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国家自然科学基金(30530550): 作品数：11 被引量：87H指数：5; 相关作者：郭鑫盖新娜陈艳红杨汉春查振林更多>>; 相关机构：中国农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划北京市科技新星计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

脑心肌炎病毒VP1蛋白100位氨基酸的突变导致其对小鼠致病性的改变被引量：5: 2011年; 作为脑心肌炎病毒(EMCV)的天然宿主,感染小鼠能引发多种疾病,其中包括脑炎、心肌炎及糖尿病.本研究利用之前构建完成的EMCV分离毒株BJC3的野生型感染性克隆,采用定点突变方法构建了4个VP1第100位氨基酸突变的突变株感染性克隆(VP1第100位氨基酸分别突变为丝氨酸、丙氨酸、异亮氨酸和脯氨酸)并获得了拯救病毒.虽然各突变病毒及野生型亲本拯救病毒在BHK-21细胞上形成的噬斑大小有所不同,但各病毒在BHK-21细胞上的复制水平未见差异.通过对突变病毒致病性进行系统分析,探究了VP1第100位氨基酸在病毒致病性及感染后疾病表型中所起的重要作用.结果表明,异亮氨酸和脯氨酸突变病毒对小鼠的致死率降低,脑中病毒载量减少且脑组织损伤轻微,而丝氨酸和丙氨酸突变病毒表现了与野生型亲本病毒相似的高致病性.结果证实,EMCVVP1第100位苏氨酸在病毒的体内复制中起重要作用,其突变会导致病毒对小鼠致病性的改变.; 朱书盖新娜宫晓文郭鑫陈艳红杨汉春; 关键词：VP1 突变

猪脑心肌炎病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：10: 2007年; 利用纯化的猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,获得了2株稳定分泌抗EMCV VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为10B和11D。经ELISA测定,2株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1∶1 600和1∶800,接种小鼠的腹水效价分别为1∶2.56×106和1∶1.28×106。2株单抗的亚类均为IgG2a,均能特异性识别重组VP1蛋白,但它们识别VP1蛋白的不同表位。间接免疫荧光和免疫组织化学试验证实,2株单抗具有良好的特异性,均能够识别EMCV。; 董昕欣郭鑫杨汉春盖新娜陈艳红查振林; 关键词：猪脑心肌炎病毒 VP1蛋白单克隆抗体

猪脑心肌炎病毒P1和P12A3C基因重组腺病毒的构建及其在小鼠体内的免疫应答被引量：4: 2007年; 为研制脑心肌炎病毒（EMCV）新型活载体疫苗，首先将病毒核衣壳前体多肽P1与P12A3C串联基因分别插入穿梭质粒pDC316中，构建得到了重组穿梭质粒pDC316一P1和pDC316-P12A3C。将其分别与辅助质粒pBHGloxAEl、3Cre共转染293细胞，成功包装出重组腺病毒Ad-P1和Ad-P12A3C。免疫过氧化物酶单层试验确证，重组腺病毒可表达目的蛋白。分1次和2次肌肉注射免疫小鼠，然后通过间接ELISA试验和中和试验评价其诱导的特异性体液免疫水平。结果，Ad-P1诱导的VPl特异总抗体IgG水平显著高于Ad-P12A3C，但不能检测到明显的中和抗体（〈1：8）；Ad-P12A3C能诱导产生良好的中和抗体（1：32～1：128），用1×10^8TCID50剂量EMCVBJC3株攻毒，Ad-P12A3C免疫组能获得100％的保护，而Ad-P1免疫组仅能获得部分保护。以上结果表明，Ad-P12A3C可作为良好的EMCV腺病毒活载体疫苗。; 陈振海杨汉春郭鑫盖新娜贾红陈艳红查振林; 关键词：脑心肌炎病毒重组腺病毒免疫应答

规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查被引量：45: 2007年; 脑心肌炎病毒（EMCV）可引起猪的脑炎、心肌炎和母猪繁殖障碍，该病已在世界上多个国家暴发和流行。我国对EMCV及其所致疾病的研究工作还处于起步阶段，为了揭示EMCV在我国规模化猪场的感染情况，我们应用酶联免疫吸附试验（ELISA）对2005～2006年间采集自全国13个省市46个规模化猪场的3250份血清样本进行了EMCV抗体检测，结果显示，各省阳性率在39．64％～90％之间，平均抗体阳性率为72％，监测的46个猪场都存在EMCV感染，猪场感染阳性率为100％；对不同生长阶段猪群检测结果表明．EMCV抗体阳性率随猪龄的增长而升高，且不同生长阶段猪抗体阳性率差异极显著；成年公猪的抗体阳性率高于成年母猪。本项调查表明．我国规模化猪场已经普遍感染EMCV，这应引起我国养猪业警惕，并做好该病的综合防控。; 张家龙盖新娜马良陈艳红查振林郭鑫杨汉春; 关键词：脑心肌炎病毒酶联免疫吸附试验血清学调查

猪脑心肌炎病毒中国分离株的致病性分析被引量：3: 2008年; 马良盖新娜张家龙赵婷陈艳红杨汉春郭鑫; 关键词：脑心肌炎病毒中国分离株繁殖障碍 VIRUS 啮齿类动物

Construction of Full-length Infectious Clone for Encephalomyocarditis Virus BJC3 and Identification of the Rescued Virus: 2010年; The objective of this study was to construct the infectious clone of encephalomyocarditis virus (EMCV) BJC3 strain.The genomic cDNA of the virus was amplified by three overlapping segments using RT-PCR,and cloned into low-copy plasmid pWSK29 to construct the full-length cDNA clone pWSKBJC3/ w.The pWSKBJC3/w was in vitro transcribed and transfected into BHK-21 cells to rescue the virus.The results showed that the full-length cDNA clone was infectious and the virus could be rescued in BHK-21 cells.The rescued virus designated RvBJC3W was identified by RT-PCR and indirect immunofluorescence assay(IFA).The rescued virus had similar growth characteristics to its parental virus BJC3 and retained pathogenicity for mice.Our results indicate that the first infectious cDNA clone of EMCV in China has been successfully established and provides an essential tool for investigating the molecular basis of pathogenicity of EMCV.; ZHANG Guo-qingZHU ShuGE Xin-naGUO XinCHEN Yan-hongZHA Zhen-linYANG Han-chun; 关键词：PATHOGENICITY

猪脑心肌炎灭活疫苗的研究—猪脑心肌炎病毒种毒纯化及其生物学特性被引量：5: 2007年; 赵东升郭鑫杨汉春盖新娜陈艳红查振林; 关键词：脑心肌炎病毒生物学特性灭活疫苗纯化种毒

猪源脑心肌炎病毒的病原学与血清学研究: 脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)属于微 RNA 病毒科、心病毒属成员。EMCV 的宿主范围广,包括啮齿类动物、哺乳动物和灵长类动物等, 其中猪是感染 EMCV 最广泛和最严重...; 杨汉春郭鑫盖新娜张家龙陈艳红查振林; 关键词：心肌炎病原学; 文献传递

猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定被引量：62: 2007年; 从规模化猪场疑似病例组织病料中分离到5株脑心肌炎病毒（EMCV），对其中的2株（EMCV BJC3和EMCV HB1）进行了系统鉴定。结果表明，病毒粒子大小约为27nm，呈圆形；2株病毒均不耐酸，对氯仿不敏感，对胰蛋白酶敏感性有所不同，60℃加热1h可被灭活，二价阳离子对病毒没有明显的保护作用。用EMCV多克隆抗体作间接免疫荧光，分离毒株感染的BHK-21细胞的胞浆中可见特异性荧光。对分离毒株进行了VP1和3D基因的扩增和序列测定，结果表明，2个毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为99．49％，氨基酸序列的同源性为98．46％，与GenBank中EMCV毒株的核苷酸序列同源性介于81．61％～99．59％，氨基酸序列同源性在95．5％以上；3D基因扩增片段序列与其它毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100％。基于VP1基因的系统进化树表明，2株分离毒均位于进化树的主干上，变异度不大。由此表明，EMCV感染已在我国猪场存在。; 盖新娜杨汉春郭鑫吕艳丽王芳陈艳红查振林; 关键词：猪脑心肌炎病毒

猪源和鼠源脑心肌炎病毒分离株基因组的比较分析被引量：8: 2009年; 为了分析猪源和鼠源脑心肌炎病毒（EMCV）基因组的差异,对分离自同一猪场猪临床样本和鼠组织样本的2株病毒（GX0601和GX0602）进行了全基因组序列测定和比较分析。结果显示,2个分离毒株的基因组全长（包含poly A）分别为7 729和7 725 nt,核苷酸和氨基酸同源性均在99.8%以上。与国外毒株及国内已报道的分离株的序列比较结果表明,2个毒株与BJC3和HB1的核苷酸同源性为98.18%~99.41%,推导的氨基酸序列同源性为99.5%~99.7%,与国外分离株的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别介于80.53%~99.57%和93.1%~99.5%。基于基因组开放阅读框推导的氨基酸序列的系统进化分析表明,我国分离毒株与国外毒株PEC9、CBNU、BEL-2887A/91和EMCV-R的同源性较高,位于同一个亚群。研究结果提示,猪源与鼠源毒株的基因组具有很高的同源性,鼠是猪场EMCV感染的传染来源。; 赵婷张家龙盖新娜郭鑫周磊陈艳红查振林杨汉春; 关键词：脑心肌炎病毒基因组进化分析

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