正常组织、胚胎细胞(TEC)和鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染的免疫器官组织中对LCK基因进行了RT-PCR表达分析。结果表明,大菱鲆LCK基因只在正常脾脏组织中表达;在用鳗弧菌感染12h后,大菱鲆胚胎细胞LCK基因表达增强;在鳗弧菌感染的大菱鲆免疫组织中,只在脾脏中检测到LCK基因表达,鳗弧菌感染48h后,LCK基因在脾脏中表达最强。这些结果表明,LCK基因在大菱鲆脾脏免疫应答中起着重要作用。 王贤丽 张玉喜 孟亮 陈松林关键词:CDNA RT-PCR