国家自然科学基金(30200307)
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
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- 相关机构：中山大学暨南大学附属第一医院深圳市眼科医院更多>>
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- 抗凋亡基因bcl-X_L转染视网膜感光细胞的研究
- 2003年
- 目的 :探讨介导抗凋亡基因bcl-XL 转染视网膜感光细胞的有效方法。方法 :采用视网膜神经胶质细胞条件培养液体外培养的视网膜感光细胞 ;用脂质体LIPOFECTAMINETM2 0 0 0介导 pEGFP -C3 -bcl-XL 转染至感光细胞 ;采用滴度为 6 5× 10 12 pfu/L的重组腺病毒rAd -gfp -bcl-XL 转染感光细胞 ;在荧光显微镜下观察感光细胞中的绿色荧光蛋白表达情况来比较脂质体、重组腺病毒转染法的转染率 ;用免疫组化比较这两种方法转染的细胞中Bcl-XL蛋白水平。结果 :脂质体、重组腺病毒转染法的转染率分别为 0 1%、 60 % ,免疫组化示重组腺病毒转染的细胞的Bcl -XL 蛋白水平较脂质体转染的细胞高。结论 :在视网膜感光细胞的基因转染中 ,腺病毒介导的目的基因bcl-XL 的转染率及表达明显高过脂质体法 ,重组腺病毒介导的基因转染法是视网膜变性性疾病基因治疗的一种较理想方法。
- 罗燕唐仕波李加青梁小玲胡洁林少芬
- 关键词：抗凋亡基因BCL-XL基因转染视网膜感光细胞重组腺病毒
- 银杏内酯B对体外培养的大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响被引量：11
- 2006年
- 目的:观察银杏内酯B对体外培养的大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法:采用体外原代培养的大鼠视网膜神经细胞,建立谷氨酸损伤的视网膜神经细胞凋亡模型,与不同浓度的银杏内酯B(ginkgolide B,GB)共同培养,用MTT法测定神经细胞存活率;流式细胞仪检测神经细胞凋亡及其相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:谷氨酸(0·8mmol/L)作用后,视网膜神经细胞存活率降低。GB不同时间及不同剂量作用组与谷氨酸处理组比较,视网膜神经细胞内Bcl-2和Bax阳性蛋白表达及两者比值均有显著差异(P<0·01),细胞凋亡明显减少。结论:GB能剂量依赖性对抗谷氨酸兴奋性毒性,保护视网膜神经细胞,这一作用可能是通过促进Bcl-2蛋白表达并减少Bax蛋白表达,上调Bcl-2/Bax比值而抑制视网膜神经细胞凋亡来实现的。
- 孟晶唐仕波林少芬陈剑朱晓波李涛
- 关键词：二裂银杏细胞凋亡蛋白质BCL-2蛋白质BAX
- 银杏内酯B对N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜变性的保护作用被引量：6
- 2006年
- 目的观察不同剂量的银杏内酯B(GB)对N-甲基-N-亚硝脲(MNU)诱导的SD大鼠视网膜变性的保护作用。方法取出生后46d的SD大鼠86只,随机抽取6只为正常对照组;80只分为4大组,每组20只。随机分为模型对照组,GB大、中、小剂量组。各组每次4只分别于24h、48h、3、5、7d行右眼闪光视网膜电图(ERG)检查,并通过视网膜形态学分析测量中心视网膜的外视网膜厚度。结果ERG正常组a波振幅为(105·4±16·8)μV,b波振幅为(292·6±19·6)μV。模型对照组24h后,a波消失。GB各剂量治疗组a波消失时间分别为2、3、3d,小、中剂量组b波消失时间分别为5d和7d,大剂量组7d时b波振幅下降为正常的8%。中心视网膜厚度检查:正常组大鼠中心视网膜的外视网膜厚度为(98·4±1·8)μm。MNU处理7d模型对照组外视网膜厚度为(17·8±2·1)μm,而GB各剂量治疗组分别为(25·2±2·7)、(38·3±2·3)、(45·8±2·3)μm。结论GB对MNU诱导的实验性大鼠视网膜变性所致的大鼠视网膜光感受器细胞损伤和视功能损害具有保护作用,并且这种作用呈剂量依赖性。
- 孟晶唐仕波林少芬邓宏伟朱晓波丁小燕
- 关键词：银杏内酯B视网膜视网膜电图
- RCS变性大鼠感光细胞凋亡及其视网膜电图与CASPASE-9时空表达的关系研究被引量：1
- 2005年
- 目的:研究CASPASE-9在英国皇家外科学院(RCS)变性大鼠视网膜的时空表达状况与其视网膜电图 (ERG)以及感光细胞凋亡的关系,以探讨CASPASE-9在感光细胞凋亡中的作用。方法:不同日龄RCS变性大鼠,检查 ERG后处死取视网膜行CASPASE-9的免疫组化、荧光活力分析、WESTERN BLOTTING及凋亡TUNEL检测。结果:15及20 D 变性大鼠ERG B波潜伏期分别为(58．60±3．42)MS、(56．45±1．08)MS,振幅分别为(109．07±14．50)MV、(109．00±7．35) MV,两组间无显著性差异,25和30D组接近熄灭型。TUNEL阳性细胞只在变性大鼠的外颗粒层表达,25D最明显。 25D后的变性大鼠感光细胞内节可见明显CASPASE-9阳性表达,其余各组未见表达。20 D CASPASE-9表现出最大活力[(10．98±0．13)NMOL·G-1·MIN-1]。WESTERN BLOTTING分析显示CASPASE-9裂解条带在20 D时最明显,15 D组和对照组不表达。结论:CASPASE-9的表达与视网膜感光细胞凋亡、视功能丧失存在时空一致性。
- 朱晓波罗燕谢琳孟晶丁小燕李加青林少芬唐仕波
- 关键词：视网膜变性细胞凋亡
- Caspase-9抑制剂对RCS大鼠感光细胞凋亡抑制作用的研究被引量：1
- 2007年
- 目的:采用Z-LEHD-FMK进行体内实验,观察caspase-9抑制剂对RCS大鼠感光细胞凋亡的抑制作用。方法:32只18dRCS大鼠随机分4组,检查ERG后随机选择一眼为实验眼给予玻璃体内注射Z-LEHD-FMK4μg,对侧眼给予4μg2%DMSO作对照。各组分别在术后2d、7d、12d、17d行ERG检查,然后摘取双眼球,石蜡切片行HE染色及感光细胞凋亡的TUNEL检测,透射电镜观察视网膜超微结构。结果:实验眼注药后7dERGb波振幅达到最大(137.35±7.41)mV,17d时b波振幅为(57.91±9.27)mV,对照眼7d及以后各组ERG接近熄灭型;实验眼注药后12d视网膜外颗粒层才开始出现凋亡阳性细胞,17d更明显,对照眼强荧光的凋亡阳性细胞在术后7d已经很明显;光镜下注药后17d实验眼感光细胞外颗粒层细胞数尚保持有7-8层,对照眼仅余下2-4层细胞,视网膜厚度变薄;透射电镜下实验眼注药后17d可见部分感光细胞胞核、核仁固缩,对照眼从术后7d开始见感光细胞呈现凋亡改变。结论:Z-LEHD-FMK能够延缓RCS大鼠感光细胞凋亡,合适的caspas-es抑制剂在适宜的时机应用对视网膜感光细胞凋亡具有一定的抑制作用。
- 朱晓波罗燕谢琳高艺丁小燕马红婕陈浩宇唐仕波
- 关键词：视网膜变性感光细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9
- 米诺环素抑制谷氨酸诱导的大鼠视网膜神经细胞凋亡被引量：6
- 2008年
- 目的:观察米诺环素对谷氨酸诱导的大鼠视网膜神经细胞凋亡的抑制效应及其作用机制。方法:取原代培养的SD乳鼠视网膜神经细胞,随机分为正常对照组、米诺环素对照组(米诺环素20μmol/L)、谷氨酸组(谷氨酸1mmol/L)和米诺环素治疗组(米诺环素20μmol/L+谷氨酸1mmol/L)。干预1h后采用Annexin V/PI流式细胞仪计数凋亡细胞数量,同时检测Rh123以评估线粒体膜电位改变。干预12h后行MTT检测细胞活性;另取细胞培养上清液做一氧化氮合酶(NOS)的活力单位检测。结果:干预1h后,流式细胞仪Annexin V/PI检测凋亡细胞比例:正常对照组、米诺环素对照组、谷氨酸组、米诺环素治疗组分别为5.1%、4.3%、15.2%、8.3%。Rh123各组阳性率分别为67.1%、54.2%、27.5%、32.4%。干预12h后,MTT检测各组细胞吸光度均值分别为:0.093±0.008、0.099±0.012、0.038±0.008、0.088±0.016。治疗组与正常组之间无显著差异(P>0.05),谷氨酸组与其它各组之间均存在显著差异(P<0.05)。NOS活力单位检测,以正常对照组均数为1,另3组与其比值的均数分别为:0.987±0.219、1.513±0.472、1.176±0.259。其中谷氨酸组与其它3组之间存在显著差异(P<0.05)。结论:20μmol/L米诺环素可显著减轻谷氨酸诱导的视网膜神经细胞凋亡,其作用机制与稳定线粒体膜电位,以及抑制NOS活性有关。
- 高艺朱晓波罗燕谢素贞马红婕郭梦翔唐仕波
- 关键词：神经元视网膜米诺环素细胞凋亡
