广东省科技计划工业攻关项目(2005B10401034)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：刘志华骆抗先梁蔚芳曹虹杨洁更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒全基因重组腺病毒感染免疫研究被引量：3
- 2006年
- 目的用腺病毒载体将乙型肝炎病毒(HBV)基因组导入小鼠体内,研究HBV表达产物诱发的机体免疫反应。方法用AdEasy系统构建含HBV基因组的重组腺病毒AdHBV-WT,感染HepG2细胞后,分别用ELISA和westernblot检测细胞培养上清液和细胞裂解物中的HBsAg、HBeAg和HBcAg。AdHBV-WT经在293细胞中扩增、纯化和浓缩后,经滴鼻途径感染BALB/C小鼠,检测体液和细胞免疫反应。结果重组腺病毒AdHBV-WT感染HepG2细胞后,有效地表达出HBV的各种抗原。重组腺病毒感染小鼠可诱导抗-HBc的产生。3H-TdR摄入实验表明,AdHBV-WT可诱发小鼠产生HBcAg特异性的T细胞应答。结论HBV全基因重组腺病毒在体外可表达HBV的各种抗原,并可诱发小鼠产生HBcAg特异性的体液免疫和细胞免疫。
- 刘志华骆抗先胡静曹虹何海棠
- 关键词：乙型肝炎病毒重组腺病毒免疫反应
- 重组腺病毒介导的1.2拷贝HBV DNA在3种肝细胞中的表达
- 2009年
- 目的利用所构建的具复制能力的HBV重组腺病毒感染体外培养肝细胞,观察HBV的表达情况,从而初步了解该重组HBV腺病毒的生物学特性。方法以25pfu/细胞的重组腺病毒感染3种肝源性细胞株:人肝癌细胞株HepG2、人正常肝细胞株L02和禽肝细胞株LMH。感染3d后以RT-PCR检测3种感染肝细胞中的HBV mRNA;HBV荧光定量PCR检测培养上清中HBVDNA;ELISA检测培养上清中HBsAg和HBeAg。结果3种被感染肝细胞均被检测到HBV特异的mRNA;培养上清中HBV DNA、HBsAg和HBeAg的表达量随时间而增加。结论重组腺病毒可以介导HBV在该3种不同来源的肝细胞中建立HBV的感染状态。
- 梁蔚芳刘志华骆抗先
- 关键词：乙型肝炎病毒重组腺病毒肝细胞
- 小干扰RNA分子对乙肝病毒复制的抑制作用研究被引量：2
- 2007年
- 目的筛选特异高效抗乙型肝炎病毒(HBV)的小干扰RNA分子(siRNA),评价其干扰效果。方法在HepG2.2.15细胞内导入筛选的3条特异抗HBV的siRNA分子,用实时荧光定量RT-PCR的方法,检测干扰后HBV的mRNA表达水平;Westernblot检测细胞上清中乙肝表面抗原(HBsAg),分析siRNA对HBV基因表达的抑制作用。结果导入特异siRNA分子细胞中HBV的mRNA表达量明显降低(P<0.05),上清中HBsAg含量显著减少。阴性对照细胞中HBV的mRNA含量和上清中HBsAg含量基本不变(P>0.05)。结论所筛选的siRNA分子能特异性抑制HBV的mRNA和蛋白的合成。
- 焦京曹虹周美娟刘志华丁振华
- 关键词：SIRNARNA干扰乙肝病毒表面抗原MRNA
- Ad-1.2乙型肝炎病毒感染HepG2细胞后HBV cccDNA的动态分析被引量：8
- 2007年
- 目的研究Ad-1.2HBV感染HepG2细胞后HBV的复制情况。方法携带1.2拷贝HBVDNA的腺病毒体外感染人肝癌细胞株HepG2,ELISA法检测培养上清中HBsAg、HBeAg的动态表达;利用质粒抽提试剂盒提取细胞内cccDNA,经绿豆核酸酶处理后,用特异引物进行实时定量PCR检测。结果Ad-1.2HBV感染HepG2细胞后,可有效表达HBsAg及HBeAg;感染后第1天即可在细胞内检出cccDNA,第4天达到高峰。结论Ad-1.2HBV感染细胞,可作为抗病毒药物筛选和评价的模型。
- 梁蔚芳刘志华杨洁骆抗先
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应
