国家自然科学基金(30771760)
- 作品数：3 被引量：28H指数：3
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- 相关机构：大连理工大学东北林业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 百合无症病毒CP基因的克隆及其RNAi载体的构建被引量：10
- 2009年
- 以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出了876bp的LSV CP基因,经Blast比对发现该片段与GenBank上发表的LSVCP基因序列高度同源,同源率98%,由该序列推导出的氨基酸序列相似性达到98%。应用Gateway技术将扩增的片段通过BP反应连接到入门载体pDONR201,并进行序列测定,再通过LR反应将目的片段插入到RNAi植物表达载体pH7GWIWG2(Ⅱ),成功构建了适合农杆菌介导的百合转化的RNAi载体。
- 徐品三尹雅蕾李玉花
- 关键词：CP基因克隆载体GATEWAY技术
- Gateway技术快速构建百合双价抗病毒RNAi表达载体被引量：6
- 2011年
- 为获得适合转化百合的双价RNAi表达载体,以感病百合叶片的总RNA为模板,分别扩增400bp左右的LSV和LMoVCP基因。通过重叠延伸PCR技术获得长约800bp的LSV-LMoV融合基因。利用Gateway技术,通过BP反应及LR反应将LSV-LMoV融合基因克隆到双元载体pH7GWIWG2(Ⅱ),成功构建了含2种病毒基因的RNAi表达载体pH7GWIWG2(Ⅱ)-LSV-LMoV。将构建好的双价表达载体导入农杆菌EHA105,PCR和测序表明所构建的载体及获得的工程菌与预期的完全一致。
- 徐品三白建芳刘纪文李焕改
- 关键词：百合无症病毒百合斑驳病毒RNAI载体重叠延伸PCRGATEWAY技术
- 无病毒百合组培种球快速繁殖体系的建立被引量：15
- 2009年
- 以铁炮百合(Lilium Longiflorum)感病种球为材料,对热处理后的种球进行了培养基附加物和移栽基质的优化,建立了无病毒组培种球快速繁殖体系。结果表明:以MS为基本培养基,当附加植物激素NAA和KT时能促进子球再生,再生率达86%以上,在0.2mg/LNAA和0.4mg/LKT的培养基中平均再生子球数显著增多;附加5mg/L多效唑培养基能促进子球增大,3mg/L多效唑有利于子球再分化;活性炭对子球增大无明显影响,但适当浓度的活性炭能提高培养子球的品质;高浓度蔗糖能促进子球增大,株的但高增对,加子但,球在处再珍理分珠后化岩培有∶养土抑鳞为制片3影∶的1响作成。为活蛭基率石质和∶移土子栽、球珍组再珠培生岩球率以,显其及著成珍下活珠降率岩,和但︰生处土长理作状为2况0基天最质子佳时球。,再3均7生能℃率达热只到处能较理达高随4的着0%成处左活理右率天,但数和LSV检出率明显低于未处理的种球,脱毒率达95%以上。
- 徐品三刘华夏
- 关键词：百合病毒检测
