浙江省自然科学基金(Y2090545)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- P27kip1及相关分子Jab1在大鼠损伤脊髓中的表达变化及意义
- 2014年
- 目的:观察大鼠脊髓损伤过程中P27kip1及相关分子Jab1在脊髓中的表达及细胞定位情况,探讨其在脊髓损伤后胶质细胞增生及胶质瘢痕生成中的作用。方法:取56只雄性SD大鼠,随机分为实验组与对照组,其中实验组按脊髓损伤时间分为6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d组,实验组按照Allen′s法制作SD大鼠脊髓损伤模型,对照组则仅打开椎板,不损伤脊髓。首先利用Western Blot观察P27kip1及相关分子Jab1在脊髓损伤后的表达水平变化,然后利用免疫组化观察脊髓损伤后3d时的P27kip1及5d时Jab1的阳性细胞表达变化,最后利用免疫荧光双标观察脊髓损伤后5d时Jab1的细胞定位变化。结果:Western Blot结果显示P27kip1在脊髓损伤后6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d组的相对灰度值分别是1.00±0.10、0.82±0.05、0.27±0.03、0.34±0.03、0.25±0.02、0.28±0.03、0.57±0.05,其中1d、3d、5d、7d、14d组与对照组(0.98±0.08)相比均明显降低(P<0.05),而Jab1的6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d组的相对灰度值分别是0.58±0.08、0.53±0.04、0.89±0.11、1.06±0.24、1.22±0.26、0.85±0.16、0.25±0.03,其中6h、12h、1d、3d、5d、7d组与对照组(0.19±0.04)相比明显升高(P<0.05),P27kip1于脊髓损伤后表达下降,Jab1在脊髓损伤后表达上升。3d时实验组P27kip1免疫组化阳性细胞数为130.8±29.8个,与对照组(406.8±56.6个)相比减少(P<0.05);5d时实验组Jab1免疫组化阳性细胞数为383.5±68.8个,与对照组(123.5±42.6个)相比增多(P<0.05),从形态学上进一步证明了这种变化。在免疫荧光双标实验中,5d时实验组Jab1与GFAP双阳性细胞数量为383.3±39.1个,较对照组(114.3±35.6个)明显增多(P<0.05)。结论:在大鼠脊髓损伤中,Jab1与P27kip1存在相互作用,Jab1参与脊髓损伤后P27kip1的降解,这可能与脊髓损伤后星形胶质细胞的过度增殖及胶质瘢痕的生成相关。
- 黄克伦滕红林黄卡特戴宇森陈毕黄智慧陈必成
- 关键词：P27KIP1JAB1胶质瘢痕
- p27kip1和Skp2在大鼠脊髓损伤过程中的表达变化及意义被引量：1
- 2014年
- 目的观察脊髓损伤后p27kip1和skp2蛋白表达及其意义。方法改良Allen’S法制作脊髓损伤模型，通过Westernblot测定损伤后各时间段p27kip1和Skp2蛋白水平表达变化，免疫组织化学、免疫荧光双标，免疫共沉淀检测p27kip1和skp2细胞定位。结果Westernblot结果显示脊髓损伤后，p27kip1显著地下调，Skp2上调，时间上二者的表达存在负相关。免疫组织化学和免疫荧光显示，空间上p27kip1和Skp2主要定位在广泛增殖的星形胶质细胞上。免疫共沉淀结果显示p27kip1和skp2在脊髓中存在直接相互作用，且在损伤3d后作用加强。结论脊髓损伤后Skp2参与介导的p27kip1表达下调，这与调节脊髓损伤后星形胶质细胞的增殖相关。
- 张双伟黄克伦陈毕滕红林王靖朱曼宇
- 关键词：脊髓损伤星形胶质细胞
- 脊髓损伤过程中β-1,4半乳糖基转移酶的表达研究
- 2010年
- 目的 探讨β-1,4半乳糖基转移酶（β-1,4-GalT）在横断性脊髓损伤后的时空表达变化以及细胞定位情况.方法 将42只成年SD大鼠随机分为假手术组和T9横断伤8 h、1 d、3 d、5 d、7 d、14 d组,每组6只.采用实时定量PCR测定损伤后各时间段β-1,4-GalT在脊髓中的表达变化;采用原位杂交与免疫荧光标记方法检测β-1,4-GalT在脊髓中的分布以及伤后的定位改变.结果 脊髓横断损伤后,β-1,4-GalT-Ⅴ在损伤上、下段表达高峰分别出现在损伤后8 h和1 d,之后逐渐下降,至伤后14 d降低至假手术组水平.增高的mRNA主要分布于损伤周围的细胞中及脊髓后角浅层的感觉神经元中.荧光原位杂交结果显示,β-1,4-GalT-Ⅴ主要分布于巨噬细胞和小胶质细胞以及病理状态下的少突胶质细胞.同时β-1,4-GalT-Ⅴ mRNA在损伤后大量表达于富含P物质和IB-4的脊髓后角浅层的感觉神经元中.结论 脊髓损伤后β-1,4-GalT在基因和细胞水平呈现明显的时空变化,并且与巨噬细胞和小胶质细胞以及病理状态下的少突胶质细胞存在共定位.该酶可能参与了损伤后的继发性损伤,即伤后早期的炎性反应,并可能与脊髓损伤后的神经病理性疼痛有关.
- 赵剑滕红林牛淑琼张烽严美娟沈爱国
- 关键词：脊髓损伤聚合酶链反应
