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厦门市科技计划项目(3502220134011)
作品数:
2
被引量:16
H指数:2
相关作者:
罗琪
黄正接
张传凯
徐毅
李文鹏
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相关机构:
厦门大学
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MDA
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作者
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黄正接
2篇
罗琪
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1篇
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徐毅
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张传凯
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刘刚
传媒
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1篇
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1篇
2016
1篇
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下调Oct4基因表达对MDA—MB-231乳腺癌干细胞生物学特性的影响
被引量:10
2015年
目的探讨下调转录因子Oct4表达水平对MDA-MB-231乳腺癌干细胞生物学特性的影响及其意义。方法应用无血清悬浮培养法从乳腺癌MDA-MB-231细胞中分离富集乳腺癌干细胞,流式细胞术检测CD44^+/CD24^-1/low细胞亚群的比例,小鼠皮下成瘤实验和紫杉醇抑制实验鉴定无血清悬浮培养法获得的MDA—MB-231乳腺癌干细胞,逆转录聚合酶链反应和Western blot法检测MDA—MB-231乳腺癌干细胞中Oct4的表达情况,并利用小分子RNA干扰片段干扰Oct4的表达,干扰实验设空白对照组(不转染任何siRNA)、阴性对照组(转染对细胞无任何干扰作用的siRNA序列)和Oct4siRNA组(转染对Oct4基因有干扰作用的siRNA序列)。分别利用四甲基偶氮唑蓝法、Transwell小室法和紫杉醇抑制实验,检测干扰Oct4表达后MDA—MB-231乳腺癌干细胞的增殖能力、侵袭能力和对化疗药物的耐药性。结果MDA—MB-231乳腺癌于细胞以悬浮球的形式生长扩增,MDA—MB-231乳腺癌干细胞CD44^+/CD24^-/low细胞亚群的比例(92.7%)高于MDA—MB-231乳腺癌细胞(76.6%,P〈0.05)。接种0.2×10^7个/ml细胞数,MDA—MB-231乳腺癌干细胞肿瘤体积为(124.60±13.65)mm^3,大于MDA-MB-231乳腺癌细胞形成的肿瘤体积[(68.20±9.99)mm^3,P〈0.01)]。紫杉醇对MDA-MB-231乳腺癌干细胞的半数抑制浓度(IC50)为(8.20±0.34)μg/ml,高于MDA—MB-231乳腺癌细胞[(4.40±0.48)μg/ml,P〈0.01)]。MDA-MB-231乳腺癌干细胞Oct4的表达水平高于乳腺癌细胞(P〈0.05)。下调Oct4蛋白的表达后,Oct4siRNA组MDA—MB-231乳腺癌干细胞从第3天开始其增殖能力低于空白对照组和阴性对照组(均P〈0.05)。侵袭性实验结果显示,转染72h后,与空白对照组和阴性对照组比较,Oct4siRNA组MDA—MB-231乳腺癌于细胞穿膜数量为(46.52±2.58)个,少于空白对照组[(77.29±
李文鹏
罗维远
徐毅
丁伟基
陈跃达
张传凯
罗琪
黄正接
关键词:
肿瘤干细胞
RNA干扰
BGC-823人胃癌细胞株SOX2基因的甲基化状态及其去甲基化的意义
被引量:6
2016年
目的观察BGC-823人胃癌细胞株中性别决定相关基因簇2(SOX2)启动子的甲基化状态,探讨SOX2基因去甲基化后对BGC-823细胞的生长和侵袭能力的影响。方法通过甲基化特异性PCR法(MSP)检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶(5-Aza—CdR)对BGC-823细胞SOX2启动子甲基化状态的影响,实时荧光定量PCR及蛋白印迹法检测经不同浓度5-Aza—CdR作用前后BGC-823细胞中SOX2的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测存活率,Transwell小室法和划痕实验检测侵袭及转移能力变化。建立裸鼠BGC-823胃癌移植瘤模型,40只移植瘤小鼠平均分为2组,腹腔分别注射磷酸缓冲液(PBS)、5-Aza—CdR,通过免疫组化、蛋白质印迹法检测5-Aza—CdR的抑瘤效果。结果5-Aza—CdR逆转了BGC-823细胞SOX2的甲基化状态,SOX2mRNA表达恢复,且恢复表达程度与5-Aza—CdR药物浓度呈正比。BGC-823细胞SOX2mRNA和蛋白的相对表达量低于正常胃黏膜GES.1细胞[(22.80±0.36)和(0.49±0.01)比(20.36±0.45)和(0.91±0.28),均P〈0.05],经系列浓度(0、1、10μmol/L)5-Aza.CdR处理后BGC-823细胞SOX2mRNA和蛋白的相对表达量相比差异均有统计学意义[(22.99±0.42)和(0.65±0.19)比(21.78±0.41)和(0.73±0.13)比(20.51±0.47)和(0.83±0.14),均P〈0.05]。经不同浓度(1、10、20μmol/L)处理后,BGC-823细胞的增殖速度明显减慢,与浓度为0μmol/L的对照组比较,各处理组细胞存活率差异有统计学意义(P〈0.05),且迁移、侵袭能力减弱(均P〈0.05)。裸鼠移植瘤结果显示:5-Aza—CdR组的最终肿瘤体积、最终瘤重较小[(286.6±37.5)mm^3和(325.2±32.2)mg比(540.7±42.6)mm^3和(694.7±36.1)mg,P〈0.05],生存期较长[(22.5±1.0)比(18.7-4-1.6)d,P〈0.05],SOX2蛋白表达量高[(0.96±0
魏斌
刘刚
蔡桦立
李庚鹏
黄河庆
罗琪
黄正接
关键词:
去甲基化
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