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国家重点基础研究发展计划(2002CB512904): 作品数：51 被引量：153H指数：7; 相关作者：庄志雄卫秦芝李习艺黄海燕杨晓华更多>>; 相关机构：深圳市疾病预防控制中心中山大学广东医学院更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学哲学宗教更多>>

L-02肝细胞蛋白质双向电泳条件的建立被引量：1: 2006年; 黄海燕刘建军庄志雄李习艺卫秦芝杨晓华杨建平; 关键词：L-02肝细胞蛋白质组双向电泳

三氯乙烯诱发L-02肝细胞毒的双向电泳分析及质谱鉴定被引量：13: 2005年; 目的分析三氯乙烯对L02肝细胞蛋白质表达的影响。方法利用噻唑蓝比色法和锥虫蓝拒染法,确定三氯乙烯的剂量反应关系,建立L02肝细胞染毒模型,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质组成分,找出三氯乙烯处理后表达有差别的蛋白斑点,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱进行鉴定。结果当三氯乙烯浓度达到30μmol/L时,L02肝细胞增殖抑制率明显升高。选用40μmol/L三氯乙烯染毒的L02肝细胞及其对照细胞进行双向电泳,获得分辨率高、重复性好的电泳图谱。结果表明,三氯乙烯染毒的L02肝细胞蛋白点表达量升高2倍以上的有37个,蛋白点减少至1/2以下的有15个。利用质谱技术对差异蛋白点进行鉴定,肽质量指纹图谱初步鉴定了4个蛋白,肽质量指纹图谱和串联质谱进一步确定了11个蛋白。结论三氯乙烯能引起L02肝细胞蛋白表达改变。; 黄海燕刘建军庄志雄李习艺徐新云卫秦芝杨晓华; 关键词：三氯乙烯 L-02 双向电泳分析质谱鉴定

人DNA聚合酶β基因靶向RNA干扰重组子克隆及序列分析被引量：2: 2006年; 目的克隆用于人DNA聚合酶β(DNApolymerasebeta,Polβ)基因靶向RNA干扰的双链RNA(doublestrandRNA,dsRNA)寡核苷酸绿色荧光蛋白C1载体重组子“pEGFPC1pU6dsRNA”,为进一步研究人Polβ基因在环境化学污染物所致的DNA损伤修复中的作用机制作准备。方法依据Genbank中人polβ基因的cDNA序列,运用dsRNAoligonucleotidedesigner设计出用于RNA干扰用的dsRNA寡核苷酸序列,并以化学方法合成之。通过重组DNA技术将合成好的dsRNA克隆到含人pU6启动子的pSIRENRetroQ逆转录病毒载体上,以此重组子转化感受态E.coliDH5α,经氨卞青霉素筛选后进行扩增,并抽提质粒。运用EcoRⅠ和BglⅡ消化并回收“pU6dsRNA”目的片段,再将“pU6dsRNA”亚克隆到pEGFPC1上,获“pEGFPC1pU6dsRNA”重组子,并进行酶切鉴定和序列分析。结果经酶切鉴定发现,“pEGFPC1pU6dsRNA”载体重组子处于预期条带位置,序列分析显示与所设计的目的片段序列完全相符。结论作者克隆了用于人Polβ基因靶向RNA干扰的dsRNA绿色荧光蛋白C1载体重组子“pEGFPC1pU6dsRNA”,为进一步研究Polβ基因功能作好了准备。; 胡大林庄志雄何云纪卫东唐冬生袁建辉方道奎沙焱杨建平涂晓志胡恭华; 关键词：DNA聚合酶Β RNA干扰 DSRNA 重组子

蛋白质组学技术及其在毒理学应用的研究进展被引量：6: 2005年; 李习艺庄志雄; 关键词：蛋白质组毒理学二维电泳质谱

低剂量氢醌诱导hPARP-1蛋白正常及缺陷细胞适应性反应研究被引量：4: 2005年; 目的观察人胚胎肺成纤维细胞(HLF)正常及缺陷细胞在低剂量氢醌(hydroquinone,HQ)处理后能否诱导适应性反应,探讨PARP1蛋白缺陷与正常细胞诱导适应性反应与微核形成及细胞周期变化的关系,进一步阐明适应性反应形成机制。方法用低剂量HQ预处理细胞后,观察细胞和DNA对大剂量HQ攻击的适应性反应,从微核率及核异常率、细胞周期等方面测定细胞变化情况。结果在细胞整体活力水平,0.001～0.050μmolLHQ预处理可以提高细胞对攻击剂量80.0μmolL的耐受性;HLF、转染绿色荧光蛋白真核表达载体的HLF(HLFC)和转染hPARP1基因反义RNA真核表达载体的HLF(HLFP)细胞经HQ低剂量预处理及大剂量攻击后,各剂量组不同程度出现含微核和核异常细胞,G1、G2、S期细胞数分布均不相同。与同种细胞仅大剂量攻击比较,0～0.050μmolLHQ预处理的HLF、HLFC及HLFP细胞微核率及核异常率差异均有统计学意义(P<0.05)。HQ预处理的HLF和HLFC细胞均出现G2期阻滞;HLFP细胞表现为G2期阻滞,1.000、2.000μmolL出现G1期阻滞。结论在低剂量HQ作用下,hPARP1蛋白缺陷细胞和正常细胞一样有适应性反应,但低于正常细胞,说明hPARP1蛋白在细胞适应性反应方面起重要作用,适应性反应与细胞周期调控等有关。; 唐焕文梁海荣庄志雄何云; 关键词：氢醌细胞动力学微核

三氯乙烯诱发SD大鼠产生免疫反应的模型研究被引量：13: 2004年; 目的　研究SD大鼠对三氯乙烯 (trichloroethylene ,TCE)免疫刺激的反应 ,拟建立大鼠对TCE免疫反应的模型。方法　背部皮内注射体积分数为 15 %的TCE免疫SD大鼠 ,1周 1次 ,免疫 5次后于大鼠左后足跖膜下注射TCE攻击 ,6h后称左右后足重量计算肿胀度。取TCE免疫大鼠心脏血 ,分离并培养单个核细胞。将培养的细胞与系列浓度的TCE共同培养 2d后 ,检测细胞酸性磷酸酶的活性 ,据此判断细胞的活化增殖程度。结果　TCE免疫大鼠攻击足肿胀度与空白对照组大鼠的相比差异显著 (P <0 0 0 5 )。体积分数为 3 %的TCE可使培养的大鼠血单个核细胞的增殖达到峰值。结论　重复皮内注射TCE ,可使SD大鼠产生某种免疫反应。SD大鼠的单个核细胞可被TCE刺激活化。; 陈晓燕庄志雄黄海雄吴敏仪; 关键词：三氯乙烯肿胀度酸性磷酸酶法 SD大鼠

PARP-1及其相关因子在适应性反应中的表达改变被引量：7: 2006年; 目的探讨PARP-1在适应性反应中的作用。方法低剂量甲醛预处理人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后,观察细胞对高剂量甲醛攻击的适应性反应。在MTT法检测细胞存活率的基础上,荧光定量PCR技术测定不同组细胞中PARP-1及其相关因子表达的变化。结果用低剂量甲醛预刺激可提高细胞对继后大剂量甲醛攻击的抵抗力;低剂量甲醛能引起PARP-1及其相关因子表达增加,产生适应性反应时这种增加尤为突出,其中PARP-1的表达量是对照组的147倍。结论低剂量的甲醛可使PARP-1活化,进而调节其相关因子DNA-PK、P53、NF-κB的表达,促使细胞免疫功能增强,启动适应性反应的产生。; 杨晓华庄志雄黄海燕李习艺卫秦芝; 关键词：PARP-1 甲醛实时荧光定量PCR

极低剂量氢醌诱导人胚肺成纤维细胞应答反应的研究: 2005年; 李习艺庄志雄刘建军卫秦芝黄海燕杨晓华; 关键词：低剂量人胚肺成纤维细胞氢醌蛋白质组学技术毒物危险度评价

低浓度三氯乙烯诱发L-02肝细胞蛋白质组异常表达: 2005年; 【目的】研究低剂量三氯乙烯对人L-02肝细胞蛋白质表达谱的影响,以助于阐明三氯乙烯引起细胞早期应答反应的分子机制。【方法】L-02肝细胞暴露于低剂量(3μmol/L)三氯乙烯24h后,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质,软件分析凝胶图像,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF-MS)对相关异常变化斑点进行鉴定。【结果】和对照组比较,低剂量三氯乙烯处理后L-02肝细胞蛋白质表达发生改变,初步鉴定出7个差异蛋白。低剂量三氯乙烯刺激后,上调的蛋白有核糖体样蛋白(similartoribosomalprotein)和SETprotein,下调的蛋白有异柠檬酸脱氢酶(isocitratedehydrogenase,NADP)和腺苷二磷酸-核糖基化因子鸟苷酸因子6(ADP-ribosylationfactorguaninenucleotidefactor6),微管-肌动蛋白交叉连接因子1(microtubule-actincrosslinkingfactor1)特异表达,肽基脯氨酰顺-反异构酶PPI(peptidylprolylcis/transisomerase)缺失。【结论】低剂量的三氯乙烯处理后,L-02肝细胞中的蛋白表达谱发生明显变化,这为三氯乙烯毒作用机制的进一步研究提供了线索。; 黄海燕庄志雄刘建军李习艺卫秦芝杨晓华; 关键词：三氯乙烯双向凝胶电泳蛋白质组

三氯乙烯职业中毒皮肤损害与HLA-DR、DQ基因相关性研究被引量：4: 2007年; [目的]从HLA-DR、DQ基因角度探讨三氯乙烯职业中毒皮肤损害易感的遗传背景。[方法]采用PCR- SSP(sequence specific primer)法对三氯乙烯职业中毒皮肤损害组(病例组)及对照组进行HLA-DR、DQ基因位点等位基因分型。[结果]HLA-DRB1位点在病例组检出11个等位基因,11个血清型;对照组检出13个等位基因,13个血清型。HLA-DQB1位点在病例组及对照组均检出5个等位基因,7个血清型。获得了各等位基因分布及基因频率资料,其中DRB1*09(DR9)和DQB1*03(DQ9)等位基因频率在病例组与对照组间差异均有显著性(P<0．05);OR值(95％可信区间)分别为DRB1*09(DR9)等位基因为0．174(0．037～0．830),DQB1*03(DQ9)等位基因为0．226(0．046～1．108)。[结论] DRB1*09(DR9)和DQB1*03(DQ9)等位基因可能是三氯乙烯职业中毒皮肤损害的保护基因。; 庾蕾庄志雄黄海雄俞慕华叶小明谢富焕; 关键词：三氯乙烯皮肤损害人类白细胞抗原基因多态性

国家重点基础研究发展计划(2002CB512904)

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