国家自然科学基金(39870382)
- 作品数：16 被引量：71H指数：5
- 相关作者：朴英杰陈英彭心昭乔东访陈练波更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学南方医科大学中国人民解放军第四二一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 长春新碱诱导肝癌细胞自噬性凋亡过程中泛素与bcl-2的变化被引量：5
- 2005年
- 目的探讨长春新碱(VCR)诱导HepG2肝癌细胞自噬性凋亡过程中泛素表达的变化及阻断泛素蛋白酶体通路对此凋亡和bcl2表达的影响。方法应用VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡,采用流式细胞仪检测凋亡及泛素的表达;以RTPCR检测bcl2的表达。结果VCR处理后发生自噬性凋亡的HepG2细胞中泛素含量增加(P<0.01)。加用蛋白酶体特异抑制剂乳胞素后的乳胞素+VCR组凋亡率明显比单用VCR组高(P<0.01),而bcl2表达则比单用VCR组更低。结论泛素蛋白酶体通路参与了VCR诱导的HepG2细胞自噬性凋亡及对bcl2蛋白的调控。对蛋白酶体功能的抑制可以促进VCR诱导的HepG2细胞凋亡。
- 彭心昭朴英杰
- 关键词：长春新碱肝癌细胞凋亡BCL-2
- 地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中[Ca^(2+)]i的变化被引量：6
- 2001年
- 目的 研究地塞米松诱导凋亡小鼠腹腔巨噬细胞 [Ca2 + ]i的变化及其对凋亡的影响以及信使分子对凋亡和 [Ca2 + ]i变化的影响。方法 激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记术。结果 1 凋亡巨噬细胞内fluo 3荧光强度逐渐增强。胞内钙库受体抑制剂 ,尤其是Ca2 + 内流阻断剂抑制细胞内fluo 3荧光强度变化 ,同时使细胞凋亡率降低 ;2 .staurosporine和DcAMP显著降低巨噬细胞凋亡率并明显抑制fluo 3荧光强度改变。genistein和亚甲蓝稍降低巨噬细胞凋亡率 ,并降低fluo 3荧光强度升高幅度。结论 1 胞外Ca2 + 内流和内源性Ca2 + 释放 ,主要是胞外Ca2 + 内流使[Ca2 + ]i逐渐升高并促进巨噬细胞凋亡 ;2 .PKC促进 [Ca2 + ]i升高和巨噬细胞凋亡。cAMP抑制[Ca2 + ]i升高和巨噬细胞凋亡。cGMP、TPK降低 [Ca2 + ]i升高幅度并稍抑制巨噬细胞凋亡。结果提示 ,[Ca2 + ]i是信使分子调控巨噬细胞凋亡的主要靶点。
- 黄行许朴英杰张飒乔东访马晓东鲍永耀
- 关键词：[CA^2+]I腹腔巨噬细胞
- 受体介导内吞和自噬同凋亡的关系被引量：1
- 2003年
- 目的观察刀豆素A(ConA)与小鼠腹腔巨噬细胞表面ConA受体结合、内吞、转运及巨噬细胞自噬、凋亡的形态学变化,以探讨受体介导内吞与自噬体形成和细胞凋亡之间的关系。方法用辣根过氧化物酶(HRP)标记ConA(ConA-HRP)与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,不同时间取出部分巨噬细胞,制备电镜标本,观察。结果透射电镜观察表明:ConA的内吞属于受体介导内吞;形成的内吞体有泡状、管状及双层膜的线状等形式;双层膜的线状结构包裹部分胞质和细胞器,形成自噬体;自噬体与溶酶体融合,而后巨噬细胞凋亡。结论受体介导内吞和自噬同凋亡之间存在一定的关系。
- 何才姑朴英杰胡莲美
- 关键词：自噬细胞凋亡巨噬细胞刀豆素A小鼠
- 人自噬基因APG5及一个新亚型APG5β的克隆
- 2001年
- 目的克隆APG5基因并在真核细胞中进行表达,从分子水平研究自噬与凋亡之间的关系。方法应用PCR技术,从人胚脑cDNA文库和B细胞cDNA文库中钓取APG5基因,连接到pEGFP-C1载体,测序确定核苷酸序列并进行生物信息学分析。利用脂质体lipofectin将带有目的基因的载体转入人肝细胞株和Hela细胞株。在共聚焦激光显微镜下观察融合蛋白表达。结果成功地钓取APG5及一个新亚型APG5β基因片段,两者连入pEGFP-C1载体并在Hela细胞株中获得表达。在共聚焦激光显微镜下观察到两者在凋亡细胞中表达。在凋亡诱导刺激下,随着凋亡的提前出现,融合蛋白表达的时间也提前。结论成功克隆APG5/APG5β基因,首次证实并报道一个新亚型APG5β,并在GenBank核酸序列数据库中登录(AF293841)。对两者功能进行了初步研究,为进一步研究自噬与凋亡之间的关系和可变性剪切的调节机制提供了有益的线索。
- 陈英彭心昭朴英杰
- 关键词：自噬基因凋亡生物信息学基因表达
- 自噬的抑制影响长春新碱诱导的肝癌细胞自噬性凋亡被引量：19
- 2004年
- 目的 研究自噬特异性抑制剂 3 甲基腺嘌呤 (3 methyladenine ,3MA)对长春新碱 (vincristine,VCR)诱导的肝癌细胞系HepG2细胞自噬性凋亡的影响。 方法 利用已建立的VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡之模型 ,采用monodansylcadaverin(MDC)染色及流式细胞术荧光强度测定方法对自噬进行定量研究 ,采用流式细胞术及DNA电泳检测细胞凋亡。结果 3MA可以特异性地阻止自噬泡形成 ,还可以部分地抑制HepG2细胞自噬性凋亡。 结论 自噬是VCR诱导的HepG2细胞自噬性凋亡所必需的。
- 彭心昭陈英朴英杰
- 关键词：长春新碱肝癌细胞自噬性凋亡自吞噬作用
- 长春新碱诱导的自噬性凋亡与细胞内游离Ca^(2+)浓度的相关性研究被引量：3
- 2000年
- 目的 研究长春新碱 (VCR)诱导的L 0 2细胞自噬性凋亡时细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 +]i)的变化 ,以及自噬特异性抑制剂 3 methyladenine(3MA)对此自噬性凋亡和 [Ca2 +]i的影响。方法 应用已建立的VCR诱导L 0 2细胞自噬性凋亡模型 ,使用电镜、流式细胞术检测细胞凋亡 ;用Fluo 3/AM荧光探针经流式细胞仪测定L 0 2细胞平均 [Ca2 +]i。结果 电镜及流式细胞术检测证实VCR诱导L 0 2细胞发生了自噬性凋亡 ,此凋亡过程中 [Ca2 +]i明显升高 ,以凋亡早期更为明显 :3MA可显著抑制VCR所致的 [Ca2 +]i升高并能降低凋亡细胞比例。结论 在体外条件下VCR可以诱导L 0 2细胞自噬性凋亡 ,其发生可能与VCR导致 [Ca2 +]i升高有关 ;3MA可能通过抑制 [Ca2 +]i升高而抑制自噬及VCR所致的自噬性凋亡。
- 彭心昭陈英乔东坊张淑春陈练波朴英杰
- 关键词：长春新碱CA^2+浓度凋亡自噬
- 小鼠腹腔巨噬细胞凋亡时线粒体的改变及其调控被引量：3
- 2001年
- 目的 研究小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中线粒体和磷酸烟酰胺腺嘌呤 (NADPH)氧化酶活性的变化以及信使分子对线粒体膜电位、细胞内活性氧 (reactive oxygen species,ROS)和凋亡的影响。 方法 激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记技术等。 结果 1.地塞米松诱导巨噬细胞快速凋亡 ;2 .线粒体膜电位快速去极化 ,NADPH氧化酶活性剧降 ,ROS快速减少 ,ROS清除剂促进凋亡 ;3.蛋白激酶 C(protein kinase C,PKC)促进凋亡、ROS急剧减少、线粒体膜去极化 ;环腺苷酸 (c AMP)抑制凋亡、ROS急剧减少、线粒体膜去极化 ;环鸟苷酸(c GMP)、酪氨酸蛋白激酶 (TPK)略抑制凋亡 ,不影响 ROS变化 ,但影响线粒体膜去极化。 结论 1.地塞米松处理使线粒体内 NADPH氧化酶活性剧降 ,生成 ROS迅速减少从而促进巨噬细胞凋亡 ;2 .信使分子影响线粒体生成ROS的变化以及线粒体膜去极化从而影响巨噬细胞凋亡。提示线粒体变化 ,尤其是 ROS和膜电位的变化影响巨噬细胞凋亡。
- 黄行许乔东访马晓冬鲍永耀朴英杰
- 关键词：线粒体活性氧膜电位凋亡细胞小鼠
- ROS对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响被引量：8
- 2000年
- 目的探讨 ROS影响巨噬细胞凋亡的机制。方法激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记技术等。结果 1凋亡巨噬细胞内 NADPH氧化酶活性急剧降低使得胞内 ROS水平快速下降 ;2 ROS清除剂促进地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡 ;3PKC促进巨噬细胞凋亡和 ROS急剧减少 ;c AMP抑制巨噬细胞凋亡和 ROS急剧减少。结论 1ROS抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡 ;2 PKC、c AMP等因素通过影响地塞米松介导巨噬细胞凋亡时发生的 ROS变化促进或抑制巨噬细胞凋亡。由此可见 ,ROS作为一种巨噬细胞的信使分子和效应分子 ,一方面抑制巨噬细胞自身凋亡 。
- 黄行许陈练波马晓冬乔东访鲍永耀朴英杰
- 关键词：ROS巨噬细胞细胞凋亡小鼠
- 基因芯片检测自噬与凋亡的基因表达谱改变被引量：3
- 2004年
- 目的:利用基因芯片研究自噬与凋亡关系,阐明两者间的分子调控机制。方法:采用4096条人类基因的cDNA芯片检测3-MA自噬抑制剂在诱导凋亡的人肝细胞株LO2基因表达谱的改变,以探讨在自噬被抑制的情况下,凋亡的发生及其相关基因的变化。结果:LO2细胞株cisplain凋亡诱导16小时的实验模型中,实验组在诱导凋亡前加入3-MA自噬抑制剂,诱导前后对照组与实验组相比,差异表达基因共151条。其中上调基因74条;下调基因77条。APG5基因无变化。结论:用基因表达芯片对3-MA自噬抑制剂在凋亡诱导的LO2细胞株基因表达谱的改变进行高通量分析,能够有效地观察出凋亡基因及相关基因的表达。自噬被抑制的状态下,凋亡相关基因同样表达,说明3-MA自噬抑制剂并不能阻止凋亡的发生。
- 陈英朴英杰
- 关键词：基因表达谱芯片凋亡自噬
- 不同组分HHK扫描电镜观察被引量：3
- 2000年
- 目的：观察Ｆ、Ｂ、Ｚ三种不同的ＨＨＫ表面及断面结构，确立不同降解速度ＨＨＫ的形态学指标，阐明其在自体腱形成过程中的形态机理，以更好地为临床服务。材料与方法：人发经过不同生化方法处理，制备混合编制快速（Ｆ）、中速（Ｂ）、慢速（Ｚ）三种不同降解速度的ＨＨＫ人工腱在扫描电镜下观察。结果：发现Ｆ组毛小皮大部分脱落，皮质中微丝束融合或消失；Ｚ组毛小皮少部分脱落，皮质中微丝束排列略紊乱，而 Ｂ组的改变介于前两者之间。结论：不同组分的 ＨＨＫ形态改变具有各自特点，为其成功应用于临床奠定基础，临床实验证明，ＨＨＫ最终被降解而被胶原纤维代替并形成自体腱。
- 陈英彭心昭周志涛朴英杰
- 关键词：扫描电镜人工腱
