上海市科委医学引导类科技项目(10411967100)
- 作品数：3 被引量：10H指数：1
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- CD133^+/ABCG2^+的人肺癌多耐药性肿瘤细胞亚群的分离及鉴定
- 2013年
- 肿瘤干细胞的多耐药性是导致肿瘤化疗失败的重要因素之一。因此,鉴定和明确耐药性肺癌干细胞亚群(cancer stem-cell subpopulations)的特征和机制是当前的热点。该研究从肺癌病人的肿瘤组织中分离出一个高表达CD133和ABCG2蛋白的细胞亚群。发现该CD133+/ABCG2+肺癌细胞高表达干细胞的生物标志,如:Nanog、Oct4、Sox2、Nestin、CD44、CD117、CD133和ABCG2等。不仅如此,这群细胞在体外具有高增殖性和高侵袭性,对于多种常用的化疗药物(如:顺铂和吉西他滨等)都具有耐受性。而且,少量的CD133+/ABCG2+肺癌细胞即可以在免疫缺陷小鼠体内形成肿瘤。为了研究耐药性机制,我们检测了CD133+/ABCG2+中ABCG2基因启动子区域的CpG岛(CpG islands)DNA甲基化修饰状态。实验结果表明,该细胞中,ABCG2基因启动子区域的CpG岛处于去甲基化修饰状态。综上所述,作者成功地从肺癌病人肿瘤组织中分离、富集得到了CD133+/ABCG2+细胞亚群,并利用该群细胞在体外建立了肿瘤耐药性研究模型。对于肺癌CD133+/ABCG2+细胞的研究可为开发肺癌个体化治疗和新型化疗药物的设计和研发提供理论依据。
- 赵雅瑞张立凡刘特
- 关键词：肺癌肿瘤干细胞耐药性
- 小干扰RNA抑制成纤维细胞激活蛋白3的表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制成纤维细胞激活蛋白3(fibroblast activation protein 3,FAP3)基因表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用流式细胞术从肺癌细胞株A549中分选出CD44+/CD133+的肺癌的肿瘤干细胞(cancerstem cells,CSCs)。将肺癌CSCs分为3组:空白对照组(不转染任何质粒)、siRNA-FAP组(转染靶向沉默FAP3表达的siRNA质粒)、阴性对照组(转染包含随机序列的siRNA质粒)。采用MTT比色法检测靶向FAP3表达的siRNA(siRNA-FAP3)转染12、24、48和72h后对细胞增殖的影响;采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测转染72h后细胞株中FAP3、Ki67的mRNA和蛋白质的表达情况;采用软琼脂克隆集落形成实验检测siRNA-FAP3对肺癌CSCs侵袭能力的影响。结果:转染48h和72h后,siRNA-FAP3组的细胞增殖抑制率[(24.67±1.08)%,(53.98±3.75)%]大于阴性对照组[(3.76±0.88)%,(4.53±1.01)%]及空白对照组[(2.34±0.41)%,(3.28±0.65)%],差异均有统计学意义(P分别<0.05和0.01)。转染72h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67基因的mRNA表达水平(0.32±0.06,0.18±0.02)显著低于阴性对照组(1.03±0.12,0.99±0.17)和空白对照组(1.02±0.09,0.97±0.11),差异有统计学意义(P<0.01)。转染72h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67蛋白表达水平(0.16±0.05,0.25±0.09)显著低于阴性对照组(0.49±0.26,0.47±0.13)和空白对照组(0.59±0.27,0.63±0.22),差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-FAP组细胞克隆形成率[(13.09±5.21)%]显著低于阴性对照组[(77.59±8.29)%]和空白对照组[(83.86±10.11)%],差异有统计学意义(P<0.01)。结论:转染siRNA可有效抑制肺癌CSCs中FAP3蛋白的表达,并且还可抑制CSCs的体外增殖和侵袭能力。
- 张立凡刘特
- 关键词：小干扰RNA肺癌干细胞增殖
- 姜黄素上调caspase-3和p53表达后对人肺癌干细胞增殖与侵袭的影响被引量：10
- 2013年
- 目的:探讨姜黄素干预人肺癌干细胞caspase-3与p53后对肺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用流式细胞仪分选技术从肺癌细胞株A549中分选出CD44+/CD133+的肺癌干细胞(carcinoma-initiating cells,CICS);用四甲基偶氮唑蓝比色法检测不同浓度姜黄素对肺癌干细胞增殖的影响;用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测肺癌干细胞系中caspase-3和p53的mRNA和蛋白水平;Transwell小室侵袭实验检测姜黄素对肺癌干细胞体外侵袭能力的影响。结果:姜黄素浓度增加至40μmol/mL后,姜黄素处理组的肺癌干细胞增殖抑制率大于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),姜黄素对肺癌干细胞体外增殖抑制呈显著的剂量依赖性(IC50为61.06μmol/mL)。姜黄素处理组肺癌干细胞中caspase-3和p53基因mRNA的表达水平(3.64±0.59,4.98±0.82)高于阴性对照组(1.00±0.04,0.99±0.07)和空白对照组(0.99±0.07,1.03±0.27),差异有统计学意义(P均<0.01)。姜黄素处理组肺癌干细胞中caspase-3和P53蛋白表达水平(0.65±0.12,0.43±0.05)高于阴性对照组(0.05±0.02,0.08±0.03)和空白对照组(0.09±0.03,0.12±0.17),差异有统计学意义(P<0.01和0.05)。姜黄素处理组侵袭细胞数(26±15)少于阴性对照组(82±13)和空白对照组(78±12),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:姜黄素能上调caspase-3及p53的表达,能显著抑制人肺癌干细胞在体外的增殖及侵袭。
- 赵雅瑞张立凡刘特
- 关键词：姜黄素肺癌干细胞CASPASE-3P53
